全 文 ：续断菊中杨梅素的LC-MS法测定
许明录,高明,刘东涛,李倩,李粉
（河南科技学院,河南新乡453003）
摘要：采用体积分数95%乙醇进行加热回流提取后,根据极性由小到大分别用正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正
丁醇（有机溶剂∶水=1∶ ）萃取.利用乙酸乙酯层提取物,经HPLC进一步分离纯化后得到较多的纯馏分.纯化后的
馏分经LC-MS进行结构鉴定-定性分析.结果表明：根据质谱信息定性分析馏分1为杨梅素.该方法灵敏、准
确、简便.
关键词：续断菊；HPLC；LC-MS；杨梅素
中图分类号：R932 文献标志码：A 文章编号：108-7516（2014）05-0039-04
Determination of myricetin in Sonchus asper L. by LC-MS
Xu Minglu,Gao Ming,Liu Dongtao,Li Qian,Li Fen
（HenanInstituteofScienceandTechnology,Xinxiang453003,China）
Abstract:Using 95% ethanol heated and refluxed for extraction；respectively using hexane,dichloromethane,ethyl
acetate,n-butanol according to the polarity from small to large （organic solvent∶water =1∶1）.For the sake of more pure
fractions,we adopt HPLC to further purification with the extract of ethyl acetate layer.Purified fractions structural
identification-qualitative analysis by LC-MS.Based on the mass information carry on qualitative analysis, we found
that fraction 1 is myricetin.The method is sensitive,accurate,and convenient.
Key words:Sonchus asper L.；HPLC；LC-MS；myricetin
续断菊（Sonchus asper（L.）Hill）一年两生草本菊科植物,俗称花叶滇苦菜.直立高50~100cm,下部
无毛,中上部及顶端有稀疏腺毛.叶片长椭圆形或倒圆形,长6~15cm,宽1.5~8cm,不分裂或羽状全裂,边
缘有不等的刺状齿.味苦、性寒,具有清热解毒、止血的药用功效；可内服也可外用,资源遍布于全国各地,
亦可作为野菜食用[1].杨梅素具有降血糖、抗氧化、保护肝脏、抗血栓、抗心肌缺血、改善微循环等多方面
的药理作用.续断菊是一种常见的具有良好药用价值的天然植物,对其各种特性的研究国内外有很多报
道.例如：抗病菌作用[2]、对除草剂的敏感性[3]、对其染色体及核型的研究[4]等.迄今对续断菊主要化学成分
的研究文献也有不少报道,已陆续从续断菊中分离出倍半萜内酯苷、紫罗兰酮衍生物苷[5]；木栓醇乙酸
酯,豆甾醇,芹菜素,木犀草素及其7-葡糖醛酸等物质[6].并且黄酮类、黄酮醇类、总酚、原花青素等物质的
含量相对较多；但是皂苷、生物碱类物质含量相对较少[7].目前提取天然产物的主要方法有连续回流提取
法、超临界流体提取法、超声波提取法、微波提取法等,分离多采用液-液萃取、液液分配柱色谱、膜分离
技术[8]等方法.
本试验将采集干燥后的续断菊采用连续热回流提取法、液-液萃取法将其有效成分提取分离出来,
经HPLC进一步纯化后LC-MS进行定性检测分析.
收稿日期：2014-07-22
作者简介：许明录（1972—）,男,朝鲜族,吉林延边人,博士,副教授.主要从事天然药物开发及利用研究.
doi:10.3969/j.issn.1008-7516.2014.05.008
第 42 卷 第 5 期
42 5Vol. No.
河 南 科 技 学 院 学 报
Journal of Henan Institute of Science and Technology
2014 年 10 月
2014Oct.
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1 仪器与试剂
1.1 供试材料和试剂
供试续断菊于2012年10月采自新乡市河南科技学院周边田间,经河南科技学院许桂芳教授鉴定.
甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、水为超纯水.其他分析纯试剂均为天津市科密欧化学试剂有限公司
生产.
