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猪苓与其伴生菌在几种不同培养基上的生长特性



全 文 :猪菩与其伴生菌在几种不同培养基上的生长特性
邢晓科 , 郭顺星 ` (中国医学科学院一中国协和医科大学药用植物研究所 北京 l〕 ) `吟 )
摘要 : 目的 明确伴生菌 、猪茶单独培养以及二者共培养的生物学特性 。 方法 采用 3 种培养基 , 即麦扶培养基 ( WB )A 、 DP A
培养基和 s M培养基 , 观测猪答与其伴生菌单独培养及两者共培养的形态特征 。 结果 在相同培养基上猪茶与伴 生菌菌落形
态存在较大差异 ;两者分别在不 同培养基上菌落形态也不相 同 ;在 W B A及 1〕D A培养基上 , 两者共培养时可在接触界面 形成致
密的拮杭线 ;与伴生菌共培养后 , 猪答菌落表面出现大量 的菌丝束 。 结论 猪答与伴 生菌的 菌落形态完全 不 同 , 两者共培养
后在猪答菌落表面分化出大量的菌丝束 , 这是菌核分化前的一种反应 。
关键词 :猪羊 ;伴 生菌 ;生长特性
中图分类号川 2 82 . 7 文献标识码 : A 文章编号 : 10 1一 24 94 ( 2《X)5 )肠 一 俱17 一 以
S ot d y o n g or wt h
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猪荃 「` 八沂〕la “ n lb e la at ( eP sr . ) rF . 〕系多孔菌科
药用真菌 ,其菌核作为传统中药已有两千多年历史 。
近来发现猪等多糖可提高人体免疫机能 ,并有 良好
的辅助抗肿瘤活性 , 从而使猪荃的研究倍受关注 。
随着其药用范围的不断扩大 ,猪菩的野生资源 已受
到严重破坏 。 然而 , 长久以来在人工培养条件下使
猪菩菌丝分化出菌核并未获得成功 , 这无疑阻碍了
猪荃菌核的生产效率及规模 ,所以在人工培养条件
下使猪菩菌丝分化出菌核已是科研和生产中所急需
解决的问题 。
近来 ,我们从野生猪荃菌核 的穴中分离到一株
与猪荃菌核形成密切相关的真菌 , 称之为猪荃的伴
生菌 , 当伴生菌和猪荃共培养 45 d 后猪荃菌丝便可
分化出菌核仁` l 。 既然伴生菌来源于野生猪菩菌核的
穴中 ,说明它们有着相同的生长环境 ,并且长期共
生 ,共同进化 。 那么伴生菌和猪荃到底有什么区别 ,
为此本实验研究在不同培养基上两者单独培养及共
培养的生长特性 , 为明确伴生菌的生物学特性提供
依据 。
1 材料与方法
1
.
1 菌株来源
猪菩与伴生菌菌株均由本室保存 。
1
.
2 培养基配制
DP A 培养基 ( oP at 。 dext or se a g a r ) ( g · L 一 ’ ) : 马铃
薯 2田 、 葡萄糖 20 、 琼脂 巧 。 麦鼓培养基 ( W BA ,
矶aet bo ag r ) ( g · L 一 ` ) : 麦鼓 30 , 葡萄糖 20 ,
K H Z
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3
,
M爵04 1 . 5 , 琼脂 一5 。 sM 培养基仁2 ] (卿 -
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2 : N氏 N仇 1 . 0 ;葡萄糖 15 ; e2F +
基金项 目 : 国家“ 十五 ” 重大科技专项 “ 创新药物和 中药现代化 ”项 目( 2 (x〕I B7A 0l 6A 2) ;高等学校博士学科点专项科研基金项 目 ( 2仪 )30 23 0 35)
作者简介 : 邢晓科 ,男 , 助理研究员 ` 通讯作者 : 郭顺星 ,男 ,研究员 ,博士生导师 侧 : (0 10) 62 82 % 19 E一~ l : s x gu O Z以巧@ y al l侧〕 · c om · cn
中国药学杂志 2X( 巧年 3 月第 4D 卷第 6 期 (访动 月 l a rm J , 2记火, 5 乃么l r hc 月 b Z. 40 从 〕 . 6 · 4 17
表 1不 同培养基上猪荃与伴生菌菌落直径 的测定
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1
.
