全 文 ：2011年 4月 甘　肃　农　业　大　学　学　报 第 4 6 卷
第 2 期 80～ 82 JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSIT Y 双 月 刊
甘肃瑞香提取物对 8种常见植物病原菌
抑菌作用的研究
张振刚
(甘肃林业职业技术学院林业工程系 ,甘肃 天水　741020)
摘要:以串珠镰刀菌 、瓜果腐霉 、禾谷镰刀菌 、细交链格孢 、致病疫霉 、尖孢镰刀菌 、仁果丛梗孢 、绿色木霉为供
试真菌 ,用生长速率法和菌丝干质量法对甘肃瑞香提取物的离体抑菌活性进行测定.结果表明:在供试菌种的质量
浓度为0.1 g ·mL -1时 ,甘肃瑞香叶的丙酮提取物对8 种供试菌菌落生长均有抑制作用 , 对其中的 7 种供试菌的抑
制作用强 ,抑制率达 56 %以上 , 但对绿色木霉抑制效果差;甘肃瑞香叶的丙酮提取物对 8 种供试菌菌丝生长均有
抑制作用 ,对 4 种供试菌抑菌效果较好 , 抑制率达 50 %以上 , 其中对致病疫霉的抑制率最高 ,达 69.05 %.
关键词:甘肃瑞香;真菌;抑菌作用;活性筛选
中图分类号:R 285　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1003-4315(2011)02-0080-03
作者简介:张振刚(1964-),男 ,副教授 ,硕士 ,主要从事生物防治的教学和研究.E-m ail:gslytw@163.com
基金项目:甘肃瑞香驯化与繁育技术研究.
收稿日期:2010-05-11;修回日期:2010-09-06
Inhibitions of ex tracts f rom Daphne tangutica against
eight plant fungal pathogens
ZHANG Zhen-gang
(Depa rtment of Fo restr y Management , Gansu College o f Fo restry Techno log y , T ianshui 741020 , China)
Abstract:The inhibitions of ex t racts f rom leaf o f Daphne tangutica w ith acetone against Fusarium mo-
ni li f orme , Pythium aphanidermatum ,Fusarium graminearum , Alternaria alternata ,Phytophthora in fes-
tans ,Fusarium oxy sporum , Monilia f ructigena , Trichoderma viride were tested in v it ro by the grow th
rate and the dry w eight of mycelium.The results showed that the ext ract at 0.1 g ·mL-1 inhibi ted the
grow th o f hyphae , the inhibition rate of 7 tested fungi w as higher than 56 % and the inhibi to ry effect of
Trichoderma v iride was poor.The ex t ract decreased the amount o f mycelial g row th of 8 pathogens , the in-
hibi tion rate of 4 tested fungi w as higher than 50 %, the highest reached 69.05 % against Phy tophthora
in f estans.
Key words:Daphne tangutica Maxim;fungi;fung istasis;bioactivity-screening
　　甘肃瑞香(Daphne tangut ica Maxim)为瑞香
科(Daphnegenus)常绿灌木 ,高 0.3 ～ 2.0 m ,别名陕
甘瑞香 、唐古特瑞香 、小冬青等 ,生于海拔 1 500 ～
3 000 m 高地[ 1-2] ,主要分布在甘肃省的迭部 、舟曲 、
卓尼 、天水 、武都 、文县以及青海省 、四川省等地 ,其
干燥茎皮及根皮入药叫祖师麻[ 3-6] ,有镇痛 、活血 、消
肿 、祛风湿之用.甘肃瑞香除作为民间草药用外 ,对
其毒鱼 、杀鼠和杀虫的作用研究较多 ,但在抑制植物
病原菌方面的研究报道较少.鉴于此 ,本试验研究了
甘肃瑞香不同溶剂抽提物对 8种常见植物病原菌的
抑菌作用 ,以期为开发甘肃瑞香抽提物提供理论
依据.
