全 文 ：林副产品　Ｎｏｎ－ｔｉｍｂｅｒ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ
ＦＯＲＥＳＴ　ＳＣＩＥＮＣＥ　ＡＮＤ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　 ５９　
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林
业
科
技
通
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板栗共生菌根食用菌固体接种剂制备的研究＊
郑来友
（中国林业科学研究院林业研究所，北京　１０００９１）
摘要：对大红菇（Ｒｕｓｓｕｌａ　ａｌｕｔａｃｅａ，菌株编号２０１４－１０）、红绒盖牛肝菌（Ｘｅｒｏｃｏｍｕｓ　ｃｈｒｙｓｅｎｔｅｒｏｎ，菌株编号２０１４－１４）和
美味牛肝菌（Ｂｏｌｅｔｕｓ　ｅｄｕｌｉｓ，菌株编号５０５５９）３种板栗共生菌根食用菌袋装固体接种剂的制备进行了研究，分别确定了
二级种培养和固体接种剂培养中最适营养液的种类，培养成功了质量稳定的固体接种剂。通过对上述３个菌种培养好
的固体接种剂在约２０℃室温下不同保存期菌丝的取样培养，分别确定了它们的最佳保存期和最长保存期，为固体接种
剂的异地运输及使用提供了依据。
关键词：板栗；菌根食用菌；固体接种剂
图书分类号：Ｓ６６４．２；Ｓ６４６　　文献标识号：Ａ　　文章编号：１６７１－４９３８（２０１５）１２－００５９－０４
ＤＯＩ：１０．１３４５６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｌｙｋｔ．２０１５．１２．０２２
＊本文来源于２０１３年中国林科院与浙江省省院合作科技项
目———“浙江省板栗林下优良菌根食用菌筛选及其利用的研究”
（２０１３ＳＹ０８））中的部分内容。
作者简介：郑来友（１９７１－），助理研究员，主要从事林木菌根的研
究与推广。
板栗（Ｃａｓｔａｎｅａ　ｍｏｌｌｉｓｓｉｍａ）是壳斗科栗属植物，
是一种果、材两用树种，其果实是一种经济价值很高
的干果，尤其中国板栗品质优良，涩皮易剥除，被誉为
“东方珍珠”；同时它又是一种典型的外生菌根树种，
林下常有多种菌根真菌子实体出现，其中多种均为优
良的菌根食用菌，例如红菇、牛肝菌等，它们不仅营养
丰富、口味鲜美，而且对树体还具有多方面的有益作
用［１］。菌根食用菌正成为森林除木材之外又一重要
产品和收入来源［５］。例如红菇富含甾醇、脂肪酸和游
离氨基酸，其粗蛋白含量占干物重的２６．７２％，可与豆
类籽实媲美［２］，干物总氨基酸含量为１４．７９％，个别种
更高，氨基酸中必需氨基酸占４８．９％，各种必需氨基
酸分别占总量的百分比值超过联合国粮农组织推荐
值 ，而且红菇有补血、治疗痢疾、抗诱变及抑制癌症的
药用及保健价值，可食并可提炼珍贵药物［３］。所以将
板栗种植与食用菌根菌栽培结合起来，发展板栗林下
优良食用菌根菌将是一条双赢的措施，既能促进树体
生长发育、延长盛果期、改良土壤提高土壤可持续性
生产力，又能较稳定地采收珍贵的菌根食用菌，拓展
林农的经济收入来源。目前国际上以生产菌根食用
菌子实体为目的的松属菌根合成技术已取得了一定
