全 文 ：第 二 军 医 大 学 学 报
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乌鼓苟挥发油成分及其抗病毒活性
罗 莉 *廖时壹 梁华清 朱洪平 未 可 * *(药学院植物化学教研室 , 2侧碎33)
貌盼 勇 杨 慧武 白雁平 李泉根 (解放军 302 医院 , 北京 , l。力39 )
提要 川 C C瓜I C /【X {法分离鸟敛毒挥发油得到 85 个峰 , 经解析鉴定出刃个成分 ; 鸟菠毒挥发油对小鼠感
染流感病毒人 型和细胞感染单纯疤疹病毒 工型均具有明显抗病毒活性 , 特别是对单纯疤疹病毒 工型在细 /
)faJ 中复制的抑制作用可与无环鸟君顶昆美 。
关键词 乌菠你; 挥发油 ; 抗病毒剂 ; 小鼠
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白。 IJ ,’ I aj ` , lS/ 加 、洲 ,’ L应召珍 劲衣好ign 厂块了砚 rtI ,。 t oj ’ 月王、勿 J Zc” l乙“尽 , oC lez e of IP 瓦诬。 、 cy,
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鸟敛薄为葡萄科植物鸟菠毒 【q l二加
IFP ol 比 田 。` lb .夕罗 lgn len 的全草 , 功效清热
利湿 , 解毒消肿 I’ j。 据报道乌鼓毒注射液在
鸡胚内对流感病毒有明显抑制作用 , 临床治
疗小儿 l:呼吸道感染取得明显效果日 。 关 于
鸟鼓薄挥发油的成分尚未见文献报道 , 我们
用仪夕M S/ DC 法分析了乌鼓毒挥发油的成分 , 并试验其对 小鼠实验性流感和细胞感染
单纯疤疹病毒 l 少恻( SH V一 l) 的作用 , 均取得
较好效果 。
材料和方法
1
.
1 乌效毒样品采自上海 . -[J杨浦区五角场
地区 ( 198 9 . 9 ) , 经 鉴定为葡萄科植物乌获毒
* 解放军空军 } 海第 一医院 , ZJ 刀31
林 解放军 《 川划吮. 青岛 , 2仅幻7 1
l〔欢娜 l licl 脚o1I l’z 扩几un b .夕群卿2咧 , 新鲜样品切成小段供提取挥发油用 。
1
.
2 昆 明种小鼠 , 雄性 , 体重 12 一 16 9 , 军
事医学科学院动物中心提供 。 卜贻la 细胞 , 军
事医学科学院引进 , 培养基为改 良 血酮
《p M日劝 美国 GI BC 公司产品 ) , 含双抗 1% ,
生长液含小牛血清 l% , 维持液含小牛血清
2%
,
PH 7
.
2一 7 . 5 。
1 3 流感病毒 戊 型 (柯雅防 87 一2一马0) 由
中国预防医学科学院病毒所郭元吉教授赠
送 。 经鼻滴入 , 在小鼠体内适应性传代 , ` 5
代后取肺组织制成 10 % 悬液 , 半数致死量
( L几 J为 10 3 3 , 分装后 刊《 )℃ 冻存 。 SH V一 l
tS o ker 株中国预防医学科学院病毒研究所
惠赠 , 经 H e la 细胞传代 , 滴定后 , 实验用 1的
丁℃ ID 500/ . 1闹 。
170 第二军医大学学报 1少 )2 ; 1义2)
2 结果
2
.
1 乌鼓薄挥发油成分分析鉴定挥发油收
率为 0 .田 5% , 常温下为黄棕色透明油状液
体 。 用气相色谱法分离出 85 个峰 , 经质谱
扫描后得到各峰对应的质谱图 (图 1) , 利用
N BS 谱库的质谱数据进行计算机检索 , 并
查对有关标准质谱资料 l习, 解析鉴定出 30
个成分 , 其中单菇 、 倍半菇及其含氧化合物
占印% , 鉴定结果和有关数据见表 1。
.2 在乌蔽毒挥发油含量为 40 1之g/ 创 , 给予
0
.