3 接种
取猪答 与伴生 菌平板菌种 , 用 0 . 5 C m 口径的打
孔器沿菌落边缘打孔 ,使其成菌片 。 每皿接人 1块 ,
置培养基 中央位置 ; 若 为共培养 , 则接人 两者各 1
块 ,置培养基两侧位置 ,相距 3 C m , 23 ℃黑暗培养 。
2 结 果
2
.
1 几种 不同培养基 上猪答与伴生菌的菌落直径
坝l定
猎荃与伴生菌在不同培养基上菌落生长结果见
表 l
2
.
2 不同培养基上猪苏 与伴生菌的生长特性
2
.
2
.
1 猪答菌丝在 3 种培养基上的生长 ,见表 2 。
2
.
2
.
2 伴生 菌菌丝在 3 种培养基上的形态 , 见表 3 。
2
.
2
.
3 在 3 种培养基 卜猪等与伴生菌共培养的形
表 2 猪答菌丝在 3 种培养基上的生长特性
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大数 从吧 A培养基 / c m 即A 培养基 / 〔二
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及 长满 8 . 3 2 8
24 长满 3 . 0
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2 8 3 3 , 2 5 丈)
驹 3 . 6 7 气 5 1
态 , 见表 4 。
培养 基
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菌丝牛长情况 菌落形状 气生菌丝 菌落基内分泌物
猪等菌份生 长J丛速 菌落扩展能力强 ,培
养至第 刀 人 . {滴扮长满整个培养面 , 菌
落平均生 长速度为 (J 37 ` !ft : · d 一 1
猪鉴菌分 , { _长 i丛速 . 菌落扩展能力强 ,培
养至第田 人 , }有钟 长满整个培养面 , 菌
落平均门长速度为 0 41 、 m · d 一 1
同心圆状明显 ;至 35 天时 ,菌丝体呈
绒 毛状 , 白色
较发达 , 菌落外围的菌丝 比较
稀疏
乓泌 天时 ,整 个培养从颜
色变为淡黄色
较发达 , 菌落外围的菌丝 比较
稀疏
至巧 大时 .在接种块周川
的培养基颜色变 为黄褐
色 ,外围培养基 链淡 黄

,日川刚较慢 菌落打展能力较弱 , 菌落
忖洲 长速度 为。引 (I 1I’ d一 l
同心圆状明显 , 至 35 天时 ,菌丝颜色
变暗 , 菌落表 面在接种块周围有
分泌物产生 . 分泌物起初是黄色
的 ,随培养时间的延长 . 最终变为
深褐色
菌落同心圆状明显 , 菌体呈纯自色 ,
菌落边缘菌丝浓密 ,至 35 d 时 , 菌
丝颜色变暗 , 有少量菌丝 柬产生
不发达 至书 天}讨,菌扮颜色变暗 , 卜 1 . J
培养基颜 色变化 本明
显 ,略呈淡黄色
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表 3 伴生菌菌丝在 3 种培养基上的生长特性
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培养毕
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菌升住_长情况 菌落形状 气生菌丝 菌落基内分泌物
菌舒 , ( 长迅速 、 闲落扩展能力强 ,培养至