的进展［６］。而在壳斗科植物板栗上研究的很少，尤其
是目前我国一些地区板栗发展近年来已趋于饱和，目
前除需要进行逐步的树体更新之外，尤其需要引入新
的经济增长点，即向营建新型生态经济林———菌根食
用菌经济林方向发展［４］。但要实现上述目标，首要条
件是要有合格的菌根食用菌接种剂。菌根食用菌接
种剂与腐生型食用菌相比，具有生长速度慢、易污染、
对营养液要求严格等特点。
本文进行了板栗优良菌根食用菌袋装固体接种
剂的制备研究，已培养出能够直接用于板栗苗接种使
用的制剂，为培育板栗菌根食用菌苗木做准备。袋装
固体接种剂相比于液体接种剂来说，虽然培养时间要
长一些，但却具有保存期相对较长、使用方便、接种方
法多样、效果好、易于运输等优点，对于较大规模的异
地使用具有明显优势。
１　材料和方法
１．１　供试菌根食用菌种类及来源
本文供试食用菌根菌共３种：大红菇（Ｒｕｓｓｕｌａ
ａｌｕｔａｃｅａ），菌株编号：２０１４－１０，由中国林科院菌根研
究开发中心于板栗林中采集分离；红绒盖牛肝菌（Ｘｅ－
ｒｏｃｏｍｕｓ　ｃｈｒｙｓｅｎｔｅｒｏｎ），菌株编号：２０１４－１４，由中国
林科院菌根研究开发中心于板栗林中采集分离；美味
牛肝菌（Ｂｏｌｅｔｕｓ　ｅｄｕｌｉｓ）菌株编号：５０５５９，由中国农业
菌种保藏中心提供。以上菌种均为试管一级母种，培
养基为ＰＤＡ。
１．２　二级菌种的培养
采用直径９ｃｍ的玻璃培养皿，分别采用２种琼脂
培养基，分别为改良 Ｍ培养基和ＰＤＡＭ培养基，以上
２种培养基是菌根真菌培养中最常使用到的［１］。将试
管母种菌丝接种于培养基中间，２５℃培养箱中培养
７ｄ后，取其直径６ｍｍ的边缘菌丝圆片，再分别进行
继代培养，每个菌种每种培养基分别做１０皿，每隔３ｄ
观测１次，记录菌丝颜色、菌丝块生长变化。
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１．３　袋装固体接种剂制备
（１）选用圆直径１２ｃｍ、高３０ｃｍ的聚丙烯塑料
袋，加入１　５００ｃｍ３ 的蛭石，蛭石粒径约２～５ｍｍ，其
中混有３００ｃｍ３ 的细草炭土，此基质配方为中国林科
院菌根研发中心生产菌根制剂的常用配方［１］。加入
７５０ｍＬ营养液，营养液种类分２种，分别为改良 Ｍ营
养液和ＰＤＡＭ 营养液［１］。各做１０袋，用棉花塞封口
后于高压蒸汽灭菌器中１２１℃灭菌１ｈ，自然凉至室
温后待用。
（２）选用合格的二级菌种，在超净工作台上，将直
径１０ｍｍ的菌丝片移入上述塑料袋中的基质表面，每
袋放８片。每个菌种每种营养液各做１０袋。置于
２５℃培养箱中培养。每２周观测１次，记录菌丝生长
状况。
１．４　袋装固体接种剂活性测定
利用上述试验中选出的最适营养液进行固体接
种剂的培养，待菌丝长满整个菌袋后，基质内部硬实
充满菌丝后，原包装不变，保存于约２０℃的室温中，
分别于保存后３０ｄ开始取样，以后每１０ｄ取样１次，
直至第９０ｄ为止，在无菌操作的条件下，取菌袋中的
约绿豆粒大小的接种剂，分别置于其最适平板培养基
上，于２５℃培养箱中培养，观察菌丝是否生长，并记
录菌落生长的皿数、菌落直径、污染的皿数及菌落无
生长的皿数，从而判断经过一段时间的保存后接种剂
菌丝的活性，为将来制剂的运输和使用提供依据。
