全 文 ：中国药房 2013年第24卷第15期 China Pharmacy 2013Vol.24No.15
离。
3.2 样品提取条件的考察
采用单因素循环的方法，分别考察了提取方式（超声，回
流）、提取溶剂（甲醇、75％甲醇、50％甲醇、25％甲醇）、溶剂量
（50、100、150倍）、提取时间（20、30、40、50min）对试验结果的
影响，以出峰个数和峰面积大小进行比较，最终确定了文中的
样品提取条件。
3.3 系统聚类分析与指纹图谱相似度评价
由聚类分析树状图可看出，14批川芎样品被分成两大类、
五小类。4批四川产道地药材（编号：1～4）与云南丽江（编号：
5）、陕西汉中（编号：7）非道地药材聚为第一小类，说明四川产
川芎道地药材之间的内在质量相对一致，云南丽江和陕西汉
中产川芎的质量也较好，接近四川产道地川芎。其他产地的
川芎（编号：6、8、9）与市售统货（编号：10～14）交织聚在其他
四小类中，说明市售统货质量一般。相似度低于0.900的2批
药材（编号：6、13）被聚为一类，表明系统聚类分析与指纹图谱
相似度评价这两种方法的结果得到了相互验证。
综上，本试验首次建立了川芎的UPLC指纹图谱，可为今
后有效控制川芎的质量提供依据。
参考文献
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（收稿日期：2012-05-14修回日期：2012-07-16）
鼠曲草饮片的RP-HPLC指纹图谱研究Δ
赵 颖 1＊，李 文 1，李 鹏 2，芮海波 1，谈瑄忠 1#（1.南京市中医院，南京 210001；2.南京海昌中药集团有限公
司，南京 210061）
中图分类号 R284.1；R917 文献标志码 A 文章编号 1001- 408（2013）15-1391-03
DOI 10.6039/j.issn.1001- 408.2013. 5.17
摘 要 目的：建立鼠曲草饮片的反相-高效液相色谱（RP-HPLC）指纹图谱。方法：以绿原酸和异鼠李素为内参照物，色谱柱为
YMC-Pack ODS-A（250mm×4.6mm，5μm），流动相为0.1％磷酸水溶液-乙腈（梯度洗脱），流速为1.0ml/min，检测波长为320mn，
柱温为35℃。结果：在RP-HPLC指纹图谱中确立了20个共有峰，建立了鼠曲草饮片的共有模式。10批鼠曲草饮片的相似度均大
于0.900。结论：该方法简便、准确、重复性好，可为鼠曲草饮片的质量评价提供依据。
关键词 鼠曲草；指纹图谱；反相-高效液相色谱法；绿原酸；异鼠李素
Study on RP-HPLC Fingerprints of Gnaphalium affine Decoction Pieces
ZHAO Ying1，LI Wen1，LI Peng2，RUI Hai-bo1，TAN Xuan-zhong1（1.Nanjing Hospital of TCM，Nanjing 210001，
China；2. Nanjing Haichang TCM Group Corporation，Nanjing 210061，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish RP-HPLC fingerprint of Gnaphalium affine decoction pieces. METHODS：Using chloro-
genic acid and isorhamnetin as reference substance，the determination was performed on YMC-Pack ODS-A（250mm×4.6mm，5
μm）column with mobile phase consisted of 0.1％phosphate acid-acetonitrile（gradient elution）at the flow rate of 1.0ml/min. The
detection wavelength was set at 320nm，and the column temperature was 35℃. RESULTS：In RP-HPLC fingerprint，20common
peaks were identified，and common model of G. affine tablets was established. The similarities of 10batches were exceeded 0.9.
CONCLUSION：The method is simple，accurate and reproducible，and it provide reference for quality control of G. affine decoc-
tion pieces.
KEY WORDS Gnaphalium affine；Fingerprint；RP-HPLC；Chlorogenic acid；Isorhamnetin
Δ 基金项目：南京市科技发展计划资助项目（No.201007005）
＊中药师，硕士。研究方向：中药饮片质量标准。电话：
025- 2276123。E-mail：zhaoying12314@163.com
# 通信作者：主任中药师。研究方向：中药复方质量标准、药物经
济学。电话：025- 2276121。E-mail：txz282@sohu.com
􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊
鼠曲草为菊科鼠曲草属植物鼠曲草Gnaphalium affine D.
