全 文 ：吉林农 业大 学学报 2 00 2 , 24 ( 6 、 : 25 一 2 6 , 3 3
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金顶侧耳的营养缺陷标记
姚方杰 , 李 玉
( 吉林农业大 学农学院 , 吉林 长春 130 1 18 )
摘 要 : 以金 顶侧 耳 (浅 u brt 。 。 ilr n ir 介at 。 少J M ) 一 o 2() 菌株 为供 试材料 , 通过 时袍 子进行 紫外诱 变 , 使其发 生
12 种单重营养缺陷 突 变 , 获得 不 同墓 l月型 的 营养缺 陷 突 变 菌株 3 株 , 发 生 l 种双重 营养缺 陷 突变 , 获得 双重
营养缺陷 突 变 菌株 1 株 , 总计 34 株 。
关键 词 : 金顶 侧耳 ; 营养缺 陷 突变 ; 标记 ; 紫外诱 变
中图分类号 : 09 3 3 ; 欣54 6 . 1 文献标识码 : A 文章编号 : l川 洲卜5 6 84( 2 o 2 ) 0 6 一0 2 5 一2
S t u d y o n th e A u x o t r o P h ic M a r k e r o f P l已u or tu s iC t对力iP ile a tU s
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A b s t r a e t :
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.
w h a t h a v e
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r e n t g e n o ty p
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金顶侧耳 ( I , l。 : , or t。 。 i , ir n 切 i le a t o s ; ,1 9 . ) 为东
北地 区特有的食药菌 , 不但营养丰富 , 味道鲜美 ,
而 且具有防癌 、抗癌等医疗保健作用 ,现已经可 以
周年栽培 , 在食用 一与药用方面都具有极 高的开发
潜力 ’ 一 , l 。 本试验利用 紫外 ( u V )诱变方法 ,对 金
顶侧耳进行营养缺陷标记 , 获得 的营养缺陷型突
变菌株将用于进一步的遗传和育种研究
1 材料与方法
1
.
1 供试菌株
供试菌株为吉林农业大学菌物研究所保存的
金顶侧耳 JN D 一 02 0 双核菌株 。
1
.
2 培养基的配制
1
.
2
.
1 营养缺陷型 鉴定 用培养基 将各种营养
元素溶液用 0 . 45 拼m 了 一 ar y s 一 t o ar id sc 25 S T E R -
几E ( K U R A B O夕过滤灭 菌 ,分别加人到最小培养基
中配制成氨基酸 、 碱基 、 . 维生素 、 酪蛋 白水解氨基
酸营养缺陷型鉴定用培养基及酪蛋 白水解物培养
基 。 分注于无菌塑料培 养皿 中 , 每个培养皿分注
10 m L
。 室温保存备用 。
1
.
2
.
2 其他培养基 其 他培养基按常规 方法配
制 。
1
.
3 试验方法
,
.
3
.
1 试验步骤 子实体培养一抱子印获得一
抱 子悬浊液制 备一 U v 处理一单抱分离 ~ 突变株
筛选一 营养缺陷型鉴定 一 ` 同一营养突变的不同菌
株通过 互补试验确定基 因型的异同 。
1
.
3
.
2 紫 外 线 照 射 方 法 取 浓 度 为
l x l o “ 个 /m L的抱子悬浊 液 , 置于距 巧 W 紫外灯
巧 c m 处照射 巧 一 40 5 , 然后进行涂层培养 。
1
.
3
.
3 突 变 株鉴定 单抱 分离后 , 分别接种到
lP 〕A 平板培 养基与 M M 培养基上 。 在 PD A 平板
基金项 目 : 中 日合作研究项 目资助
作者简介 : 姚方 杰 ( ]9 65 一 ) , 女 ,博士 , 副教授 , 主要从事 园艺设施环境调控 与食用菌育种研究
收稿日期 : 20 2一〔冷 一 10
DOI : 10. 13327 /j . j jl au. 2002. 06. 007
2 6 育 林 衣 业 灭 罕 罕 报 2砚义JZ 竹几
表 , 单核营养突变型菌株
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.
A u xo tor Ph ie m u at n t o f m o n o k a yr o n
菌株号
S定ar i n N o
.