第 2 期 张振刚:甘肃瑞香提取物对 8 种常见植物病原菌抑菌作用研究
1　材料与方法
1.1　供试材料
7 ～ 9月采集甘肃瑞香全株并阴干 ,粉碎过 40
目筛(d=0.37 mm)后密封 ,置于 4 ℃冰箱中保存
备用.
1.2　供试菌种
供试病原菌为串珠镰刀菌(Fusarium moni li-
f orme)、瓜果腐霉(Py thium aphanidermatum)、禾
谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、细交链格孢
(Alternaria alterna)、致病疫霉(Phy tophthora in-
f estans)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxy sporum)、仁果
丛梗孢(Monilia f ructigena)、 绿色木霉(Tri-
choderma v iride),均由天水师范学院生物工程实验
室提供.
1.3　试验方法
1.3.1　提取液的制备　分别称取甘肃瑞香根 、茎 、
叶干粉各 20 g ,在室温下分别用丙酮 、乙醇 、甲醇 、水
作为提取剂 ,用冷浸法振荡提取 3次 ,提取时间分别
为 3 、2 、1 d ,收集滤液于真空旋转薄膜蒸发仪中浓
缩 ,浓缩物用提取液定容至 20 mL ,其质量浓度为
0.1 g ·mL -1 ,移装于 20 mL 具塞刻度试管中 ,加塞
封口 ,并将提取物置于冰箱中冷藏备用.
1.3.2　生物活性测定　以致病疫霉和尖孢镰刀菌
为指示菌 ,测定不同溶剂的抽提效果 ,从中筛选出好
的抽提剂 ,再用生长速率法和菌丝干质量法[ 7] 分别
测定甘肃瑞香提取物对供试菌菌落生长和菌丝生长
量的抑制作用 ,重复 3次 ,取平均值 ,按下列公式计
算抑制率:
菌落生长抑制率(%)=(对照菌落直径-处理
菌落直径)/对照菌落直径
菌丝生长量抑制率(%)=(对照菌丝质量-处
理菌丝质量)/对照菌丝质量
2　结果与分析
2.1　不同提取剂提取效果的比较
由表 1可知 ,甘肃瑞香的丙酮 、乙醇 、甲醇 、水提
取液对致病疫霉的平均抑制率分别为 88.6 %、
65.0 %、37.3 %和 10.1 %;对尖孢镰刀菌的平均
抑制率分别为 79.2 %、65.5 %、60.2 %、44.8 %,
显然 ,在抑菌方面 ,丙酮作为提取剂的提取效果优于
乙醇 、甲醇和水 ,故选用丙酮作为提取剂效果更好.
甘肃瑞香根 、叶 、茎的丙酮提取液对尖孢镰刀菌平均
抑制率分别为 92.2 %、79.3 %和 66.1 %.对致病
疫霉的平均抑制率分别为 94.7 %、86.6 %和
84.4 %;显然 ,甘肃瑞香叶的丙酮提取液的抑制率
均高于茎和根的丙酮提取液的抑制效果.说明 ,甘肃
瑞香叶的丙酮提取液的抑菌效果优于根和茎的丙酮
提取液的抑菌效果.
