全 文 ：收稿日期:2011 － 01 － 08
* 通讯作者
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2011． 04． 007
细柱五加茎中 6 种化合物体外对人肺癌
细胞株 A549 的生长抑制作用
惠秋娣1，裴 慧2，钱士辉2*
(1．无锡市锡山医药有限公司，江苏 无锡 214024;2．江苏省中医药研究院，江苏 南京 210028)
摘 要 目的:观察细柱五加茎中 6 个化合物对人肺癌细胞株 A549 的抑制作用。方法:从细柱五加茎中提取得到
16 － α －羟 － 19 －贝壳杉烷酸、16αH，17 － isovaleryloxy － ent － kauran － 19 － oic acid、贝壳杉烷酸苷 A、紫丁香苷、松
柏苷、刺五加苷 D等 6 个化合物，采用 MTT法测定其对人肺癌细胞株 A549 的生长抑制。结果:发现化合物 16 － α
－羟 － 19 －贝壳杉烷酸、16αH，17 － isovaleryloxy － ent － kauran － 19 － oic acid、贝壳杉烷酸苷 A、紫丁香苷、松柏苷对
人肺癌 A549 细胞均具有不同程度的抑制作用，与空白对照相比具有显著性差异(P ＜ 0． 05)。刺五加苷 D 对人肺
癌 A549 细胞的增殖抑制率与其浓度成负相关，随着浓度的增加细胞生长抑制率不断降低。结论:6 个化合物呈现
不同的体外抗肿瘤作用，为细柱五加茎中的抗肿瘤活性成分。
关键词 细柱五加茎;肺癌;体外抗肿瘤作用
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2011)04 － 0032 － 03
Studies on Antitumor Activity of Six Compounds in
Acanthopanax gracilistylus Stems
Hui Qiudi1，Pei Hui2，Qian Shihui2
(1． Wuxi Xishan Limited Company of Medicine，Wuxi 214024，China;2． Jiangsu Province Institute of
Traditional Chinese Medicine，Nanjing 210028，China)
Abstract Objective:To investigate the inhibition effects of six compounds from Acanthopanax gracilisty-
lus on the cell growth of human lung cancer A549． Methods:MTT assay was used to evaluate the inhibi-
ting effects of 16α － hydroxy － ent － kauran － 19 － ocid，16αH，17 － isovaleryloxy － ent － kauran － 19 －
oic acid，kaurane acid glycoside A，syringin，coniferin，eleutheroside D on the proliferation of the A549
cell． Results:16α － hydroxy － ent － kauran － 19 － ocid，16αH，17 － isovaleryloxy － ent － kauran － 19 －
oic acid，kaurane acid glycoside A，syringin，coniferin，eleutheroside D significantly inhibited the prolifer-
ation of the A549 cell(P ＜ 0． 05)． Conclusion:six compounds are the antitumor components in Acantho-
panax gracilistylus．
Key words Acanthopanax gracilistylus stems;lung cancer;antitumor activity
细柱五加(Acanthopanax gracilistylus W． W．
Smith)为五加科植物，在我国广泛分布，为传统中
药，入药部位为干燥根皮，称五加皮，收载于中华人
民共和国药典(2000 年版一部) ，具有补肝肾，祛风
湿，强筋骨的功能，多用于小儿行迟，体虚乏力，水
肿，脚气，风湿等的治疗［1］。目前，五加皮均采自野