营养缺 陷型
A u
x o t or Ph i e
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营养要求
N u t r i t i o n
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u l r e m e n t
人 gr l -
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-
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3
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-
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-
N i e Z
-
P a l〕 1 -
P a b Z
-
aP n l
-
dP
x l -
dP
x
Z
-
精氨酸
腺 嗦吟
腺嗦吟
腺嗦吟
腺嗦吟
腺嗦吟
腺嗓吟
腺嗦吟
胆碱
胆碱
组氨酸
组氨酸
组氨酸
异亮氨酸
肌醉
亮 氨酸
亮 氨酸
蛋氨酸
蛋氨酸
蛋 氨酸
蛋氨酸
蛋氨 酸
蛋氨 酸
蛋氨 酸
蛋氨酸
蛋氨酸
烟酞胺
烟酞胺
P
一氨基苯 甲酸
P
一氨基苯 甲酸
泛酸
毗哆醉
毗哆醇
830391457洲姗17920812朋46侧淞1瑟
阴捕姗朋1395750聊36既绷念
培养基上正常生长 、在 M M 培养基上无法生长的
单核菌株 ,经 5 次继代培养仍未恢复突变者 , 作为
营养突变株移植到 P D A 斜面培养基上保存 。
1
.
3
.
4 突变株营养缺陷 型 的鉴定 将突变株分
别接种在氨基酸营养缺 陷型鉴定用培养基 、 维生
素营养缺陷型鉴定用培养基 、碱基核昔酸营养缺
陷型鉴定用培养基 、 酪蛋白水解物培养基 、酪蛋 白
水解氨基酸营养缺 陷型鉴定用培养基 、 最小培养
基 ( M M ) 、 P D A 平板培养基上培养 , 鉴定 营养缺陷
突变类型 。 只发生 1种营养元素缺陷突变的为单
重营养缺陷型突变株 ,发生 2 种或 2 种 以上营养
元素缺陷突变的为双重或多重营养缺 陷型突变
株 。
将多株发生同一营养元素缺陷的突变菌株 ,
进行互补性试验 。 将 它们一一配对接种在 P D A
平板培养基上培养 ,形 成的异核体双核菌株再接
种到最小培养基上 。 经培养后 , 如果该双核菌株
能正常生长 ,则证明 2 个菌株营养缺陷互补 , 2 个
突变株的突变基 因不同 ;如果该双核菌株无法生
长 ,则证明 2 个菌株的营养缺陷型相同 。 已经确
定营养缺陷型 的菌株移植到 P D A 斜面培养基上
保存 。
1
.
3
.
5 其他 方 法 子实体培养 、 抱子悬浊液 的
制备 、单抱分离等参照文献 〔6 ] 。
2 结果与分析
2
.
1 单重营养缺陷突变
本试验通过对金顶侧耳抱子进行紫外诱 变 ,
共计发生 12 种单重营养缺陷突变 ,获得不同基因
型的营养缺 陷突变菌株 3 株 (表 1 ) 。 其中精氨
酸缺 陷型 ( A r g l 一 ) 1 株 、 腺 嚷吟缺 陷型 ( A del 一
Ad e 7
一
) 7 株 、 胆碱缺陷型 ( Ch o l一 C ho Z 一 ) 2 株 、
组氨酸缺陷型 ( iH s l一 iH s3 一 ) 3 株 、 异亮氨酸缺
陷型 ( I l e l 一 ) l 株 、肌醇缺陷型 ( I n o l 一 ) l 株 、 亮氨酸
缺陷 型 ( 玩ul - 一 eL uZ 一 ) 2 株 、 蛋 氨 酸 缺 陷 型
( M e t l一 M e t g 一 ) 9 株 、 烟 酞胺 缺 陷型 ( N ie l一
iN cZ
一
) 2 株 、 P一氨 基 苯 甲酸 缺 陷 型 ( aP b l - -
aP b Z
一
) 2 株 、 泛酸缺陷型 ( aP n l 一 ) 1 株 、 毗哆醇 缺
陷型 ( Pdx l一 dP xZ 一 ) 2 株 。
如上所述 , 同一营养缺陷突变如腺嚷吟营养
缺陷突变 ,却具有 7 个不同的基 因型营养缺陷型
菌株 , 这 可 能 是 它 们 的营 养 合 成 途 径 不 同 所
致 仁? 一` ] 。
2
.
2 双重营养缺陷突变
本试验获得异亮氨酸与毗哆醇双重营养缺陷
突变 ( l e l 一 + dP xl 一 ) 的菌株 1 株 。 试验观察发
现 , 双重营养缺陷型菌株生长势弱 , 而且鉴定方法
比较复杂 。
3 讨 论
3
.
