全 文 ：487※分析检测 食品科学 2007, Vol. 28, No. 10
收稿日期：2007-08-31 *通讯作者
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30160001；30460001)
作者简介：古丽娜·巴克(1976-)，女，讲师，硕士研究生，主要从事生物化学与分子生物学研究。
分枝石蕊有效成分分析
古丽娜·巴克1，宋曼殳2，阿不都拉·阿巴斯3,*
(1.新疆农业大学动物科学学院，新疆 乌鲁木齐 830052；
2.首都医科大学公共卫生与家庭医学学院，北京 100069；3.新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046)
摘 要：分枝石蕊属于地衣植物中的石蕊科石蕊属的地衣植物，松萝酸是其主要成分之一。据实验证明，松萝
酸易溶于氯仿及丙酮，且在地衣显色反应中，松萝酸与KOH 反应显黄色；与KOH和NaC1混合液反应显深黄色。
松萝酸在丙酮溶液中是黄色斜方棱柱结晶，在甲醇溶剂中呈黄色针状结晶，在乙醇溶剂中呈黄色针状结晶，用笨-
乙醇(1:1)混合溶剂可将从甲醇及乙醇溶剂中提取出的粗品进行纯化，并得到松萝酸精品。本实验通过测定分枝石蕊
中的有效成分，为今后该类植物的开发应用提供一定的科学依据。
关键词：分枝石蕊；有效成分；提取
Analyse of Active Ingredients in Cladonia furcata
GULNAR Baki1，SONG Man-shu2，ABDULLA Abbas3,*
(1.College of Animal Sciences, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, China；
2.School of Public Health and Family Medicine, Capital Medical University, Beijing 100069, China；
3.College of Life Sciences and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, China)
Abstract ：Cladonia furcata is Cladonia furcata genus Cladonia furcata sections lichen in lichens plants, Usnic acid is one of
its main ingredients. Based on the experimental evidence, Usnic acid soluble in chloroform and acetone, and Usnic acid with KOH
react show yellow in Lichenss color reaction; Usnic acid add the mixture of KOH and NaCl react show dark-yellow. Usnic acid
show yellow oblique prism crystallization in the acetone liquors, and in the methanol solvent show yellow needle crystallization,
and in the ethanol solvent show yellow needle crystallization. Using the benzene-ethanol mixtures (l:1) can make the compound
is extracted from the Methanol and ethano, and can obtain pure crystallization of usnic acid. By measuring the active ingredients
of Cladonia furcata, we n know that such plants for the future of application development will provide a scientific basis.
Key words：Cladonia furcata；active ingredients；obtain
中图分类号：S718.3 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2007)10-0487-03
地衣是一类多年生独特的生物类群，是菌类与藻类
的共生体，菌类能从基质吸取水分和无机盐供给藻类，
并以菌丝体保护藻类防止干燥。自古地衣类便为人类利
用于医药方面。由地衣中提制抗生素，是当今最重要
而热门的用途。地衣类的原叶体内含有一些特殊的成
份，这些成份总称为地衣物质(lichen substance)，地衣
物质以结晶状态存于菌丝表面，通常不溶于水，仅能
以有机溶剂抽取。地衣物质至今已发现不少于220种，
且每年尚能发现三、四种新成分。山石蕊属中抽取的
松萝酸，在欧洲被制成一种乌斯诺药膏，对治疗烧伤
及皮伤等，较盘尼西林更为有效，可以抑制分枝杆菌
的繁衍。自从松萝酸于1844年第一次被分离出来，它
已经成为研究最广泛的地衣物质之一。对于松萝酸的抗
菌功能、化学性质及其在医药、环境监控等各个领域
的应用研究，可见于各种外文文献的报道。分枝石蕊
是地衣植物石蕊属的一种类型，松萝酸也是其主要成分
之一。本实验通过对分枝石蕊中有效成分的分析，为
今后该类植物的开发利用提供一定的科学依据。
1 材料与方法
1.1材料
分枝石蕊 采自新疆南山英雄桥附近。
1.2方法
各取分枝石蕊干粉250g装入两个平底烧瓶中，分
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A B
图4 黑茶浸素的微量结晶
Fig.4 Micro-crystallization of at ranorin
别加入500ml的氯仿及丙酮，浸泡24h，过滤，将所
得的滤液浓缩，分别得浓缩液A(氯仿)、B(丙酮)。
将浓缩液A、B置于2℃的冰箱中冷却，再将冷却
的浓缩液A、B进行过滤，去母液，得到沉淀物A、
B。
将沉淀物A、B合并上硅胶柱，然后依次用石油
醚-氯仿、甲醛、乙酸乙酯、丙酮、乙醇处理和硅胶
柱分离，得四种晶体。
1.3分析测定
测定化合物紫外光谱用752型紫外分光光度计，熔
点用Kofler显微测熔仪；制备薄层用硅胶板为青岛海洋
化工厂出品，规格为10×20cm；簿层展开剂A 系统：
甲苯-二氧六环-乙酸(90:25:5)；B系统：甲苯-乙酸乙
酯-甲酸(139:83:8)；C系统：甲苯-乙酸(85:15)，制备
薄层用A、C系统。
2 结果与分析
2.1晶体1的结构测定
用显微测熔仪测定晶体1(浅黄色、针状)熔点，每
个样品测三次，观察到当温度上升至202℃时，晶体周
围产生塌陷；当温度上升至204℃时，晶体完全溶解。
