全 文 ：一 2 9一 药物分析杂志 C五 jn J h P~ An a]20( )6 , 2 6 ( 1 )
H P L C 法测定毛叶钝果寄生中 3 种主要黄酮成分的含量
何美莲 , 陈家宽 , 周铜水 ’
(复旦大学天然药物研究中心 ,上海 200 4 33)
摘要 目的 :建立 H PCL 法测定毛叶钝果寄生中 3 种主要黄酮成分的含量 。 方法 :采用 H PL C 法 ,色谱柱为 z or hax BS 一 C , : 柱
( 4
.
6 m m x 2 50 m m
,
5 林m ) , 以乙睛 一 甲醇 一 1% 乙酸溶液 ( 1 8 : 1 3 “ 69 ) 为流动相 , 流速为 0 . 8 m L · m i n 一 ’ ,检测波长 2 54 n m ,测
定毛叶钝果寄生 中金丝桃昔 、 芦丁 、 广寄生昔的含量 。 结果 : 金丝桃昔 、 芦丁及广寄生昔的线性范 围分别为 16 . 72 一 836 ,
19
.
6 5 一 9 54 , 19
.
84
一 99 2 林g · m L 一 ’ ,相关系数均为 0 . 9 9 8 。 加样回收率 ( n = 5 )分别为 10 . 1% , 10 . 2 % , 20 2 . 8% : R s D 分别
为 3 . 4 % , 3 . 5% , 1. 7% 。 毛叶钝果寄生样品 中 3 种成分的平均含量 ( n 二 5) 分别 为 0 . 206 % , 0 . 0 69 % , 0 . 0 51 % ; RS D 分别为
3
.
1%
,
3
.
2%
,
2
.
7 %
。 结论 : 该方法准确 、 重现性好 ,可作为毛叶钝果寄生药材的质量控制标准 。
关键词 : 毛叶钝果寄生 ; H P L C ;金丝桃昔 ;芦丁 ;广寄生昔
中图分类号 : gR l7 文献标识码 : A 文章编号 : 0 254 一 1793 ( 2 0 6 ) 01 一佣 92 一 03
H P L C d e t e r m in a t i o n o f ht 此e m a i n fl s v o n e s in
了h工葱左扮5 n ig ar n s ( H a n c e ) D a n s e r
H E M e i 一 li a n , CH E N Ji a 一 k u a n , Z H O U T o n g 一 s h u i ’
( R e s e acr h C
e n t e r o f N at u alr l
〕
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,
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,
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c it v e : oT
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n a t i o n o f th e e o n t e n t s o f th r e e m a i n if a v o n e s i n
了匕笼 i l lus n 乙gT a ns ( H a n e e ) D a n s e r . M e ht o ds : C o n t e n t s Of h y p e ir n , ur t i n ,邵aj e v e ir n i n (T 1 x i l us n ig ar sn w a s m e a s u er d
b y H p LC 【a e o l u m n o f z o br ax S B 一 C ,: ( 4 . 6 m m x 2 5 0 m m , 5 协m ) , w i th m o b i l e p h a s e o f a e e to n i t ir l e 一 m e th a n o l -
l % a e e t i C a e id ( 15
: 1 3 : 6 9 )
,
n o w ar t。 0
.
5 m L
·
m i n
一 ’ ,
d e t e e t i o n w a v e l e n孚h of 2 5 4 n m 」. R e s u l st :仆e 。 a l sb ar t so n
e u vr e s s h o w e d 即 o d l i n e a ir 妙 i n ht e ar n g e o f 16 . 7 2 一 8 3 6 林g · m L 一 ` ( h即 e ir n ) , 19 . 6 8 一 9 5 4 林g · m L 一 ` ( ur t i n ) a n d
19
.
54 一 9 9 2 卜g · m L 一 ’ (即aj e v e ir n ) ; e o er l a t i o n e o e if e i e n t s w e r e al l 0 . 9 9 9 8 . hT e va e r a g e r e e o v e ir e s ( n = 5 ) w e r e
l 0()
.
l %
,
10 0
.