Don的全草，又名佛耳草、鼠耳、追风草，性平，味甘，主要含有
黄酮、有机酸、三萜等成分[1-3]，具有祛痰、止咳、平喘、祛风湿等
功效，可用于治疗咳嗽、痰喘和风湿痹痛等。全国各地均盛产
··1391
China Pharmacy 2013Vol.24No.15 中国药房 2013年第24卷第15期
鼠曲草，滇南胜境关等地称之“绵茹”，四川、重庆等地则以“清
明菜”相称[4]。目前尚未见鼠曲草指纹图谱的相关研究报道，
故笔者采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法首次建立了鼠曲
草饮片的指纹图谱。
1 材料
1.1 仪器
LC-20AB HPLC 系统 ，包括在线脱气机 、Prominence
SIL-20A 自动进样器 、SPD-M20A 二极管阵列检测器和
CTO-20A柱温箱（日本岛津公司）；KQ-500E超声波清洗器（昆
山市超声仪器有限公司，功率：500W，频率：40kHz）；AG285
电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。
1.2 试剂
绿原酸、异鼠李素对照品（中国食品药品检定研究院，批
号分别为110753-200413、110860-20 608）；甲醇为分析纯，乙
腈、磷酸为色谱纯，水为纯化水。
1.3 药材
鼠曲草饮片来自江苏、湖北等地（详见表1），均经南京市
中医院李文副教授（主任药师）鉴定为菊科植物鼠曲草 G.
affine D. Don的全草。
表1 鼠曲草饮片的来源信息
Tab 1 The information sheet of G. affine decoction pieces
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
产地
江苏
湖北
安徽
四川
浙江
湖北
江苏
河南
江苏
安徽
生产批号
111014
100401
100222
110115
110520
20700625
120301
110815
120218
110511
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：YMC-Pack ODS-A（250mm×4.6mm，5μm）；流动
相：0.1％磷酸水溶液-乙腈，梯度洗脱（洗脱程序见表2）；流速：
1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：320mn；进样量：10µl。
表2 流动相梯度洗脱程序
Tab 2 The condition list of mobile phase gradient elution
时间，min
0
10
30
35
50
70
100
120
0.1％磷酸水溶液
98
90
80
80
70
65
35
20
乙腈
2
10
20
20
30
35
65
80
2.2 混合对照品溶液的制备
精密称取绿原酸和异鼠李素对照品各适量，用75％甲醇
溶解并稀释制成每1ml含绿原酸40µg和异鼠李素10µg的混
合对照品溶液，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取饮片粉末约2g，精密称定后置具塞锥形瓶中，精密加入
75％甲醇40ml，称定质量，超声处理30min，静置，再称定质
量，用75％甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，经
0.45µm微孔滤膜滤过，即得。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验 取同一供试品溶液10µl，按拟定的方法
连续进样6次，测定。结果，20个共有峰相对保留时间的RSD
均＜2％，相对峰面积的 RSD 均＜3％，表明本方法精密度良
好，符合指纹图谱技术要求。
2.4.2 稳定性试验 取同一供试品溶液10µl，分别于0、2、4、
8、12、24h 进样测定。结果，20个共有峰相对保留时间的RSD
均＜3％，相对峰面积的RSD均＜3％，表明供试品溶液在24h
内稳定性良好。
2.4.3 重复性试验 取同一批样品适量，分别按“2.3”项下方
法平行制备6份供试品溶液，各取10µl进样测定。结果，20个
共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均＜3％，表明本方
法重复性良好。
2.5 样品测定
精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10µl，按拟定
的方法进样测定。
2.6 指纹图谱的建立与分析
2.6.1 指纹图谱的建立及共有峰的标定 按“2.1”项下色谱条
件测定并记录10批鼠曲草饮片的HPLC图谱，详见图1。通过
不同产地鼠曲草饮片指纹图谱比较，选择稳定性较好、特征明
显的峰为共有峰，详见图2。以绿原酸峰（2号峰）为参照峰，其
保留时间和峰面积设为1，计算其他各峰的相对保留时间和相
对峰面积，结果分别见表3、表4。结果表明，来源于不同产地
的10批鼠曲草饮片有20个共有峰，且共有峰面积之和＞总峰
面积的90％。
2.6.2 色谱峰的鉴定 按“2.1”项下色谱条件测定绿原酸和异
鼠李素对照品，并与样品指纹图谱中相应的色谱峰进行比较，
分别发现样品指纹图谱中的2号峰、16号峰的保留时间及紫外
光谱与绿原酸和异鼠李素对照品吻合，故样品指纹图谱中2号
特征峰为绿原酸、16号特征峰为异鼠李素。绿原酸和异鼠李
8.0
7.0
6.0
5.0
4.0
3.0
2.0
1.0
00 10 20 30 40 50 60 70 80 90100110120
时间，min
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
电压
，mV