5 d ,2次 d/ ,3 d时 , 未发现对小鼠有明显毒
副作用 , 肝 、 脾 、 肾组织也未发现病理性改
变 。 综合各项观察指标 , 感染流感病毒后不
同时间给药的治疗效果依次为 48 h > 24 h >
O玩其中在感染后 48 h 给药 , 与对照组相
比 , 死亡率和平均存活天数均具有极显著差
异 (尸< .0 01 , 表 2) 。
表 2 乌蔽葛挥发油治疗小鼠实验性流感
观察结果
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.
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1
.
4 无环乌普 ( ACV) i胡北医药工业研究所
生产 , 批号 89( 州旧18。
1
.
5 挥发油的提取及注射液的制备 新鲜
乌豉毒样品 水蒸汽蒸馏 , 按 含总挥发油
20 #g/ 耐 收取蒸馏液 , 重蒸馏液中含总挥发
油 40 1侣/nlI , 按中华人 民共和 国药典规定制
成注射液 。
1
.
6 挥发油的气相色谱一质谱分析
!
.
6
.
1 实验 条件 美国 E俪g a n M A T 公
司 M团 e l4 150 仪yM S /邵 数据 系统 为林扒叭丹计算机 , 玩bl e 磁盘机 ( or N b[ ) 及
终端打印机等 。
1
.
.6 2 操作 条件 色谱柱 S卜54 , 长 30 rn,
内径 .0 2 5~ 气相色谱载气为 eH, 柱前压为
68 .g k Pa
,分流比为 20 : 1, 进样量为 1风, 柱温为
50 ℃ (3 而 n) , 50 一50 ℃ 以 8℃画n 程序升温 ,并于240 ℃保持 10 ha n , 进样口温度为 2 50 ℃ ,
分离器 温度为 250 ℃ , 传输管线为 2 50 ℃ 。
.1 .6 3 质谱电离方式 lE , 电子能量 :
70 eV, 发射电流 : .0 25 11人 倍增电压 : 12 50 V,质量范围 45 一 6 50 a m叭 扫描周期 : 1 5, 离子
源温度 150℃ 。
1
.
.6 4 化合物的鉴定采用计算机谱库检索
(具有 3 1331 个化合物标准谱图的 N BS 谱
库 )程序 , 有标准的核对色谱保留时间 , 利
用化学电离法确定其分子量以及选择性离
子监测等多种手段相 比较得出 。
1
.
7 将小鼠用乙醚浅度麻醉 , 鼻腔感染流
感病毒后随机分 2 组 , 每组 12 只 。 治疗组
分别在感染后 0 、 24 和 48 h 腹腔给药 , 每次
20 雌 , 每 日 2 次共 3 d , 生理盐水对照组 , 自
接种病毒之 日起至第 14 天 , 逐 日观察并记
录动物死亡数 , 平均存活天数等alo]
1 8 将细胞接种 H SV一 1后 , 37 ℃ 吸附 l h,
然后分别加含不 同药物的维持液 , 置 3 ℃
培养 , 同时设 AC v 阳性药 , 吐温 80( 药物溶
媒 )及细胞对照 , 逐 日观察并记录细胞病变
情况 , 观察期 s d 。 在此基础上 , 采用微量中
和试验法回滴定病毒滴度 。
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.23 当乌蔽毒挥发油浓度为 32 和 40 1沈g /耐
时 , 对病毒的复制有明显的抑制作用 (保护
指数 > 50) , 特别是当挥发油浓度为 40
时 ,
2X()
其 抑 制 病 毒 复 制 的 作 用 与
Z之g /nlI
AC V
拜g /m l时的抑制作用相似 , 两者保护指
数均为 1《兀旧 (表 3) 。
第 二军医大学学报 I卯之1义2) 17 1
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图 1 乌鼓毒挥发油的总离子流图
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表 3 乌鼓毒挥发油的抗 H SV一作用
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3 讨论
从 中药乌蔽毒 中提取挥发油并应 用
0 日M SL/ 石法分析鉴定出 30 种化学成分 ,
国 内 外 均 未见 报 道 。 峰 20 35 、 2供粗、
2 58
、
274 7 和 2786 等均为良好的峰 , 但在质
谱数据库中以及现行各类标谁图谱中检索
不到 , 是否为未知物 , 尚需进一 步分离鉴
定 。 峰 157 解析出来的化合物确定为 卜二