1.2 主要仪器
1.2.1 LC6-AD高效液相色谱仪条件 色谱柱：YMC-PackPro,C18100×4.6mm,S-3μm,12nm；流动相
流速1.0mL/min；波长280nm；流动相A：超纯水用水系滤膜过滤,超声波震荡30min除气泡；流动相B：
乙腈（色谱纯）用有机系0.22μm过滤薄膜过滤配成83%的溶液（V 乙腈）∶V（水）=83∶17）；进样量10μL.
1.2.2 LCQ Deca XP MAX液相色谱 -质谱联用仪条件 SurveyorLCPumpPlus液相四元泵,带内置真空
脱气机；SurveyorPDAPlusDetector二极管阵列检测器；电喷雾ESI离子源.
2 方法与结果
2.1 样品制备
将田间采来的续断菊自然晒干称重后,用体积分数95%的乙醇加热回流提取3次（5L×3,每次24h）,
合并提取液减压浓缩蒸干.浓缩物用适量水溶解后,按极性递增方式依次用正己烷、二氯甲烷、乙酸乙
酯、正丁醇进行萃取（V（水）∶V（有机溶剂）=1∶ ）,每种有机溶剂重复3次浓缩蒸干.共得到续断菊5个层
的提取物质,取少量乙酸乙酯层提取物,称重后用甲醇溶解配成5000g/L的溶液用于HPLC后续的分离
纯化.
2.2 色谱条件优化
因此次续断菊提取物未上柱处理,所制备的5000g/L溶液中含有较多极性不一、相对分子质量跨
度大的物质,分离纯化较困难.故采用梯度洗脱的方法,对其有效成分进行分离.但因所含物质较多,探寻
一条理想的方法比较困难；前期进行一系列的方法探索.
利用前期探索方法,得到较好分离度的馏分较少,还需继续优化洗脱程序.经多次探索后,寻找到一
种能得到较好分离度的方法（见表1）.
表1HPLC梯度洗脱程序
Tab.1 HPLCgradientelutionprogram
时间/min
0.01
10
12
15
25
30
37
60
65
75
流动相B/%
10.0
10.0
30.0
30.6
32.0
34.0
35.0
40.0
100
流动相A/%
90.0
90.0
70.0
69.4
68.0
66.0
65.0
60.0
0
Stop
2.3 物质分离纯化
利用表1梯度洗脱程序将配好的溶液用HPLC分离纯化,进样量10μL.得到5个较好分离度的馏
分（见图1）,在机器重现性好的情况下进样收集,分别编号标记.
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t/min
图1 HPLC溶液分离纯化
Fig.1 HPLCsolutionseparationgraph
2.4 收集馏分样品的LC-MS测定
将得到的5个较好馏分稀释后,在正离子模式下直接进样用LC-MS进行电喷雾质谱检测,进样量
2μL,检测结果质谱图见图2.
图2LC-MS检测质谱图
Fig.2 LC-MSgraph
馏分1的分子式C15H20O8,相对分子质量为318,溶于甲醇、乙 .LC-MS测得馏分1的分子离子峰为
[M+H]+319,主要碎片离子为m/z195、m/z125、m/z108,裂解情况如图3所示.以上数据与文献[9]报道的
杨梅素一致,故推断该化合物为杨梅素.
许明录等：续断菊中杨梅素的 LC-MS 法测定 第 5期
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图3杨梅素的结构及其裂解情况
Fig.3 Structureanddecompositionofmyricetin
3 结论
因提取物未上柱,其中所含有较多结构不同、极性不一的物质.分离时需采用梯度洗脱程序,这样能
够收集到更多的纯馏分.馏分进行 LC-MS 检测,与查阅的关于杨梅素的结构特点相比较,本文通过
LC-MS联用仪测得的馏分1和杨梅素结构相吻合,故鉴定出馏分1为杨梅素；其他馏分因实验方法未
能定性出其准确结构.本研究一方面从化学成分层面上,了解续断菊的主要化学成分有助于客观地评价
其药用价值；另一方面,通过对续断菊提取物进行分离,可以为其进一步的分离提供有效的可参考的实
验方法,也为续断菊的研究开发和新药的研究奠定了基础.
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（责任编辑：卢奇）
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