图1 10批鼠曲草饮片的指纹图谱
Fig 1 Fingerprint of 10batches of G. affine decoction pieces
225
175
125
75
25
5
00 20. 0 40. 0 60. 0 80. 0 99. 9 119. 9
时间，min
1
2
34 5
6
78
9 10111213
14
151617181920 R
电压
，mV
图2 鼠曲草饮片的HPLC图
Fig 2 HPLC chromatogram of G. affine decoction pieces
··1392
中国药房 2013年第24卷第15期 China Pharmacy 2013Vol.24No.15
素对照品的HPLC图见图3。
2.6.3 相似度评价 将“2.6.1”项下所得图谱用“中药色谱指
纹图谱相似度评价系统”（2004A版）软件进行处理，得出鼠曲
草饮片的HPLC指纹图谱共有模式。经过与共有模式比较，计
算相似度。结果，10批鼠曲草饮片的相似度按样品编号依次
为0.994、0.992、0.901、0.989、0.916、0.996、0.983、0.998、0.998、
0.994，表明10批饮片的相关性良好。
3 讨论
本试验对供试品溶液的制备方法进行了筛选，通过对不
同提取溶媒（甲醇、75％甲醇、50％甲醇、水）、提取方式（直接
超声提取、浸泡过夜后超声提取、回流提取、索氏提取）进行考
察，经HPLC分析，结果表明以75％甲醇超声提取对黄酮类成
分提取效率较高，供试品指纹图谱出峰多，提取方式简捷、有
效。
本试验对流动相（甲醇-0.2％磷酸水溶液、乙腈-0.1％磷酸
水溶液）进行了比较，结果发现以乙腈-0.1％磷酸水溶液梯度
洗脱，能使供试品色谱峰分离效果良好。通过对检测波长
（210、245、280、320、365nm）进行优选，结果以320nm为检测
波长所得图谱所含的峰数较多、信息量较大、各色谱峰分离较
好。
中药饮片成分复杂，药效的发挥强调整体性，相对而言中
药指纹图谱技术可以较全面地反映中药化学成分的种类与数
量，进而反映中药的质量和中医用药所体现的整体疗效[5]。本
试验研究了市售10批次鼠曲草饮片的RP-HPLC指纹图谱，结
果表明各批样品的指纹图谱之间较为吻合；由于受产地、环境
因素及生长年龄等方面的影响，各批次鼠曲草的有效成分含
量和比例有一定差异，如4号峰、10号峰对应的有效成分含量
差异比较明显，说明不同批次鼠曲草饮片的质量存在一定的
差异，其差异与药效的相关性有待进一步研究。
综上，本方法简便、准确，重复性、稳定性与精密度均较
好，可为评价鼠曲草饮片的质量提供依据。
参考文献
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（收稿日期：2012-05-28修回日期：2012-08-27）
表3 10批鼠曲草饮片指纹图谱各共有峰的相对保留时间
Tab 3 Relative retention time of each common peak in the
fingerprint of 10batches of G. affine decoction pieces
峰号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
1
0.819
1.000
1.038
1.106
1.768
1.851
1.959
2.035
2.116
2.459
2.584
2.672
2.715
2.749
2.989
3.141
3.245
3.634
3.821
3.873
2
0.819
1.000
1.038
1.107
1.766
1.850
1.958
2.036
2.119
2.467
2.595
2.681
2.726
2.761
3.005
3.157
3.264
3.662
3.853
3.905
3
0.820
1.000
1.038
1.107
1.765
1.849
1.956
2.033
2.115
2.462
2.589
2.675
2.720
2.755
2.998
3.149
3.255
3.652
3.842
3.894
4
0.819
1.000
1.039
1.108
1.766
1.850
1.958
2.035
2.117
2.465
2.591
2.681
2.724
2.760
3.003
3.178
3.259
3.655
3.847
3.899
5
0.820
1.000
1.038
1.107
1.762
1.846
1.953
2.030
2.112
2.459
2.585
2.674
2.717
2.752
2.995
3.169
3.251
3.646
3.837
3.889
6
0.819
1.000
1.038
1.108
1.765
1.849
1.952
2.032
2.115
2.462
2.589
2.675
2.720
2.756
2.998
3.170
3.254
3.650
3.841
3.893
7
0.820
1.000
1.038
1.108
1.764
1.848
1.954
2.031
2.113
2.460
2.587
2.672
2.717
2.752
2.995
3.145
3.251
3.646
3.836
3.889
8
0.820
1.000
1.038
1.108
1.763
1.846
1.952
2.030
2.112
2.460
2.584
2.672
2.715
2.751
2.993
3.167
3.251
3.610
3.835
3.886
9
0.820
1.000
1.038
1.104
1.765
1.848
1.955
2.032
2.115
2.461
2.587
2.673
2.718
2.753
2.995
3.145
3.250
3.644
3.835
3.887
10
0.819
1.000