表 1　不同提取剂 72 h提取物对 2 种真菌的抑制率
Tab.1　The inhibition rate of tw o fungi by different
e xtr actant in 72 hour s
提取剂 测试部位 菌落直径尖孢镰刀菌/ cm 致病疫霉/ cm
丙酮
茎 0.66 0.84
叶 0.92 0.95
根 0.79 0.87
乙醇
茎 0.50 0.62
叶 0.80 0.74
根 0.65 0.59
甲醇
茎 0.68 0.30
叶 0.51 0.44
根 0.61 0.38
水
茎 0.45 0.08
叶 0.45 0.11
根 0.43 0.10
2.2　甘肃瑞香叶提取物对 8种供试菌的影响
2.2.1　对菌落生长的影响　采用生长速率法测定
了甘肃瑞香叶的丙酮提取物对 8种供试菌菌落生长
的影响.由表 2 可知 ,供试菌种的质量浓度为 0.1
g ·m-1时 ,甘肃瑞香叶的丙酮提取物对 8种供试菌
菌落生长的抑制效果比较明显 ,对致病疫霉的抑制
率最高 ,达94.7 %,与其他供试菌种差异显著;对尖
孢镰刀菌和禾谷镰刀菌的抑制率次之 , 分别为
92.2 %和82.9 %,与其他供试菌种差异显著;对瓜
果腐霉 、串珠镰刀菌 、仁果丛梗孢和细交链格孢的抑
制率相对较低 ,分别为 64.4 %、62.5 %、56.8 %和
56.2 %,与其他供试菌种差异显著;对绿色木霉的
抑制率最低 ,为34.1 %.以上结果表明 ,甘肃瑞香叶
的丙酮提取物对 8 种供试菌菌落生长均有抑制作
用 ,对其中 7种供试菌抑制作用强 ,对致病疫霉和尖
孢镰刀菌的抑制作用最好 ,对绿色木霉抑制作用差;
说明植物同一部位对不同菌种菌落生长的影响存在
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甘 肃 农 业 大 学 学 报 2011 年
表 2　甘肃瑞香叶提取物对菌落生长的影响
Tab.2　Influence of Daphne tang utica leaf ex tracts
on colony g row th
种名 处理菌落直径/ cm
对照菌落
直径/cm 抑制率/ %
致病疫霉 0.65 2.82 94.7a
尖孢镰刀菌 0.76 3.43 92.2b
禾谷镰刀菌 0.23 1.87 82.9b
瓜果腐霉 1.60 5.00 64.4c
串珠镰刀菌 0.50 1.83 62.5c
仁果丛梗孢 1.17 3.20 56.8c
细交链格孢 1.53 4.00 56.2c
绿色木霉 1.93 3.43 34.1d
显著差异.
2.2.2　对菌丝生长量的影响　由甘肃瑞香叶的丙
酮提取物对 8种供试菌菌丝生长量的抑制作用的测
定结果可知(表 3), 当提取物的质量浓度为
0.1 g ·mL-1时 ,甘肃瑞香叶的丙酮提取物对 8 种
供试菌菌丝生长量的抑制效果比较明显 ,对致病疫
霉的抑制率最高 ,达到69.05 %,与其他供试菌种差
异显著.对尖孢镰刀菌和串珠镰刀菌的抑制率次之 ,
分别为61.24 %和 56.86 %,对仁果丛梗孢 、瓜果腐
霉和禾谷镰刀菌的抑制率相对较低 , 分别为
53.61 %、45.33 %和 44.00 %.对细交链格孢和绿
色木霉的抑制率低 ,分别为36.78 %和 34.78 %.结
果表明 ,甘肃瑞香叶的丙酮提取物对供试的 8 种植
物病原菌菌丝生长量均有抑制作用 ,对其中的 6 种
供试菌抑菌效果较好 ,对致病疫霉的抑制率最高 ,但
对细交链格孢和绿色木霉的抑制率较低.显然 ,这与
用生长速率法测定的结果基本一致 ,即对致病疫霉
的抑制率最高 ,对细交链格孢和绿色木霉的抑制率
表 3　甘肃瑞香叶提取物对菌丝生长量的影响
Tab.3　The influence of Daphne tang utica leaf
ex tracts on mycelial gr ow th
种名 对照组平均值/ g
处理组平
均值/g 抑菌率/ %
致病疫霉 0.28 0.08 69.05a
尖孢镰刀菌 0.43 0.15 61.24ab
串珠镰刀菌 0.34 0.20 56.86ab
仁果丛梗孢 0.65 0.29 53.61bc
瓜果腐霉 0.25 0.18 45.33bc
禾谷镰刀菌 0.25 0.11 44.00bc
细交链格孢 0.29 0.20 36.78c
绿色木霉 0.23 0.20 34.78c
低 ,因而在测定植物提取物对于病原菌的菌丝生长
的抑制作用时 ,这 2种方法都是可行的.