2 % a n d 10 1
.
8% ; R SD w e er 3
.
4%
,
3
.
5% a n d 1
.
7%
, r e s p e e ti v e l y
.
hT
e a v e r a g e e o n t e n t s (
n = 5 )
o f
th e th er e e o m p o n e n t s i n aT
x i l lo n ig ar sn w e er 0
.
2 0 6%
,
0
.
0 6 9% a n d 0
.
0 5 1%
, a n d R SD w e er 3
.
1%
,
3
.
2% a n d
2
.
7%
.
C o n c lus i o n
: A n ac e u r at e a n d er p r o d u e ib l e m e t h o d e a n b e u s e d fo r t h e 四 a l i t y e o n t or l o f C h i n e s e m e d i e i n e
Zh 尤 1 0 n lg ar sn ( H a n e e ) D a n s e r
.
K ey w o r ds
: 了h% i ll o n毕汀。 sn ( H a n e e ) D a n s e r ; H P L C ;场p e ir n ; ur t i n ; gu aj e v e ir n
中药桑寄生为桑寄生科植物桑寄生 几义 il 。
e人i、 二衡 ( D e . ) D a n s e r 的干燥带叶茎枝川 ,而四川寄
生 .T 、以hc 讹 en sn is ( 玩co m te ) Dan se r 、 毛叶钝果寄生
.T n 乙g 叹。 ( H an ce ) aD sn er 及红花寄生 sc 及蒯 l a p a rQ -
ist ica L
. 的干燥带叶茎枝在四川 、 云南 、广西等西南地
区也作为桑寄生药用 仁’ 〕 。 桑寄生具有补肝肾 、 强筋
骨 、祛风湿 、安胎之功效川 ,现代药理研究表明具有降
血压 、抗菌 、抗病毒 、强心 、 中枢镇静 、利尿等作用 仁’ 了。
有关桑寄生类药材中化学成分仅见零星报道 ,主要含
懈皮素 ( q u e cr e ti n ) 、 懈皮昔 ( q u e cr i t ir n ) 、 芦丁 ( ur t i n )
及广寄生昔 ( gu aj ve ier n) 等黄酮成分 2[, 4〕 ,其中广寄生
昔长期以来一直被误认为是篇蓄昔 ( 。 vi cu l面 n )[ ’ 〕 。
在桑寄生类药材的质量控制方面 ,仅见采用双波长薄
层扫描法测定此类药材中懈皮素的含量 [` 〕 ,未见采用
H PL C 法测定其中黄酮类成分的报道 。 本实验首次
采用 H P LC 法测定桑寄生类药材毛叶钝果桑寄生中
金丝桃昔 、芦丁及广寄生普的含量 ,该方法准确 、重现
性好 ,可作为毛叶钝果寄生药材的质量控制方法 。
· 通讯作者 服 I: ( 0 2 1 ) 65 64 2 20 6 , 139 18侧 J6 8 8 9 ; E 一 m ` I : st z ho u @ fu d an . e d u . 。 n
药物分析杂志 Ch in JP h r am Anl a200 6
,
26 ( l ) 一 93 一
1 仪器与试药
A g i l e n t 1 10 0 高效液相色谱仪 ( A g i l e n t T e e h n o l o -
g i e s ) ; S
a rt o ir u s B p l 1 0 5 电子天平 。
金丝桃昔 、 芦丁及广寄生昔对照品为本实验室
自制 ,其结构经 ’ H N M R 、 ” e NM R 、 M S 鉴定 , H P LC 归
一化法测定纯度在 98 % 以上 。 乙睛 、 甲醇 (色谱纯 )
进 口分装试剂 , 乙酸 (分析纯 )国产试剂 。 毛 叶钝果
寄生药材采自云南大理市 ,经周铜水博士鉴定无误 ,
凭证标本存于复旦大学植物标本馆 。
2 溶液的制备
2
.
