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不同培养条件对隔山消悬浮培养细胞生长和萝摩米宁合成的影响



全 文 :1 4 7国外医药 · 植物药分册 20 0 4 年第 1 9卷第 4 期
液化学分析显示 , 给药组 和伴 随组大鼠的肌
酸配 、 总蛋 白 、 球蛋 白 、 转氨酶和丙氨酸转氨
酶的值 明显高于对照组 ,伴随组血尿素氮 、 白
蛋白和碱性磷酸酶明显高于对照组 。 皂昔混
合物使大鼠肝重增加 , 皋丸重量降低 , 提示该
植物皂昔混合物可能直接影响肝和肾功能 。
(筱 稚摘 )
2 0 峨参全草和细胞悬浮培养物中木脂素
类的植化研究 〔英 〕 / K o u lm a n A … / p l a n t a
M e d一 2 0 0 3 , 6 9 ( 8 )一 7 3 3一 7 3 8
鬼 臼毒 素 的 主要 来 源植 物 西藏 鬼 臼
尸od oP 勺 l u m he 二an dr u m R oy le 是一种濒危
植物 , 其商业利用受到极大限制 , 因此促使人
们寻找其他替代资源 。 曾有研究显示 了西藏
鬼 臼中的乌台树脂酚~ y a et in ~ 脱氧鬼 臼毒
素 ~ 鬼 臼毒 素的生物 转化途 径 。 峨参 A n -
ht ir sc
u : sy vl es tr i : 含有脱氧鬼臼毒素和其他
木脂素 。 由于其高含量的 2 , 7’ 一环木脂素 ,使
该植物可能成为鬼臼毒素生物技术产品的有
价值的资源 。 作者对峨参根进行了植化分析
并采用峨参悬浮培养法和加人 ya et in 、 脱水
普多脂 素和脱氧鬼 臼毒 素 ,进行 了生物转化
试验 。
1) 植化分析显示 , 峨参根含 13 种木脂素
类 成分 , 所 有 样 品 中均 含 脱 氧 鬼 臼毒素 、
y at ie n 和脱水普多脂素 , 某些样品 中还含有
扁 柏脂 素 与 当归酞 鬼 臼毒素 , 以及微 量 的
m o r e l e n s i n 与 b u r s e h e r n i n , 在几个样 品中还
首次测得牛芬子昔元 。 此外还检测到二甲基
乌 台树 脂 酚 、 d im e t h y l t h u j a p l i e a t i n 、 鬼 臼毒
素 、 7一 d r o x y y a 一 t e i n 和 7一轻基脱水普多脂素 。
2) 峨参地上部分 的细胞悬浮培养 。 将充分生
长的愈伤组织接种在含 5 种成分的 B S 液体
培养基 (为最佳培养基 ) 中 , 生长周期 14 天 ,
此期间传导性从 2 . 8 m s 减至 0 . 4 m s , 鲜重
从 1 51 9 / L 增至 23 8 9 / L ,干重从 7 . 6 9 / L 增
至 14 . 8 9 / L 。 该悬浮培养物仅产生微量 的脱
氧鬼 臼毒素 。 3) 生物转化试验 。 首先向峨参培
养液中加人 y at e in 和脱水普多脂素 , 以研究
峨参细胞培养物使木脂素环封闭 的能力 ; 然
后加人脱氧鬼 臼毒素 , 以研究闭环产物的代
谢过程 。 结果显示 ,加人脱氧鬼 臼毒素对细胞
培养物生长无明显影响 , 5 天后 ,其缓慢转 化
为鬼臼毒素 。 加人脱水普多脂素 ,未测得其转
化产物 。 加人 ya et in , 对细胞培养产生毒害作
用 ,且在亚毒性剂量 (8 m g )未测得任何转化
产物 。 总之 ,峨参悬浮培养试验显示对鬼 臼毒
素的经基化作用 , 该作用表明峨参细胞培养
物对脱氧鬼臼毒素转化 为鬼 臼毒素 ,是有用
的生物转换催化剂 。 诱导植物产生这种作用
将导致鬼臼毒素新资源的产生 。
2 2 1 不同培养条件对隔山消悬浮培养细胞生
长和萝摩米宁合成的影响 〔英〕/ S h in G H … /
B i o l P h a r m B u l l一 2 0 0 3 , 2 6 ( 9 )一 1 3 2 1一 1 3 2 5
隔山消 yC n a n c h u m 二 i适f bdr i i (M a x im . )
H e m sl e y 的根在韩 国民间用于 防治 老年病 ,
其所含的萝摩米宁 ( ga ga m in ien ,一种 街类生
物碱 )对醛氧化酶活性 和肝脂质过氧化有强
抑制作用 。 作者采用离体细胞培养方法 ,研究
了该成分在不同条件下的生物合成 。
隔山消种子经 20 天生长形成小苗 , 其茎
切成小片用于诱导愈伤组织 , 利用愈伤组织
建立细胞悬浮系 。 培养条件 : M S 液体培养基
中 2 , 4一D 的浓度分别为 0 . 1 、 0 . 5 、 1 . 0 和 2 . 0
m g / L
, 冷 白荧光 照 射或黑 暗 条件 , 光 周期