从 人长丫两铭 个培养 向 , 菌落平均 牛长
速度为 。 科 flI ·以 {
极不发达 百幼5 天时 ,培养基颜色转
为深黄色
、星卜
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菌扮 }t 长健琦} .但菌落扩展能力极弱 , 整
个菌落直径在第 25 天仅 为 3力 。1 , 菌
落平均弓长速度为 0( ” 、。 ,· d 一卜 有人
最从内菌丝 .在前期的培养中并不明显
同心圆状不明显 ,菌丝在培养基表
面为极薄一层 ,颜色为灰白色至
淡黄色 ;至 35 天时 ,除接种块周围
的少量菌丝还保持白色外 ,其余
菌丝全部梦为黄色
整个菌落呈纯白色 ,在中央成团生
长 ,菌落高度达 。 , s cm , 整个菌落
认外表面看似一个绒毛团 , 菌体
蓬松 ,培养至约 35 天后 ,基内菌丝
全部长出培养面 , 从 而大大增加
厂菌落直径 、 由于长至培养面 的
不均 一性 . 从外形 仁看整个伴生
菌菌落呈莲花状 ,菌落颜色变暗
菌落边缘并不规则 . 呈齿状 ; 菌丝紧
贝却涪养面生 长, 灰白色 ; 至 35 天
时 ,伴牛菌菌丝逐渐老化 ,菌体变
为淡黄色
极发达 当臼5 天时 , 在 一开始 ”士长
的菌落卜方有 黄褐色分
泌物 , 而在基内生 长的
菌丝「方则没有
,
} 叹最慢 ,菌落打展能力极弱 ,到第刃 大
时 , 菌落 l’j 径也仅为 5 1 。 m , 菌落平均
扩展速度为 0 14 (l lI d 一 }
极不发达 至臼5 天时 , 菌落 卜方的土吝
养基变为黄色
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(j’h 阴 产刁ld nr , J . 2才火巧 憾 2八力 , Vo l .叨 肠 . 6 中国药学杂志 2 0 5 年 3 万第丽卷第 6 期
表 4
T曲 4
猪荃与伴生菌在 3种培养基上共培养的生长特性
Gm 州 th h c ~tens t i
s cd of ua l c ult切 e rs of` . 叨咖之肠山乙 阴d c om a P n l on fung 拐 n oth此 em 以 lia
培养基 菌丝生长情况 菌落形状 气生菌丝 菌落基内分泌物
WA B逐渐在接触界面形成白色的菌丝交织
区 ,随培养时间的延长 , 菌丝交织区
变得更加浓密 , 至第 25 天时双方菌
丝已长满整个培养面 ,在交织区形成
明显的拮抗线
猪荃气生菌丝较发达 ;伴生菌
有少量气生菌丝
至35 天时 , 拮抗线黄色
至褐色 ; 拮抗线两侧培
养基的颜色完全不同 ,
在猪菩一侧为淡黄色 ,
伴生菌一侧为深黄色
l

M , N
代从 伴生菌并不象单独在 p DA 上那样成团
生长 ,而是平铺在培养面上 , 与猪荃
菌丝相遇后同样形成白色的菌丝交
织区 ,随培养时间的延长 , 菌丝交织
区变得更加浓密并形成拮抗线
猪荃菌落上分化出大量的菌丝束 ,
菌落呈纯白色 ; 伴生菌无菌丝束
产生 ,菌落略呈灰白色 。 至 35
天时 ,猪荃菌落仍为纯白色 ,菌
丝束更加浓密 ; 伴生菌颜色变
暗 ,略有发黄 ; 拮抗线进一步成
熟 ,看似墙体状 , 已有结构的分
化 ,表皮颜色部分变褐
第25 天时猪荃菌落几乎长满半侧
的培养面 ,而伴生菌菌落却没有
长满半侧的培养面 。 猪荃菌丝
浓密 ,纯白色 ,看不出菌丝束 ;伴
生菌菌丝没有猪荃那样浓密 ,颜