２　结果和分析
２．１　二级菌种制备中培养基种类的选择
选择了中国林科院菌根研发中心进行二级菌种
制备时最常用的改良 Ｍ 培养基和ＰＤＡＭ 培养基，通
过菌丝生长状况的对比，从而确定在板栗共生菌根食
用菌二级种培养中所用培养基种类。经过１次培养
和１次继代培养后，培养结果表明（见表１）：第１次培
养７ｄ后，大红菇（２０１４－１０）在ＰＤＡＭ培养基上的生
长速度和菌丝外观质量要优于改良 Ｍ培养基，经过继
代培养７ｄ后，仍表现出上述差别，即ＰＤＡＭ 培养基
上的菌丝生长更快，继代培养７ｄ时菌落平均直径可
达到６．６ｃｍ（而改良 Ｍ 培养基上菌落直径仅为５．８
ｃｍ），菌丝颜色更白，更浓密，生长势更好。可以确定
ＰＤＡＭ培养基更适合大红菇二级种的培养。
表１　各菌种二级种培养比较
菌种编号
２０１４－１０
（菌落平均直径／ｃｍ）
２０１４－１４
（菌落平均直径／ｃｍ）
５０５５９
（菌落平均直径／ｃｍ）
培养基种类 改良 Ｍ　 ＰＤＡＭ 改良 Ｍ　 ＰＤＡＭ 改良 Ｍ　 ＰＤＡＭ
第４天 ２．８　 ３．１　 ５．４　 ５．５　 ３．５　 ３．８
第７天 ５．２　 ６．０ 长满 长满 ６．７　 ７．０
继代第４天 ３．０　 ３．５　 ６．０　 ６．５　 ３．５　 ３．８
继代第７天 ５．８　 ６．６ 长满 长满 ６．２　 ６．８
菌丝颜色
较白，较浓
菌丝颜色更白
更浓密，生长
势更好
菌丝浓密，
粗长，白色
长势好
菌丝浓密，
粗长，白色，
长势好
菌丝颜色
灰白，菌丝
短
菌丝颜色
更白，生
长势更好
　　而红绒盖牛肝菌（２０１４－１４）在两种培养基上的
生长状况基本一致，差别很小，继代培养７ｄ时即可长
满整个培养基表面，菌丝浓密，粗长，并泛有淡淡的粉
红色。所以这两种培养基均可作为红绒盖牛肝菌二
级种培养基。
美味牛肝菌（５０５５９）在第１次培养和继代培养
后，菌丝在ＰＤＡＭ 培养基上的生长速度优于改良 Ｍ
培养基，继代培养７ｄ时，ＰＤＡＭ 培养基上的菌落直
径平均为６．０ｃｍ（而改良 Ｍ 培养基上的菌落直径平
均为５．１ｃｍ），菌丝颜色更白，菌丝短、密，生长势更
好。因此ＰＤＡＭ培养基更适合做美味牛肝菌二级种
的培养。
２．２　袋装固体接种剂制备
各菌种在菌袋固体基质中培养，通过观察记录菌
丝长势区别发现（见表２），大红菇（２０１４－１０）在
ＰＤＡＭ营养液菌袋中长势明显好于改良 Ｍ 培养液，
菌丝约４周长满菌袋固体基质表面，约８周长满整个
菌袋，菌袋硬实，固体基质中充满白色菌丝体。而改
良 Ｍ培养液的菌袋，菌丝生长速度要慢，培养８周时
菌丝体长到整个菌袋体积的４／５，固体基质内部也不
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硬实，说明基质内部菌丝体并未充满。结果表明，与
改良 Ｍ营养液相比，ＰＤＡＭ 营养液更适合于大红菇
固体接种剂的培养。
红绒盖牛肝菌（２０１４－１４）在ＰＤＡＭ 营养液菌袋
中和在改良 Ｍ 营养液菌袋中生长均很好，生长速度
快，约６周时即可长满整个菌袋，而且固体基质内部
硬实，充满了菌丝体。结果说明这２种营养液均适合
红绒盖牛肝菌固体接种剂的培养。同时说明红绒盖
牛肝菌对营养液中成分的要求并不是特别严格，尤其