1.038
1.107
1.763
1.846
1.953
2.029
2.111
2.457
2.583
2.669
2.714
2.749
2.991
3.141
3.247
3.640
3.830
3.883
平均值
0.819
1.000
1.038
1.107
1.765
1.848
1.955
2.032
2.115
2.461
2.587
2.674
2.718
2.754
2.996
3.156
3.253
3.644
3.838
3.890
RSD ，％
0.051
0.000
0.031
0.118
0.106
0.098
0.136
0.118
0.109
0.123
0.141
0.148
0.147
0.150
0.165
0.437
0.172
0.387
0.231
0.229
表4 10批鼠曲草饮片指纹图谱各共有峰的相对峰面积
Tab 4 Relative peak area of each common peak in the fin-
gerprint of 10batches of G. affine decoction pieces
峰号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
1
0.120
1.000
0.153
0.385
0.319
7.471
2.096
1.507
0.259
0.249
0.976
0.679
0.735
2.860
0.473
0.062
0.079
0.085
0.120
0.110
2
0.148
1.000
0.185
0.457
0.489
8.548
3.130
1.826
0.293
0.283
1.389
0.765
0.736
2.396
0.639
0.068
0.170
0.143
0.201
0.145
3
0.143
1.000
0.173
0.519
0.398
8.085
2.591
1.404
0.286
1.008
1.242
0.599
0.616
2.051
0.574
0.056
0.101
0.134
0.169
0.123
4
0.164
1.000
0.190
0.302
0.579
13.027
0.547
3.243
0.255
6.355
3.745
1.558
0.424
1.390
2.373
0.989
0.408
0.152
0.261
0.173
5
0.162
1.000
0.144
0.557
0.451
14.440
6.214
2.306
0.377
6.142
4.207
1.707
0.370
0.339
2.426
1.042
0.413
0.139
0.206
0.247
6
0.138
1.000
0.187
0.463
0.322
8.183
3.170
1.492
0.355
0.201
0.552
0.353
0.541
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0.049
7
0.118
1.000
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8
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9
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0.056
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0.105
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10
0.126
1.000
0.159
0.393
0.382
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2.417
1.507
0.275
0.261
1.113
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2.286
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0.055
0.105
0.104
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0.119
平均值
0.138
1.000
0.162
0.420
0.389
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1.588
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1.654
1.656
0.836
0.576
2.004
0.888
0.268
0.168
0.121
0.355
0.128
RSD ，％
11.640
0.000
12.685
18.873
24.369
27.807
52.708
50.254
19.075
149.025
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52.184
25.484
34.944
90.497
148.580
78.180
27.831
177.019
41.568
225
175
125
75
25
0
电压
，mV
0 20 40 60 80 100 120
时间，min
绿原酸
异鼠李素
图3 绿原酸和异鼠李素对照品的HPLC图（320nm）
Fig 3 HPLC chromatograms of chlorogenic acid and isorh-
amnetin（320nm）
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