1 对照品储备液 分别精密称取对照品金丝桃
昔 2 0 . 9 m g 、芦丁 24 . 6 m g 、 广寄生昔 2 4 . 8 m g , 甲醇
溶解 , 定容至 同一 25 m L 量瓶 中 , 即得金丝桃昔
( 5 3 6 林g
·
m L
一 ’
)
、 芦丁 ( 9 8 4 林g · m L 一 ’ )和广寄生
昔 ( 9 2 林g · m L 一 ` )混合对照品储备液 。
2
.
2 供试品溶液
2
.
2
.
1 制备方法的确定 将样品 60 ℃ 干燥 , 粉碎
过 6 0 目筛 , 精密称取样品粉末 3 . 0 9 , 5 份 , 精确加
人甲醇 3 0 m L [’ ] , 称定质量 ,分别超声 15 , 3 0 , 6 0 , 9 0 ,
1 20 m in 后 ,放至室温 ,再称定质量 ,用甲醇补足减失
质量 ,按本文色谱条件进样测定 ,并根据 “ 3 . 2 ” 项下
回归方程分别计算金丝桃昔 、 芦丁和广寄生昔的浓
度 ( 林g · m L 一 ’ ) 。 以成分浓度为纵坐标 ,超声提取时
间为横坐标 , 制作曲线 ( 图 1 ) , 结果表明三者都在
9 0 m in 提取完全 。 故确定供试品超声提取时间为
9 0 m i n
。
25 0 m m
,
5 林m ) ;流动相 : 甲醇 一 乙睛 一 1% 乙酸 ( 1:3
18 : 69 ) ;检测波长为 2 5 4 n m ;流速 0 . 5 毗 · 而 n 一 ’ ;进
样量 2 0 林L o
3
.
2 线性关系 分别精密移取金丝桃昔 、芦丁及广
寄生 昔 对照 品 混 合储 备 液 0 . 2 , 1 . 0 , 2 . 0 , 4 . 0 ,
8
.
0 m L于 10 m L 量瓶 中 , 用 甲醇定容 , 进样前用
0
.
45 林m 滤膜过滤 , 按上述色谱条件分别测定峰面
积 , 以峰面积为纵坐标 ( )Y ,进样量为横坐标 ( X )进
行线性回归 , 回归方程见表 1 。
表 1 3 种成分线性关系分析结果
T a b 1 T est R
e s ul 朽 o f il n e a ir yt Of T h er C
o m P on e l st
线性范围成分
(
e o m op
n e nt )
线性方程
( 1i
n e
ar fo mr
u la )
( li
n
ea
r 二ge
/ 卜 g · m L 一 l
金丝桃昔 ( hyT 屺 d n )
芦 T ( ur r i n )
广寄生昔 (即 aj e v e ir n )
Y = 22 66 X 一 4 2
. 该M 0 . 9 99 8 16 . 72 ~ 836
Y = 15 60 X 一 35
.
6 6 0
.
9 9 8 19
.
86 ~ 9 84
Y = 29 39 X 一 5 2
.
9 5 0
.
999 8 19
.
84 一 992
目甲.二论
15 3 0 6 0 9 0
r
/
. i n
图 1 金丝桃昔 、芦丁及广寄生昔的测得浓度与提取时间曲线
F ig 1 C o n e e n tart i
o n an d ex atr
e t t im e e u vr e s Of h yP e ir n
,
ru t i n & gu aj e ve ir n
、
1
. 金丝桃昔 ( h yp e ir n ) 2 . 芦丁 ( ru t i n ) 3 . 广寄生昔 ( gu aj e v e 五n )
2
.
2
.
2 制备方法 精密称取样品粉末 3 . 0 9 ,精确
加人甲醇 30 m L , 超声 90 m in , 并在超声后补足失
重 ,过 O· 4 5 林m 的微孔滤膜 , 即得 。
3 实验方法
3
.
1 色谱条件 色谱柱 : oz ht ax s B 一 C I : (4 . 6 ~ x
3
.