生，市场供应紧缺，为扩大细柱五加资源的综合开发
利用，本课题组对细柱五加茎的化学成分进行了研
究。对从其茎中分离得到 16 － α －羟 － 19 －贝壳杉
—23—
第 30 卷第 4 期
2011 年 8 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Resources
Vol． 30 No． 4
Aug． 2011
烷酸、16αH，17 － isovaleryloxy － ent － kauran － 19 －
oic acid、贝壳杉烷酸苷 A、紫丁香苷、松柏苷、刺五加
苷 D等 6 个化合物进行体外抗肿瘤作用活性初步
筛选，为进一步开发利用细柱五加资源提供参考。
1 材 料
1． 1 药品与试剂
16 － α － 羟 － 19 － 贝壳杉烷酸、16αH，17 －
isovaleryloxy － ent － kauran － 19 － oic acid、贝壳杉烷
酸苷 A、紫丁香苷、松柏苷、刺五加苷 D，由本实验室
制备，纯度均在 98%以上;DMEM 培养基(GIBCO，
450542) ;新生牛血清(民海生物工程有限公司，
080508) ;MTT (Amresco，0793) ;胰酶 (Amresco，
0458) ;二甲亚砜(Amresco，019D0404) ;5 －氟尿嘧
啶(天津金耀氨基酸有限公司，0710052)。
1． 2 细胞株
人肺癌细胞株 A549，购自中国科学院上海细胞
生物学研究所。
1． 3 主要仪器
HERA Cell 150 CO2 细胞培养箱(美国 Thermo
公司) ;Zeiss Axio Observer A倒置相差显微镜(日本
Olympus公司) ;Thermo Multiskan Spectrum 酶标仪
(美国 Thermo公司) ;MH － 1403 平版振荡器(海门
其林贝尔仪器制造有限公司)。
2 方 法
2． 1 化合物的提取和分离
将江苏盱眙县产的细柱五加茎用溶剂提取、萃
取、硅胶柱层析、Sephadex LH － 20 柱和 ODS 柱层
析、MDS柱层析以及重结晶等分离纯化方法，从石
油醚、乙酸乙酯和正丁醇部位分离得到化合物，通过
理化性质和波谱方法鉴定结构分别为:16 － α －羟
－ 19 －贝壳杉烷酸、16αH，17 － isovaleryloxy － ent －
kauran － 19 － oic acid、贝壳杉烷酸苷 A、紫丁香苷、
松柏苷、刺五加苷 D，经 HPLC 法测定，含量均达到
98%以上。
2． 2 细胞培养
将人肺癌 A549 细胞用含 10%灭活的小牛血清
DMEM完全培养基，置于 37 ℃饱和湿度、5%CO2 培
养箱内培养，细胞呈单层生长，达 80%左右融合时
传代，细胞消化采用 0． 25%的胰酶和 0． 02% EDTA
混合消化液。所有实验均在细胞的对数生长期进
行。
2． 3 MTT法测定肿瘤细胞的存活率［2］
取对数生长期的 A549 细胞，用 0． 25% 胰酶和
0． 02% EDTA 混合消化液消化，用含 10%小牛血清
的 DMEM培养基调整细胞密度 5 × 104 个 /mL，接种
至 96 孔培养板中，每孔 100 μL 细胞悬液，继续培养
24 h后，吸弃培养液，更换含不同药物浓度(30，60，
90 μmol·L －1)及溶剂对照的新鲜培养液，每个浓度
设 6 个复孔，并设空白调零孔。继续培养 48 h，每孔
加入 10 μL MTT(5 g·L －1) ，继续培养 4 h，吸弃上
清，每孔加入 100 μL DMSO，振荡 10 min，溶解结晶，
用酶标免疫检测仪测定 570 nm 波长处的吸光度
(A) ，计算细胞生存率。细胞生长抑制率(%) =
(A 对照 － A 用药)/A对照 × 100%，相同的实验重
复 3 次。
2． 4 统计学分析
结果均以 x ± s 表示，数据处理使用 SPSS 15． 0
统计软件进行单因素的方差分析，P ＜ 0． 05 认为有
统计学差异。
3 结 果
不同剂量的化合物分别作用于人肺癌 A549 细
胞 48 h，用 MTT法检测细胞的存活情况，发现化合
物 16 － α － 羟 － 19 － 贝壳杉烷酸、16αH，17 －
isovaleryloxy － ent － kauran － 19 － oic acid、贝壳杉烷
酸苷 A、紫丁香苷、松柏苷对人肺癌 A549 细胞均存
在不同程度的抑制作用，抑制率与药物浓度的增加
呈正相关，与不加药组对比均存在显著性差异(P ＜
0． 05)。其中，贝壳杉烷酸苷 A对人肺癌 A549 细胞