色略暗 ,无菌丝束 。 至 3S 天时 ,
猪等菌落仍为纯白色 , 表面分化
出大量的菌丝束 ;伴生菌颜色明
显变灰 ,呈现老化趋势 , 与 25 d
时相比 , 菌落直径几乎没 有增
加 。 拮抗线形态与 w BA培养基
上基本相同
猪荃气生菌丝发达 ;伴生菌稍
有气生菌丝
拮抗线颜色为深褐色至
黑色 , 猪荃一侧培养
基颜色转为深黄色 ,
而伴生菌一 侧 . 在靠
近拮抗 线附近 , 培养
基为 深褐 色 , 沿远离
拮抗线 的方向 , 培养
基颜色逐渐变至淡黄

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sM 从猪等与伴生菌菌落开始接触至培养 在整个培养期间 ,双方菌丝均没有 在培养前期 ,猪荃有稍发达的 猪等菌落下的培养基为 l 一Q , R
的后期 ,并形成明显的拮抗线 , 只可 长满培养面 ;至第 35 天时 ,猪荃 气生菌丝 ;伴生菌无发达的 黄色 , 而伴 生菌 菌落
出双方菌丝的交织区 与伴生菌均呈现老化趋势 , 与在 气生菌丝 下的 培 养基为 深黄
第 25 天时相比 , 菌落直径都没 色 , 菌丝 交织 区呈黄
有增加 ;猪荃菌体转为灰白色 , 色
分化出少量菌丝束 ; 而伴生菌转
为深黄色
3 讨 论
由以上研究可以看出 , 猪菩与伴生菌在不同的
培养基上均有着不同的形态特征 ,在同一种培养基
上 ,猪荃与伴生菌的形态特征亦完全不同 。 可以明
显看出 , WB A 培养基适合猪荃和伴生菌菌丝生长 ,
双方菌落均有很好的扩展力 , 但不利于伴生菌气生
菌丝的生长 ; PD A 培养基亦适合猪荃与伴生菌菌丝
生长 ,但不适于伴生菌的菌落扩展 ,而利于伴生菌气
生菌丝生长 ;与 DP A 和 WB A 培养基相比 ,猪荃与伴
生菌在 SM 培养基上均表现出明显的生长劣势 。
猪等单独在 PDA 培养基上培养至第 35 天后 ,
表面有褐色液滴状分泌物产生 , 猪荃菌丝产生分泌
物已有文献报道 [’ 〕 ,在本实验所设的几个重复中均
是如此 ,而在其他两种培养基上一直没有分泌物的
产生 。 同样是在 PD A 培养基上 ,猪荃在与伴生菌共
培养后 ,却没有分泌物的产生 。 由此看来 , 猪荃菌丝
产生分泌物和培养基的种类有关 , 同时 , 伴生菌能抑
制猪菩菌丝分泌物的产生 。
猪菩菌丝单独在 W BA 上生长时 ,很少有菌丝束
的产生 ,而在与伴生菌共培养后则出现大量的菌丝
束 ;有关菌丝束的产生和菌核形成之间的关系在其
币画西孚茶惠 ,面玩下了万票丽落覃活丽
他真菌中已有报道 , 如 cS leor it uln or 价i 的菌核原基就是从单个的菌丝束或两条菌丝束交织处产生闭 。
在本实验中亦是如此 , 猪菩出现大量菌丝束不久便
有菌核原基的分化 。
猪荃菌丝与伴生菌菌丝共培养在 确卫A 培养基
及 PDA 培养基上均在中央位置形成 明显 的拮抗线 ,
并在培养的后期拮抗线 已有结构的分化 , 而在 SM
一直没有出现拮抗线 , 只隐约可见菌丝的交织区 ,这
种现象出现的可能原因是 SM 培养基并不适合二者
生长 ,在 SM 培养基猪等与伴生菌均处于生长劣势 ,
所以在这种劣势生长的条件下 ,双方对异体人侵的
抵抗力有所下降 , 所以不能形成明显的拮抗线 ;而在
场毛A 培养基及 刊〕A 培养基上双方都生长健壮 ,抵抗
力强 ,能形成明显 的拮抗线 , 且在 PDA 上形成的拮
抗线要较在 确吧A 培养基上强烈的多 。
