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以及葡萄糖的吸收来降低餐后高血糖 。 因
此 , a 一葡糖昔酶抑制剂作为治疗糖尿病的一
种新药 , 对晚期糖尿病并发症 、 肥胖症及相
关疾病具有潜在的应用价值 。
在寻找 a 一葡糖昔酶抑制剂的过程中 ,
发现鸭拓草 ( e o m e l i
n a e o
mu
n i s ) 的 甲
醇提取物具有抑制 a 一葡糖昔酶 的作用 , 并
从中分离出 l 种毗咯烷生物碱 , 即 2, 5一二
轻 甲基 一 3 , 4 一二 轻 毗咯烷 ( D M D P , l ) ; 4
种氮杂环 乙烷生物碱 , 即 1一去氧曼野民 霉
素 ( 2 ) , l 一去氧野民霉素 ( 3 ) , Q 一同源野
尿霉素 ( 4 ) 和 7 一氧 一 p一 D 一毗喃葡糖基 a 一同
源野民霉素 ( 5 ) 。 利用粗提的猪小肠 a 一葡
糖昔酶来检测其抑制活 性 , 发现 当 以淀
粉 、 麦芽糖及蔗糖为作用底物时 , 成分 3
及 4 具有很强的抑制活性 , 其中 4 对以淀
粉和蔗糖为底物时酶的抑制作用更强 , 而
3 则对 以麦芽糖为底物时酶的抑制作用
强 。 成分 1 和 2 作用不及其余 3 种化合物 。
值得注意的是 , 成分 5 在 C 一 7 上的葡糖普
保持了与成分 4 相当的抑制作用 。 这五种
成分对市售商品酶的抑制作用较弱 。
化 合物 l 一 5 系首次从鸭拓草中提取
到 , 这 为鸭拓草治疗糖尿病 和流感提供了
药学基础 。
( 吕燕宁摘译 )
3 3 5 冬虫夏草浓缩培养液和木蹄热水提取
物的自由基清除作用 〔英〕 / 丫止 a g i .N 二 /
N a t r u a l M e d i e in e s 一 19 9 9
,
5 3 ( 6 ) 一 3 1 9一 3 2 3
各种与年龄有关的疾病如心肌缺血 、
炎症 、 肿瘤 、 糖尿病和 中风在某种程度上
都与 自由基有关 。 本次对冬虫夏草 ( I s ar ia
j即 o n i e a ) 的培养滤液 ( I J E ) 和木蹄 ( F o m e s
fo m e n t
a ir u s ) 热水提取物 ( F F E ) 以及 I JE
与 F F E 的混合物的 自由基清除活性进行了
研究 。
材料与方法 : 冬 虫夏草与木蹄均采 自
日本毛样树原始森林 。 冬虫夏草接种于液体
培养基中 , 再从冬虫夏草芽抱器中分离子囊
芽抱接种于高压消毒的培养基中 ( 20 伽m l 培
养瓶中含 0 . 3% 酵母提取物 、 0 . 5%葡萄糖
和 0 . 0 1 6% 肌昔 ) , 避光于 1 8℃ 培养 14 d 。
以过滤法除去菌丝 , 滤液经 10 0 0印m 离
心 6 0m in , 上清经 冻干得深棕色粉末 , 得
率为滤液的 .0 3% ( w /v) 。 木蹄担子果细粉
以热水提取 6 0 m in , 提取物经 3 0 0 rp m 离
心 10 m in , 上 清 液 经冻 干 得棕 褐 色粉
( F F E )
。 千粉得率为 0 . 4% ( w / v ) 。 IJE 和
F F E 以 6 二 1 混合作 为保健品 , 此比例 的
混合物也 用于实验 。 自由基活性测 定 : 以
E SR 分光仪分析 自由基 。 氧化锰用 作 内
标 。 用 已知量的 2, 2, 6, 6一 四甲基 一 4一轻基 -
呱咙信号高度强度比计算电子数 。 分别测
定超氧阴离子 自由基 、 轻 自由基和 D P P H
自由基 。
结果与讨论 : x J E 、 F r E以及 x JE与 r F E
( 6 : l) 的混合物都能有效清除 3 种 自由
基 。 在三个实验 样品中 F F E清除自由基活
性最强 , 对超氧 阴离子和 D P P H 的 I C S。值
分别为 6 2 . 6林g zm l 和 1 0 . 5“ g /m l , 而 I JE 与
F FE 的混合物对轻自由基的活性最强 , 在
l m g/ ml 浓度时清除率近 60 % 。 vi t c 对超
氧化物 自由基 、 轻 自由基和 D P P H 自由基
的 IC 5 0分别为 8 、 14 和 l林gm/ l , iV t E 对 D p p H
自由基的 IC S。 为 3 0林gm/ 1。 虽然这些覃类
植物的活性较 iV t C 和 vi t E 弱 , 但 由于作
为 日常食物摄入 , 不能否认其对与 自由基