的生长具有较强的抑制作用。当浓度为 90 μmol·
L －1时，细胞抑制率为 47． 61%。16αH，17 － isovale-
ryloxy － ent － kauran － 19 － oic acid、紫丁香苷对细胞
的抑制作用弱，在浓度为 90μmol·L －1时抑制率均
低于 20%，而刺五加苷 D 对人肺癌 A549 细胞的增
殖抑制率与其浓度成负相关，随着浓度的增加细胞
生长抑制率不断降低。结果见表 1。
—33—
第 4 期 惠秋娣，等:细柱五加茎中 6 种化合物体外对人肺癌细胞株 A549 的生长抑制作用
表 1 化合物对 A549 细胞的生长抑制作用(x ± s，n = 6)
分组
浓度
(μmol·L －1)
OD值
抑制率
(%)
空白对照 0 1． 89 ± 0． 06 －
－ 16 － α －羟 － 19 －
贝壳杉烷酸
30 1． 76 ± 0． 07* 6． 62
60 1． 45 ± 0． 08* 23． 05
90 1． 36 ± 0． 16* 28． 03
16αH，17 － isovaleryloxy －
ent － kauran － 19 － oic acid
30 1． 85 ± 0． 13* 2． 11
60 1． 77 ± 0． 10* 6． 35
90 1． 67 ± 0． 11* 11． 64
贝壳杉烷酸苷 A
30 1． 65 ± 0． 09* 12． 70
60 1． 15 ± 0． 14* 39． 15
90 0． 99 ± 0． 01* 47． 61
紫丁香苷
30 1． 72 ± 0． 10* 8． 90
60 1． 67 ± 0． 09* 11． 66
90 1． 60 ± 0． 07* 15． 37
松柏苷
30 1． 45 ± 0． 06* 23． 32
60 1． 35 ± 0． 20* 28． 62
90 1． 29 ± 0． 11* 31． 69
刺五加苷 D
30 1． 51 ± 0． 15* 19． 93
60 1． 54 ± 0． 07* 18． 34
90 1． 69 ± 0． 05* 10． 70
与正常对照组比较:* P ＜ 0． 05
4 讨 论
肿瘤是人类健康的第一杀手，治疗肿瘤还没有
特效药。虽然通过手术和放化疗等治疗手段可使部
分肿瘤患者走上康复之路，但对晚期或全身情况较
差的肿瘤患者，手术也无能为力。放、化疗对某些病
灶确实有效，但副作用较大，而且有一定的致畸、致
突变等毒副作用，所以治疗肿瘤仍是一项十分艰巨
的任务。中药含有多种化学成分，具有不同的生物
学效应。中药治疗肿瘤历史悠久，有副作用小、成本
低等特点，所以从中药中开发抗肿瘤成分是目前抗
肿瘤研究的热点之一。
细柱五加 (Acanthopanax gracilistylus W． W．
Smith)为五加科五加属植物，在我国广泛分布，为传
统中药。古医书中有报道五加皮用于治疗骨癌、肝
癌、肾癌等肿瘤的记载，但缺乏有关五加皮抗肿瘤的
基础研究报道。单保恩用凝胶层析法初步分离、纯
化了五加皮抗肿瘤成分，结果表明中药五加皮在体
外对多种肿瘤细胞增殖有抑制作用，其抗肿瘤活性
与一种分子量为 64 kDa 的蛋白质成分有关［3］。由
于五加皮资源有限，历代对五加皮的应用均很混乱，
致使疗效不一，市场上正品难求。基于同一药用植
物不同药用部位常含有相同或相似的药用成分和生
理活性，可扩大药源和寻找更多新的活性成分的原
理，我们对其茎成分进行了抗肿瘤活性筛选。
化合物贝壳杉烷酸苷 A对人肺癌 A549 细胞的
生长具有较强的抑制作用，随着药物浓度的增加抑
制率也逐渐增加，当浓度为 90 μmol·L －1时人肺癌
A549 细胞生长抑制率达 47． 6%。16 － α －羟 － 19
－贝壳杉烷酸、16αH，17 － isovaleryloxy － ent － kau-
ran － 19 － oic acid、紫丁香苷、松柏苷对人肺癌 A549
细胞均存在不同程度的抑制作用，其中 16αH，17 －
isovaleryloxy － ent － kauran － 19 － oic acid、紫丁香苷
对细胞的抑制作用弱，高浓度时抑制率均低于
20%。刺五加苷 D(VI)对人肺癌 A549 细胞的增殖
抑制率与其浓度成负相关，随着浓度的增加细胞生
长抑制率不断降低。
本研究初步确定 16 － α － 羟 － 19 － 贝壳杉烷
酸、贝壳杉烷酸苷 A、松柏苷为细柱五加茎中的抗肿
瘤活性成分，为细柱五加资源的综合开发利用提供
了依据。
参考文献:
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 30 卷