3　讨论与结论
从试验结果可以看出 ,供试的 4种提取剂中 ,丙
酮作为提取剂的提取效果优于乙醇 ,乙醇又优于甲
醇和水 ,因此 ,对甘肃瑞香进行抑菌活性测定时 ,可
以采用丙酮作为提取剂 ,但对某些植物样品也不排
除用其他提取剂的效果会更好的可能性.
不同部位的甘肃瑞香 ,其抑菌活性不同 ,叶提取
液的抑菌效果优于根和茎.这可能是由于叶中含有
抑菌活性较强的物质 , 有必要对其进行更深入的
研究.
从甘肃瑞香叶提取物对 8种供试植物病原真菌
的抑菌活性测定来看 ,叶的丙酮提取物对 8种供试
菌菌落生长均有抑制作用 ,其中对致病疫霉和尖孢
镰刀菌的抑制效果最好 ,对绿色木霉抑制效果差;叶
的丙酮提取物对供试的 8种植物病原菌菌丝生长量
均有抑制作用来看 ,对致病疫霉的抑制率最高 ,但对
细交链格孢和绿色木霉的抑制率较低.这与生长速
率法测定的结果基本一致 ,说明生长速率法与菌丝
干质量法 ,都可以有效地测定植物提取物对植物病
原菌抑制作用.
本试验中用粗提取物进行测试 ,若进一步纯化
精提 ,其杀菌活性可能会进一步提高;试验仅通过生
长速率法和干质量法进行了甘肃瑞香粗提物的离体
活性测定 ,其在活体植物上对病原菌的活性及对寄
主本身的影响还需要进一步研究.
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甘 肃 农 业 大 学 学 报 2011 年
+1.5 g ·L-1 AC +1.0 g ·L-1 PVP.
待试管苗生根以后继续培养 15 ～ 25 d ,就可进
行瓶外移栽.保持一定湿度 ,自然光照 ,塑料薄膜笼
罩一周后打开 ,成活率可达 90 %以上(图 4).
图 4　炼苗移栽
F ig.4　Seedling tr aining and transplant
3　讨论
在铁棒锤栽培中 ,越冬芽带菌非常严重.本试验
以越冬芽为外植体进行试验 ,经过多次更换灭菌剂
的种类 ,调整灭菌剂的浓度及灭菌时间 ,最终确定以
75 %的乙醇漂洗 10 s ,再用 0.2 %的升汞灭菌 15
min ,灭菌效果最好 ,污染率可从开始的 90 %以上
降到 10 %以下.
外植体或培养物的褐化是组织培养过程中的常
见现象 ,其原因之一是植物组织中的酚类物质被多
酚氧化酶(PPO)氧化所致 ,如其他乌头属植物一样 ,
铁棒锤在组织培养中褐化现象严重.本试验参照郝
克伟[ 3] 、谷延泽[ 4] 的方法 , 在附加 6-BA (2.5
mg ·L -1)和 NAA(0.1 mg ·L-1)的基本培养基中
加入 PVP(1 g ·L -1)和 AC(1.5 g · L-1),并于(20
±1)℃,光周期 12 h ·d-1 ,光照强度 1 500 ～ 2 000
lx 下培养 ,明显降低了褐化率 ,有效缓解了褐化对
生长的影响.由于低温可以抑制酚类化合物的合成 ,
降低多酚氧化酶活性 ,减少酚类氧化 ,从而减轻褐
化 ,因此 ,在 20 ℃恒温下培养的褐化率显著低于
25 ℃和室内变温条件下的褐化率.
本试验以铁棒锤的越冬芽为外植体 ,经过灭菌 、
抗褐化培养基的筛选 、芽增殖培养 、生根培养 、移栽
等试验 ,筛选出了不同培养阶段培养基的种类及培
养条件 ,建立了铁棒锤高效 、快速的组织培养繁殖体
系 ,可为铁棒锤种苗的工厂化生产提供技术参考.
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(责任编辑　赵晓倩)
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