所以得到此物质熔点为202～204℃之间。溶解的温度范
围比较小，说明此物质为较纯物质且与已知的松萝酸熔
点一致。测定该结晶的Rf值，A系统中为0.7、C系统
中为0.71，与已知的松萝酸的Rf值一致。此外，以上
化合物在不同的溶剂系统中的薄层层析、显色反应以及
微量结晶图均同已报道的松萝酸(Usnic acid)一致[1-3](见图
1、2、3 )。
如图2所示，十五个样点均在同一直线上，且Rf
值相同，所以确定所提取的结晶为同一物质。
通过以上的数据以及图文材料可以证明，该种结晶
图1 不同浓度不同溶剂提取的松萝酸结晶薄层层析
Fig.1 Using different liquid concentration and different solvent is
extracted Usnic acid crystallization TLC picture
1 2 3 4 5 6 78 9 101112131415
图2 图1的示意图
Fig.2 Explanation of Fig.1
通过以上的数据以及图文材料可以证明，该种结晶
为黑茶浸素。
2.3晶体3的结构测定
用上述方法测定出晶体3(白色、片状晶体)的熔点
为122～124℃之间，溶解的温度范围比较小，说明此
物质为纯物质且与已知的原地衣硬酸的熔点一致。测定
该结晶的Rf值，A系统中为0.35，C系统中为0.37，与
已知的原地衣硬酸的Rf值一致[1-3]。通过以上的熔点数据
以及Rf值可以证明，该种结晶为原地衣硬酸。
2.4晶体4的结构测定
测定出化合物4(白色晶体)的熔点为203～206℃，
溶解的温度范围比较小，说明此物质为纯物质且与已知
的环萝酸的熔点一致。测定该结晶的Rf值，A系统中
为0.44，C系统中为0.51，与已知的环萝酸的Rf值一致
[1-3]。通过以上的熔点数据以及Rf值可以证明，该种结
晶为环萝酸。
A B
图3 松萝酸的微量结晶
Fig.3 Micro-crystallization of usnic acid
为松萝酸。
2.2晶体2的结构测定
用上述方法测定晶体2(红棕色、透明、棒状)的熔
点，得到此物质熔点为196～198℃之间。溶解的温度
范围比较小，说明此物质为纯物质且与已知的黑茶浸素
的熔点一致。测定该结晶的Rf值，A系统中为0.75，
C系统中为0.79，与已知的黑茶浸素的Rf值。此外，以
上化合物在不同的溶剂系统中的薄层层析、显色反映以
及微量结晶图同已报道的黑茶浸素一致[1-4](见图4)。
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3 结 论
从实验结果得知，分枝石蕊中松萝酸、黑茶浸
素、原地衣硬酸、环萝酸、甲硫基丁氨酸酯为其主要
的有效成分。
参考文献：
收稿日期：2007-07-18
作者简介：邵碧英(1973-)，女，高级工程师，博士，主要从事食品微生物检验研究。
沙门氏菌多重PCR检测方法的建立
邵碧英，陈 彬，汤敏英，吴 谦，张体银
(福建出入境检验检疫局，福建 福州 350001)
摘 要：采用CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA。对引物浓度、Taq DNA聚合酶用量进行
优化，建立了沙门氏菌属特异基因－hut基因(495bp)、hilA基因(490bp)、invA基因(284bp)和hns基因(152bp)间
的多重PCR检测方法，并进行了灵敏度测试。结果表明，建立的多重PCR检测结果与预期一致，二重PCR的检
测灵敏度与单一PCR的一致，三重PCR检测灵敏度有所下降。
关键词：沙门氏菌；基因组D N A；多重P C R；检测灵敏度
Development of Multiplex PCR Detection Method for Salmonella
SHAO Bi-ying，CHEN Bin，TANG Min-ying，WU Qian，ZHANG Ti-yin
(Fujian Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Fuzhou 350001, China)
Abstract ：The genome DNAs of Salmonella and some control bacteria were extracted by CTAB/NaCl method. The multiplex
PCR methods detecting synchronously among Salmonella genus speci l genes such as hut gene(495bp), hilA gene(490bp), invA
gene(284bp) and hns gene(152bp) were developed by optimizing the concentration of primers and the unit of Taq DNA
polymerase, and the detection limits were tested. The results showed that the detection results by multiplex PCR methods
developed were same as expect, and the detection limits of the duplex PCR was same as those of single PCR, while those of
triplex PCR were declined.
Key words：Salmonella；genome DNA；multiplex PCR；detection limit
中图分类号：TS207.4 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2007)10-0489-04
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沙门氏菌是最常见的食源性致病菌，也是食物传播
病原菌中研究最活跃的细菌。传统食源性致病菌的检验
方法往往需要花费很长的时间，许多快速、灵敏的分
子生物学方法已被应用于食品微生物的检验、鉴定，克
服了传统检验方法的缺陷，其中聚合酶链式反应
(polymerase chain reaction，PCR)已成为最普遍的食品微
生物分子生物学检验方法。近年来在PCR的基础上发展
了多重PCR(multiplex PCR，MPCR)技术，它是一种在
一个反应体系中加入多对引物同时检测多个目的片段的
技术，可以为单一模板也可以是几种不同的模板，其
反应原理、反应试剂和操作过程与一般PCR相同。多
重PCR在食源性致病菌的检验上已得到较好应用，可以
同时检测一种致病菌的多个基因，也可以同时检测多种
致病菌[1-4]。我们在综合他人研究的基础上[4-7]，合成多
对沙门氏菌属特异性引物，对PCR反应条件进行了优
化，建立了同时扩增沙门氏菌多对基因的同一PCR反应