3 精密度试验 取同一混合对照品溶液 , 一 日内
连续测定 5 次 ,测得金丝桃昔 、芦丁和广寄生昔日内
精密度 ( n = 5 ) R SD 分别为 1 . 0% , 1 . 4% , 0 . 9 % ;另
取同一混合对照品溶液 ,连续测定 s d ,每天 1 次 ,测
定金丝桃昔 、 芦丁和广寄生昔 日间精密度 ( n 二 5 )
RS D 分别为 1 . 6% , 2 . 1% , 1 . 4 % 。
3
.
4 稳定性试验 取样品粉末 ,按 “ 2 . 2 . 2 ” 项制备
供试品溶液 , 按上述色谱条件在 。 , 1 , 2 , 4 , 6 , 8 , 12 h
测定 ,计算浓度 , 结果金丝桃昔 、芦丁及广寄生昔的
R SD 值分别为 4 . 0% , 3 . 9% , 3 . 7% 。 表明供试品溶
液在配制 12 h 内稳定 。
3
.
5 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品
粉末 5 份 ,每份 0 . 5 9 , 分别精密加人与样品相当的
金丝桃昔 、芦丁及广寄生昔 0 . 16 7 m g 、 0 . 19 7 m g 及
.0 9I 8 mg
,按 “ 2 . 2 . 2 ” 项制备溶液 ,按上述色谱条件
测定 , 以外标法计算回收率 。 结果金丝桃昔 、 芦丁和
广寄生 昔平均 回 收率 ( n 二 5 ) 分别 为 10 . 1% ,
10 0
.
2%
,
10 1
.
8% ; R SD 分 别 为 3 . 4 % , 3 . 5% ,
1
.
7%
。
3
.
6 样品测定 精密称取样品粉末 3 . 0 9 , 5 份 ,按
“
2
.
2
.
2
” 项制备溶液 , 精密移取此溶液及对照 品混
合溶液 (其 中含金 丝桃昔 、 芦 丁及 广寄生 普各
0
.
16 7 2
,
0
.
1 9 6 8
,
0
.
19 8 4 林g · m L 一 ’ ) , 按上述色谱条
件各进样 20 林L 进行含量测定 ,记录色谱图 (图 2 ) 。
结果样品中金丝桃昔 、芦丁及广寄生昔含量 ( n 二 5)
分别 为 0 . 2 0 6% , 0 . 0 6 9% , 0 . 0 5 1% ; R SD 分 别为
3
.
1%
,
3
.
2%
,
2
.
7%
。
一 9 4一 药物分析杂志 C hi n JPhma rA na l 20 6, 26 ( l )
6 10 t /一 i n
图 2 对照品 ( A ) 和样品 ( B )色谱图
Fig 2 Ch or amt
o gr ams
o f er fe er n e e s ub
s tan e e s ( A ) an d
s
am p l
e
( B )
1
. 金丝桃昔 ( h即颜 n ) 2 芦丁 ( ur it n ) 3 . 广寄生昔 (即 aj e v e ir n )
4 讨论
黄酮类是桑寄生类药材 的主要活性成分 , 长
期以来一直缺少质量分析方法和质量控制指标 。
本实验对毛 叶钝果寄生 中 3 种主要黄酮类成分
进行含量测定 , 为毛叶钝果寄生药材的质量标准
提供依据 , 同时也为含毛 叶钝果寄生的制剂质量
分析提供参考 。
实验中比较了不同比例的乙睛 一 乙酸溶液 、 甲
醇 一 乙酸溶液 、 甲醇 一 乙睛 一 乙酸溶液流动相的洗
脱分离效果 。 发现有机相若只用甲醇则柱压较高 ,
只用乙睛分离度不理想 。 经反复试验采用甲醇 一 乙
睛 一 1% 乙酸 ( 13 : 18 : 69 )为流动相达到了理想分离
效果 。
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, 《; 侧l ej o han M
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(本文于 20 5 年 3 月 23 日收到 )