对于矿物质种类的多寡耐受力较强。
美味牛肝菌（５０５５９）在ＰＤＡＭ营养液菌袋基质中
生长正常，约６周菌丝可长满固体基质表面，约１２周
时菌丝长满整个菌袋，固体基质内部硬实，充满菌丝
体，菌丝白色。而在改良 Ｍ 营养液菌袋基质中，菌丝
基本没有生长。原因可能是改良 Ｍ 营养液中矿物质
种类过于丰富，而美味牛肝菌可能对矿物质的耐受力
较差，但还需另设试验以验证。
表２　各菌种在不同营养液固体基质中生长情况
菌种编号
营养液种类
２０１４－１０
改良 Ｍ　 ＰＤＡＭ
２０１４－１４
改良 Ｍ　 ＰＤＡＭ
５０５５９
改良 Ｍ　 ＰＤＡＭ
菌丝生长状况 约１０周长满基质
表面，但内部并不
硬实。
约４周长满基质
表面，约８周长满
整个菌袋，内部硬
实，充满菌丝。
约４周长满 基质
表面，约６周长满
整个菌袋，内部硬
实，充满菌丝。
约４周长满基质
表面，约６周长满
整个菌袋，内部硬
实，充满菌丝。
基本不生长。 约６周长满基质
表面，约１２周长
满整个菌袋，内部
硬实，充满菌丝。
２．３　 固体接种剂活性测定
经过取样培养，结果表明（见表３），大红菇（２０１４
－１０）固体接种剂中的菌丝体在约２０℃温度下保存
６０ｄ后，菌丝体仍可生长，但较３０ｄ时生长速度明显
下降，保存８０ｄ后，菌丝基本无生长活性；红绒盖牛肝
菌（２０１４－１４）在保存７０ｄ后，菌丝仍具有生长活性，
但菌丝生长速度变慢，保存９０ｄ时，菌丝基本无生长；
美味牛肝菌（５０５５９）在保存６０ｄ后菌丝生长活性明显
下降，生长速度缓慢，保存８０ｄ时菌丝基本没有了生
长活性。
根据上述结果分析，为保证袋装固体接种剂菌丝
的生长活性，满足其与板栗的菌根合成要求，大红菇
最佳保存期应不超过５０ｄ，最长保存期不超过７０ｄ；
红绒盖牛肝菌最佳保存期应不超过７０ｄ，最长保存期
不超过８０ｄ；美味牛肝菌最佳保存期应不超过５０ｄ，
最长保存期不超过７０ｄ。
表３　固体接种剂不同保存期菌丝活性
菌株编号 天数 菌落生长的皿数／个 １周后菌落直径平均／ｃｍ 污染的皿数／个 菌落不生长的皿数／个
２０１４－１０　 ３０　 ９　 ５．２　 １　 ０
４０　 ９　 ５．０　 １　 ０
５０　 ７　 ４．１　 ２　 １
６０　 ５　 ３．０　 ２　 ３
７０　 ３　 ２．８　 ２　 ５
８０　 ０　 ０　 １　 ９
９０　 ０　 ０　 １　 ９
２０１４－１４　 ３０　 １０　 ５．５　 ０　 ０
４０　 ９　 ５．４　 １　 ０
５０　 ８　 ５．２　 ０　 ２
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（续表３）
菌株编号 天数 菌落生长的皿数／个 １周后菌落直径平均／ｃｍ 污染的皿数／个 菌落不生长的皿数／个
６０　 ８　 ４．１　 ０　 ２
７０　 ６　 ３．７　 ２　 ２
８０　 ２　 ３．０　 ３　 ５
９０　 ０　 ０　 ０　 １０
５０５５９　 ３０　 ９　 ５．０　 １　 ０
４０　 ８　 ５．０　 ２　 ０
５０　 ６　 ４．４　 ２　 ２
６０　 ４　 ３．５　 ２　 ４
７０　 ２　 ３．０　 ４　 ４
８０　 ０　 ０　 １　 ９
９０　 ０　 ０　 ０　 １０
３　结论
（１）本文通过对板栗３种共生菌根食用菌的培养