有关疾病起重要的预 防作用 的可能性 。
( 聂淑琴摘译 )
3 3 6 六 君子 汤对白细 胞活化的抑 制作用
〔 日 二 厂村上和宪 刀 汉 方 医学一 19 9 9 , 2 3
( 5 ) 一 14 ~ 17
目的 : 观察六君子汤对 中性粒细胞 活
化 刺激传 导系 统 的 第二 信使— 细 胞 内C a Z+ 浓度以及细胞内 pH 值 、 环磷酸腺昔
( 。 A M P ) 浓度变化 的影响 , 以研究六君
子汤抑制中性粒细胞活化的作用机理 。
方法 : ①六 君子汤提取物颗粒 以磷酸
缓冲液 ( P B s , p H 7 . 4 ) 混悬 , 用超声波
击碎颗粒 , 6 0℃加热 3Om in 后过滤 , 调整
至 适宜浓度 ( 1 0一 10 0林g /m l ) 。 ② 以 比重离
心法 从健康人末梢血 中分离中性粒细胞 。
③以含有 l m M C a C I: 的 H E p E S 缓冲液调
整中性粒细胞 浓度为 5 0 0 0/ 闪 , 加入 六君
子汤 , s m i n 后添加细胞松弛素 B ( 5拼g /m l )
以及 加 L P ( l抖m ) 刺 激中性粒细胞 , 在
37 ℃下温育 3 0m in 后离心 , 使上清液与弹
性蛋 白酶合 成基质 S 一 2 4 8 4 反应 , 测 定释
放的弹性蛋白酶活性 。 ④活性氧的产生 :
以 P B s 调整中性粒细胞浓度至 30 0/ 川 ,
加入鲁米诺试剂 10 “ g/ m l , 然后添 加六君
子汤 , s m i n 后再加入 舰 L P ( l “ m ) 刺激
中性粒细胞 , s m in 后测定化学发光度 。 ⑤
用单克隆抗体标记在中性粒细 胞表面表达
的粘附分子 C D 18 , 并 以流式细胞仪进行
检测 。 ⑥细胞 内 C a Z ` 浓度及 p H 值的测定 :
将中性粒细 胞混悬于含有 10 % 胎牛血清
的即M l 16 4 0 培养液中 , 以 lF u o 一 3 一A M 作
为探针 , 添 加终浓度为 .0 3“ M 的 fM L P
刺激发光 , s m in 后以双波长荧光光度计测
定荧光强度 , 计算细胞内 C a Z ` 浓度 。 细胞
内 pH 值以 B C E C F 一A M 探针测定 的 fM L P
刺激 s m in 后的荧光强度变化表示 。 ⑦ 以
磷 酸 缓 冲 液 调 整 中性 粒 细 胞 浓 度 为
50 0 /闪 , 加入阻断 c A M P 分解 的异丁基 甲
基黄嗓吟 ( IB M X , 1 x 10 5M ) , 然后再添加
六君子汤溶液 , 在 37 “ C下温育 10 m in , 置
沸水 中 s m i n 中止 反应 , 1 0 0 0 0甲m 离心
1 0m in
, 上清 置 于 A mP r eP 柱中 , 提 取
c A M P
, 以 E I A 仪器测定 。 ⑧红细胞变形
能力的测 定 : 应用筛选程序测 定红细胞的
变形能力 , 即 由人的末梢血分离红细胞 ,
测定 l m l 的红细胞混悬液通过 5林m 滤膜
所需时间 。 上述实验分别进行 3 次 以上 ,
结果 以平均值 士 SD 表示 , 经 A N O V A 离
散分析后 , 进行统计学处理 。
结果 : ①六君子汤 1 0 、 5 0 ( P < 0 . 0 5 ) 、
10 卜g/ m l (P < 0
.
05 ) 能够浓度依赖性地抑
制 fM L P 刺激引起 的中性粒细胞弹性蛋 白
酶 的释 放 。 ② 六 君 子 汤 仅在 高 浓 度
( 1 0 抖g/ m l) 时抑制 fM L P 刺激 引起的中
性粒细胞活性氧释放 (P < .0 05 ) 。 ③仆IL P
刺激中性粒细胞时 , 细胞表面 C D 18 的表
达显著增加 , 六君子汤 ( 1 0 、 5 0 、 10 0协g m l )
能够浓度依赖性地抑制其表达 ( P < 0 . 0 5 ) 。
④ fM L P 刺激中性粒细胞时 , 细胞 内 C a Z -
浓 度迅速上升 , 其后逐渐减少 , 六君子汤
( 25
、
50 陀m/ l) 虽不 能抑 制刺激初 期的
峰值 , 但能够浓度依赖性地抑制刺激后期
的 细 胞 内 c a Z 十 浓度 。 用 不 含 c a CI : 的
H E P E S 缓冲液进行同样的试验 时 , 六君子
汤 则对细 胞 内 C a “ 儿浓度的升高尤抑 制作
用 。 ⑤ fM L P 刺激中性粒 细胞时 , 细胞内
p H 值一过性降低 , 其后逐渐恢复至刺激