1 诱变方法
诱变方法通常包括物理诱变和化学诱变 。 化
学诱变产生的突变稳定 ,不易恢复突变 ,但所使用
的试剂多具有毒性 0[] 。 为 了安全起见 , 本试 验采
用最常用的紫外诱变法 。 该方法简便 、安全 , 但往
往存在突变株容易发生光复活现象 。 根据文献报
道 ,经过继代培养可以 克服这个缺点〔’ 0] 。 本 试验
对突变株进行 了 5 次继代培养 , 获得了稳定的营
养缺陷突变株 。
(下转第 3 页 )
第 24 卷 第 6 期 念大刃等 : 截 J即 1蜗 与二斑 叶蜗卵的发育起点温度 及杀卵剂 的药 玫实验
异 , 但药效最 高的尼 索 朗也 只有一 12 . 45 % 。 这说
明无论何种药剂 、何种蜗类 , 叶背喷雾法的平均药
效明显比叶面喷雾法高 。
5 种药剂 与 2 种叶瞒卵的互作药效用叶背喷
雾法进行多重比较的结果表明 :对于截形叶蜡 卵 ,
尼索朗 、 黑杀手和毒蜡恶的药效极显著高于其他
2 种药剂 , 药效均达 10() % ; 对于二斑叶一蟠卵 , 尼索
朗的药效达 10 0 % ,极显著高 于其他 4 种药剂 ,黑
杀手和毒瞒恶的药效分别达 95 . 20 % 和 90 . 04 % 、 〕
3 讨论
l) 截形叶蜗卵的发育起点温度高于二斑叶
蜡卵 , 而有效积温却低于二斑叶蜡卵 。 造成这种
结果的原 因是 当温度在发育起点温度 至 2 ℃ 之
间时 , 二斑叶蜡卵的发育速率 比截形叶蜡快 , 而温
度高于 2 飞 时截形叶蟠卵的发育速 率 比二斑 口卜
蜡快 。 笔者于 20 0 年 5 一 8 月间在野外观察 , 结
果是 : 春季二斑叶蜡卵的发育速率比截形 J叶一蜡快 ,
而夏季截形叶蜗卵的发育速率 比二斑叶瞒快 , 说
明本研究结论基本符合实际 。
2) 截形叶蜡卵对 5 种药剂 的敏感 度极 显著
高 于二斑叶瞒卵 ; 在防治截形叶瞒 和二斑叶蜡卵
时 , 最好选用尼索 朗 。 原因是在能把药液 直接喷
到蜡 卵 (叶 背 ) 的前 提 下 , 尼 索 朗 的药 效 均 达
10 0 %
。 其次是黑杀手 和毒蜡恶也可 以在生产上
应用 ,其药效均在 95 % 以上 。 金大勇等 , ; 于 2 0 0
年用叶背喷雾法对截形叶蜡雌成蜡进行药效实验
的结果是尼索 朗 、黑 杀手和毒蜡恶 的药效分别为
13
.
05 %
、
96
.
59 %
、
86
.
3() %
。 可以看出尼索 朗对瞒
卵的药效虽然很高 , 但对雌 成蜡的药效却很低 。
因此 ,不同蜡态应灵 活选用不同的杀蜡剂 ,若 同时
考 虑杀卵和杀成蜡时 , 应选用黑杀手和毒蟠恶 。
3) 无论应用何种药剂防治何种蜡类 , 叶背喷
雾法的药效明显比叶面喷雾法高 。 这是因为叶背
喷雾法是把药液直接喷到蜡 卵上 , 药量充足 ; 而叶
面喷雾法是把药液间接 (. 漂移扩散作用 )喷到蜡卵
_
[
,药量明显不足 。 通常 2 种叶蜗均在叶背产卵 、
井息 , 因此在防治时应尽量往叶背上喷药 。
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26 3
( 上接第 26 页 )
3
.
2 获得的营养缺陷突变株
营养缺 陷型菌株在工业上可 用来 生产 氨基
酸 、 核昔酸类物质 ; 在生化研究中可用来了解氨基
酸 、 核昔酸的生化合成途径 ; 在遗传研究中 , 可作
为杂 交 、 转 化 、 转 导或 基 因 克隆 的遗 传 标 记 菌
株 { ’ 。 一川 。 因此 ,本 试验获得的营养缺 陷型突变株
除了用于作者继续深人研究金顶侧耳基因连锁图
谱外 , 还可以为上述研究提供营养标记来源 。
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〔9 1 衣竖能宵 ,北本登 工 z 午 夕扮 内一核性才 子于 布了 忆 封寸
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14 14
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