研究，分别确定了它们在二级种培养和袋装固体接种
剂培养时较适合的营养液种类。在３种菌根食用菌
固体接种剂制备过程中，二级种培养和固体接种剂培
养所用营养液种类基本一致，即大红菇（２０１４－１０）二
级种培养用 ＰＤＡＭ 较适合，其固体培养时也是
ＰＤＡＭ较适合；红绒盖牛肝菌（２０１４－１４）则为改良 Ｍ
和ＰＤＡＭ２种均适合其菌丝生长；美味牛肝菌（５０５５９）
则为ＰＤＡＭ较适合其菌丝生长。改良 Ｍ 和ＰＤＡＭ
营养液配方是中国林科院菌根研发中心在菌根菌培
养中最常用的２种营养液，虽然适用于本文３种菌根
食用菌的培养，但其配方成分应该还有进一步优化的
余地，在下一步研究中还将继续探讨。
（２）通过对培养好的固体接种剂在约２０℃室温
下不同保存时间菌丝的培养测定，确定了上述３种板
栗菌根食用菌最佳保存期和最长保存期，其中大红菇
（２０１４－１０）最佳保存期为不超过５０ｄ，最长可保存
７０ｄ；红绒盖牛肝菌（２０１４－１４）最佳保存期为不超过
７０ｄ，最长可保存８０ｄ；美味牛肝菌（５０５５９）最佳保存
期为不超过５０ｄ，最长可保存７０ｄ。在实际应用中，
随着保存和使用环境温度的上升，其活性维持期还会
相应的缩短。因此在实际育苗接种中，在条件允许的
情况下应该尽量缩短接种剂保存的时间，最好不超过
３０ｄ，否则会直接影响菌根合成效果。
（３）以上３种菌根食用菌在理论上均是板栗的共
生菌根菌，且大红菇和红绒盖牛肝菌菌种就采集分离
自板栗林下，但经过固体培养后，其菌丝体与板栗苗
的菌根合成效果如何，将另设育苗试验，其结果也将
另文报道。
参考文献：
［１］　花晓梅 ．林木菌根研究［Ｍ］．北京：中国科学技术出版
社，１９９５．
［２］　陈宇航，陈政明，林国华 ．红菇属真菌研究进展［Ｊ］．福建
省农科院学报，１９９９，１４（增刊）：１４０－１４４．
［３］　周亮齐，王玲仙 ．十多种常见野生食用菌氨基酸组成分
析［Ｊ］．中国食用菌，１９９１，１１（５）：２３－２６．
［４］　付绍春，谭琦，谭著名 ．生态农林业的新宠儿———菌根食
用菌［Ｊ］．中国食用菌，２００９，２８（１）：９－１２．
［５］　Ｗａｎｇ　Ｙ．Ｅｄｉｂｌｅ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ａｓ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｃｒｏｐｓ　ｉｎ　ｆｏｒｅｓｔ
［Ｊ］．Ｑｕａｒｔｅｒｌｙ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，２００１，（１９５）：２９９－３０４．
［６］　Ｊｅａｎ－Ｍｉｃｈｅｌ　Ｓａｖｏｉｅ＆ Ｍｉｃｈ　ｌｅ　Ｌ．Ｌａｒｇｅｔｅａｕ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ
ｅｄｉｂｌｅ　ｍｕｓｈｒｏｏｍｓ　ｉｎ　ｆｏｒｅｓｔｓ：ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａ
ｍｙｃｏｓｉｌｖｉｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１０
（８９）：９７１－９７９．★