通过本实验的研究 , 明确 了猪荃与伴生菌在不
同培养基上的菌落形态 , 尤其是在相同培养基上两
者相比 , 有着完全不同的菌落形态 。 两者共培养时
在适合两者生长的 WB A 及 DP A 培养基上能形成明
显的拮抗线 ,而在 V月3A 培养基上猪等菌落表面出现
大量的菌丝束 ,据此我们认为 W B A 培养基更有利于
品臼讼月功加 了, 2侧万 彻厄几人 , Vo l .刃 No . 石 · 4 19 ·
圈 1猪等菌丝及伴生菌丝在 3种培养基上的生长特性
A一 确吧人上培养 2 5天时的猪荃菌落 , 同心圆状明显沮 一 哪吧人上培养 35 天时的猪荃菌落 ,极少或无菌丝束产生 ; c 一 P DA上培养 25 天时的猪等苗落 ,气生苗丝较发
达 ; D 一 PD人上培养 35 天时的猪等菌落 ,出现褐色分泌物 ; E 一 场旧 A上培养 25 天时的伴生菌菌落 ,菌丝紧贴培养基表面生长 ,灰白色至淡黄色 ; F 一 W BA 上培养 35
天时的伴生菌菌落 ,除接种块周围的少量菌丝还保持白色外 ,其余全部变为黄色 ; G 一 n 从 上培养 25 天时的伴生菌菌落 ,高度达 0 . 5 。m , 似一个绒毛团 , 菌体蓬松 ; H
一 H 〕A上培养努 天时的伴生菌菌落 ,基内菌丝全部长出培养面 ,从而大大增加了菌落直径 , 由于长至培养面的不均一性 ,从外形上看整个猪等菌落呈莲花状 ;卜
哪 上培养 25 天时的猪等菌落 ,苗体呈纯白色 .气生菌丝不发达 ; J 一 sM 上培养 35 天时的猪等菌落 ,菌丝呈现老化趋势 ,颜色变暗 ,有少量的菌丝束产生 ; K 一 S M 上
培养 25 天时的伴生菌菌落 ,苗丝紧贴培养面生长 ,灰白色 ;气生菌丝极不发达伟一 骊 上培养 35 天时的伴生菌菌落 ,菌丝逐渐老化 , 颜色变为淡黄色 ; 菌落边缘呈
齿状 ; M 一 N 。 确旧A培养基上猪荃与伴生菌共培养至 35 天时的形态 。 M 一从正面看 ,猪等菌落仍为纯白色 , 菌丝束更加浓密 ,伴生菌颜色变灰黄色 ; 在双方接触界
面形成致密的拮抗线 ,似墙体状 ; N 一从反面看 ,可见两菌落之间的拮抗线 ,颜色黄色至褐色 ;在猪菩一侧堵养基的颇色为淡黄色 ,伴生菌一侧为深黄色旧 一 P 一 印A
上猪等与伴生菌共培养至 35 天时的形态 ; O 一 从正面看 ,拮抗线形态与在 场旧A上几乎相同 ,猪冬菌落仍为纯白色 , 表面分化出大量的菌丝束 .伴生菌颇色明显变
灰汪一从反面看 ,拮杭线非常明显 , 颜色为深揭色至黑色 ,猪等一侧培养基颜色转为深黄色 ,而伴生菌一侧 ,靠近拮抗线附近 , 培养墓为深揭色 ,沿远离拮抗线的方
向 ,培养基颇色逐渐变淡 ; Q一 R 一翎 培养基上猪荃与伴生菌共培养至 35 天时的形态 ; Q一 从正面看 ,猪等与伴生菌均呈现老化趋势 , 猪等菌体转为灰白色 ,气生菌
丝已不发达 ; 伴生菌转为深黄色 ; 在两者的接触界面并不形成明显的拮抗线 , 只可见双方菌丝的交织区 ; R 一 从反面看 ,猪等菌落下方的培养基呈黄色 , 而伴生菌菌
落下方的培养基呈深黄色 。
注 : G 一表示猪等 ; C 一表示伴生菌
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猪等菌核的形成 。
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