甲基一 环己硅氧烷 , 该化合物存在于植物界
较为罕见 ;峰 21 57 经解析确定为 4 , 8一 二 甲
基哇琳 , 该化合物含存于挥发油中亦属少
见 , 值得进一步探讨 。
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172 第二军医大学学报 1塑刀 ; 1义2)
表 1 乌蔽毒挥发油的气相一质谱分析
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在疗动物实验结果表明 , 乌蔽毒挥发油注射液
对 小鼠实验性流 感有很 明 显 的 治疗 作
用 , 其抗病毒感染效果与给药时间有关 。
感染后即开始给药 。 疗程延 长至 6 d 时 ,
第 一二军医大学学报 l卯之 1义2) 17 3
效优于 3 d疗程 ;而同为 3 d疗程者 , 以感染
后 48 h 给药效果最好 , 这可能与流感病毒
在小鼠体内的侵袭过程有关 , 提示该药在感
染早期阶段所起的作用有限 , 而当病毒在肺
组织中的增殖达到高峰并继续出现症 候期
间 0[] , 须保持药物在血中的有效浓度 , 以达到
抗病毒作用 。
体外实验结果友 明 , 乌蔽毒挥发油对
H S V一 l 的作用主要表现于病毒侵入细胞后
的复制合成阶段 , 并随药物浓度增高而作用
增强 。 A CV 是日前公认的具有较好的抗 HS V
感染作用 [7一 叨的药物 , 但其毒副作用强 , 且
已发现耐药株产生 , 因此急需寻找更好的抗
H SV 的新药 , 乌蔽毒挥发油在组织培养上
表现的抗 H SV一 1活性可与 A C V 媲美 。
尽管乌鼓毒挥发油的植化 _ E作和抗病
毒机理有待进 ` 步研究 。 但其在体内外实
验中表现的抗病毒活性是令人鼓舞的 , 加之
其毒副作用甚微 , 乌蔽毒可能成为具有开发
前景的中药 。
(致谢 : 药学院生药学教研室 密鹤鸣副
教授 鉴定原植物 ) 。
参 考 文 献
1
. 中医研究院 中药研究所 . 全国中:>. 药汇编 . 北京 : 人
民卫生出版社 . 1呢:2 2 12 一 21 3
2
. 唐有元 . 梁秉文 . 中草药鸟蔽毒的药理研究 (初报 ) :鸟
蔽毒注射液对流感病毒的抑制作用 . 中药通报 , 198 之
7( 2) : 37 一3 8
3
, 中国医学科学院药物研究所病毒组 . 慢性气管炎实验
方法汇编 ( 一 ) , 抗流感病 毒药物动物试验方法 . 北
京 : 人民卫生出版社 , 1% 3; l呢 一 3 )7
4 黄祯祥 . 医学病毒学基础及实验技术 . 北京 : 科学出
版社 , l男欠 143 一 145
5
.
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甲代 t间 dat 、 VoI
·
1 一且 N渐 、 b l玉: 晰 l即 nI t巴妇~ UP ha 以 ion 19;74
Za )~ 1《 幻
6
. 王植仑 . 流行性感冒 . 北京 :人民卫生出版社 . 1肠3;
入衅
7
.
5 爪 d 民 B ur l拐 W H , L 巧ki n oL
.
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.
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〕 1词 iit s in
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解州骊 r . 内 n J M喊 l呢之 7 3: 125
(1卯 l一 03 一 25 收稿 , l卯2 一 01 一倪 修回 )
简讯
本刊评选出 1卯1 年优秀论文
经校首长批准 , 自今年起 , 每年进行一次学报优秀论文评选授奖活动 。 1叩 2年 1 月由本刊全体编委以
无记名投票形式 , 评选出 6篇论文为 l卯 1年度学报优秀论文 , 不日将举行授奖大会 。 获奖优秀论文名单如下 :
1
. 侯春林等 . 《指骨缓慢延长治疗手指缺损》 。
2
. 袁文俊等 . 《选排性逸走神经传入刺激对隔神经高频振荡的调制作用 )o
3
. 薛广波等 . 《中国城乡脑血管病的流行病学研究 )o
4
. 王向东等 . 《人血型糖蛋白 A衍生物对恶性疟原虫裂殖子识别及入侵红细胞的效应》 。
5
. 陈文晖等 . 《癌光琳成分的分离鉴定及主要成分肿瘤光生物活性的研究》 。
6
. 张柏和等 . 《人甲胎蛋白异质体肤链和寡糖成分差异与肝癌诊断的关系》 。