8一 1 6 h ,初始细胞浓度分别为 0 . 6 、 0 . 9 、 1 . 7
和 .2 5 9 l/ o m L ,初始蔗糖浓度分别为 3%或
5%
, 培养温度 25 ℃或 3 1 ` C 。 结果显示 ,细胞
国外医药 · 植物药分册 20 0 4 年第 1 9 卷第 4 期 1 7 5
生长的指数期在培养的第 1 5一 2天 ,而萝摩
米 宁合成高峰期在细胞生 长的静止期 (即培
养的第 2 天后 ) ,并在细胞死亡期时达峰值 。
2
,
4一 D 浓度为 2 . 0 m g / L 时 ,使植株有最大生
长率 (0 . 0 68 9 /d) ;而其浓度为 1 m g / L 时 , 萝
摩米宁合成量最高 。 与在黑暗条件下相 比 ,细
胞在光照下生长得更快 ,但黑暗条件更有利
于萝摩米宁的合成 。 此外 ,培养液中细胞的初
始浓度越高 ,细胞生长得越快 ,但在低浓度时
萝摩米宁的合成则较好 。 培养基中 5%蔗糖
更有利于细胞生长 , 而 3%蔗糖则更 有利于
萝摩米宁的合成 。 与在 25 ℃ 下相比 , 细胞在
3 1 C下生长得更快 , 但这 2 种温度对萝摩米
宁的合成均无明显影响 。 总之 , 培养液 中含蔗
糖 3% 、 黑暗条件下 、 2 , 4一 D 为 1 m g / L 、 初始
细胞浓度为 2 . 5 9 / 10 m L 时 , 萝摩米宁合成
达最佳 。
(聂 凡摘 蔡永萍校 )
2 2 阿江榄仁树对慢性稳定型心绞痛的治
疗作用 〔英 〕 / B h a r a n i A … / In d i a n H e a r t J一
2 0 0 3
,
5 4一 1 7 0 ~ 1 7 5
印度阿育吠陀传统草药阿江榄仁树 T e -r
m i n a l i a a rj 况 n a ( R o x b
.
e x D C
.
) W i g h t &
A m
. 茎皮及其水提取物 自公元前 50 0 年以来
一直用 于心脏病的治疗 , 但从未进行过严密
的科学试验 , 以前虽发表过一些研究报告 ,但
缺少严格 的对照 。 此项经过周密设计 的临床
试验 比较 了阿江榄仁树提取物与常规药物单
硝酸异 山梨醋 的标准治疗对稳定 型心绞痛
(胸痛 ,通常在劳累时发生 )的疗效 。
此项 随机 、 双盲 、 安慰剂对照 、 交叉临床
试验有 58 名男性患者参加 , 年龄 38 ~ 79 岁 ,
均患慢性稳定型心绞痛 ( N Y H A I 、 l 型 )和
运动引起的心肌缺血 ,排除了急性心肌梗死 、
严重 心绞痛 、 不稳定型心绞痛 、 心脏衰竭 、 慢
性肝肾疾病 、 神经精神病 、 癌症 、 毒品成瘾 、 艾
滋病 、 不能运动或对硝酸醋不耐受者 。 试验期
间 ,受试者 可继续服用除 价阻滞剂和单硝 酸
异 山梨酷之外 的任何处方药 ,心绞痛发作 时
有二硝酸异 山梨醋供应 。 所有参加者都有详
细的临床评价 ,包括心 电图 、胸透和超声心动
描记图 , 以检测基线值 。 每个病人发给 3 瓶
药 ,分别标注着 “ 早晨 ” 、 “ 下午 ” 和 “ 晚上 ” 。 病
人按照标注的时间各服 1 片 , 连服 1周 。 瓶 内
药物分 3 种 : 1 )3 瓶药均为阿江榄仁树茎皮
提取物 ( I P C 一 5 3 ) , 每片 5 0 0 m g ; 2 )标 注 “ 早
晨 ” 和 “ 下午 ” 的瓶中为单硝酸异 山梨醋 ,另一
标 注 “ 晚上 ” 的瓶中为安慰 剂 ; 3 )3 瓶均为安
慰剂 。 IP C 一 53 系乙醇提取物和水提物经浓缩
和干燥处理后的混合物 。 每个病人服上述 3
种药各 1 周 ,更换药物时须有 3 天冲洗期 。 每
种药物治疗结束时要进行临床检查 、 生化化
验和蹬车试验 , 同时记录心绞痛发作次数和
药物使用情况 。 结果显示 , 提取物组心绞痛改
善率为 47 % , 标准治疗组为 53 % , 安慰剂组
为 。 ,一半 以上的病人至少改善了 N Y H A 分
类的一个等级 。 提取物组和标准治疗组均有
96 %病人明显减少 了对单硝酸异山梨醋的需
求 。 与安慰剂组 比较 , 提取物组和标准治疗组
的运动持续时间 、 痊愈时间和血压与最大心
率的乘积均明显增加 , 而 S T 段 的最大下降
则明显减少 。 此外 , 2 组间其他所有参数无 明
显差别 , 且患有糖尿病 、 脂 蛋白代谢失调 、 高
血压和陈旧性心肌梗死等相关病症者的疗效
与未患上述相关病症者相同 。 对于静止时的
心率 、 血压及 血液化学 参数 , 3 种 药物无 差
异 。 3 种药物的副作用均少而轻 ,且无差别 ,
主要包括头痛 、 便秘 、 腹部不适和身体痛 。
此试验使用的蹬车参数是经过改进的 , 比
原来的标准更具灵敏性和准确性 。 之所以排除