全 文 ：第 32 卷第 6 期
2013 年 12 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Ｒesources
Vol． 32 No． 6
Dec． 2013
收稿日期:2013 － 05 － 13
基金项目:国家药典委员会 2010 版一部标准研究课题(YS － 229，YS － 230)
作者简介:许敏(1989 －)，女，在读硕士研究生，从事现代中药分析研究。
* 通讯作者:刘丽芳(1969 －)，女，博士，教授，主要从事中药活性成分和动物药研究。E-mail:liulifang69@ 126． com
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2013． 06． 013
HPLC法测定 3 种老鹳草药材中没食子酸和柯里拉京的含量
许 敏，陈 颖，段素敏，刘丽芳*
(中国药科大学 天然药物活性组分与药效国家重点实验室，江苏 南京 210009)
摘 要 目的:建立老鹳草、野老鹳草、牻牛儿苗中没食子酸、柯里拉京含量测定方法。方法:采用 HPLC 法，色谱
条件:色谱柱为 Diamonsil C18 ( 2) 色谱柱( 150 mm × 4． 6 mm，5 μm) ;流动相为乙腈 － 0． 1%磷酸梯度洗脱;流速为
1． 0 mL /min;检测波长为 274 nm; 柱温为 25℃。结果:没食子酸和柯里拉京的线性范围分别是: 0． 202 4 μg ～
2． 024 0 μg( r = 0． 999 6) 、0． 126 0 ～ 2． 520 0 μg( r = 0． 999 2) ，平均回收率分别是 97． 4% ( ＲSD = 1． 4% ) 、96． 7%
( ＲSD = 0． 9% ) 。结论:本法简便、准确、重复性好，可用于老鹳草药材的质量评价。
关键词 HPLC;老鹳草;野老鹳草;牻牛儿苗;没食子酸;柯里拉京
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2013)06 － 0039 － 03
Determination of Gallic Acid and Corilagin in 3 Species of
Lao-Guan-Cao by HPLC
Xu Min，Chen Ying，Duan Sumin，Liu Lifang*
(State Key Laboratory of Natural Medicines，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，China)
Abstract Aim:To establish a method for determining gallic acid and corilagin in Geranium wilfordii
Maxim．，Geranium carolinianum L． and Erodium stephanianum Willd． Methods:An HPLC method was
performed on a Diamonsil C18 column (150 mm ×4． 6 mm，5 m)with acetonitrile － 0． 1% H3PO4 as mo-
bile phase． The flow rate was 1． 0 mL /min，the detection wavelength was set at 274 nm and the column
temperature was 25 ℃ ． Ｒesults:The calibration curve of gallic acid and corilagin were linear in the
range of 0． 202 4 ～ 2． 024 0 g(r = 0． 999 6)and 0． 126 0 ～ 2． 520 0 μg(r = 0． 999 2)，respectively． The
average recovery of gallic acid and corilagin were 97． 4%(ＲSD =1． 4%)and 96． 7%(ＲSD =0． 9%) ，re-
spectively． Conclusion:The method is simple，accurate and suitable for the quality control for this herb．
Key words HPLC;Geranium wilfordii Maxim．;Geranium carolinianum L．;Erodium stephanianum
Willd．;gallic acid;corilagin
老鹳草为我国传统中药，2010 版药典规定其正
品为牻牛儿苗科植物牻牛儿苗(Erodium stephania-
num Willd．)、老鹳草(Geranium wilfordii Maxim．)或
野老鹳草(Geranium carolinianum L．)的干燥地上部
分，前者习称“长嘴老鹳草”，后两者习称“短嘴老鹳
草”［1］。其化学成分以鞣质、黄酮类最为丰富［2］，是
其重要的药效成分。鞣质的药理活性已远不止于收
敛固涩，而广泛应用于抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肝
病、止血及抗肿瘤等领域［3］。没食子酸和柯里拉京
为老鹳草素的主要分解产物，采用 HPLC 法对它们
进行含量测定，并比较了 3 种不同来源老鹳草药材
中这 2 种成分含量的差异，为老鹳草药材质量标准
的制定和进一步开发利用提供科学依据。
1 仪器与试药
Agilent 1200 HPLC Series 液相色谱仪(Agilent
公司，美国); (150 mm × 4． 6 mm，5 μm) (Dikma 公
司，美国);BS124S 万分之一分析天平(Sartorius) ;
LD24 型高速中药粉碎机 (浙江省温岭市大海药材
器械厂);没食子酸对照品(中国药品生物制品检定
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 32 卷
所，批号:110831 － 200302);柯里拉京对照品(中国
药品生物制品检定所，批号:111623 － 200301);老鹳
草(Geranium wilfordii Maxim．)(采于吉林省通化市
东昌区玉皇山)，牻牛儿苗(Erodium stephanianum
Willd．)(采于山东潍坊)，野老鹳草(Geranium caro-
linianum L．)(采于中国药科大学植物园);乙腈为
色谱纯(Tedia 公司，美国);水为乐百氏纯净水;其
他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件与系统适用性实验
色谱柱:Diamonsil C18(2)色谱柱(150 mm ×
4． 6 mm，5 μm)(迪马公司，美国);流动相:乙腈 －
0． 1%磷酸溶液，梯度洗脱(洗脱程序见表 1);柱温:
25 ℃;流速:1． 0 mL /min;进样量:20 μL;检测波长:
274 nm;色谱图见图 1。
表 1 洗脱程序
梯度时间 /min
流动相
乙腈 /% 0． 1%磷酸 /%
0 2 98
20 10 90
45 14 86
55 17 83
60 30 70
65 50 50
75 2 98
2． 2 溶液的制备
2． 2． 1 供试品溶液的制备
取样品粉末约 0． 5 g (过 40 目筛)，精密称定，
置 100 mL圆底烧瓶中，加水 25 mL，100 ℃水浴回流
1． 5 h，过滤，滤渣再用纯净水 25 mL同法提取 1 次，
合并滤液，转移至 50 mL量瓶中，加水定容至刻度，摇
匀。用微孔滤膜(0． 45 μm)滤过，取续滤液，即得。
2． 2． 2 对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品适量，加 50%甲醇制
成每 1 mL中含 0． 101 2 mg 的溶液;精密称取柯里
拉京对照品适量，加 50% 甲醇制成每 1 mL 中含
0． 126 0 mg的溶液，即得。
A
B
C
D
E
A:没食子酸标准品;B:柯里拉京标准品;
C:老鹳草;D:野老鹳草;E:牻牛儿苗
图 1 样品的 HPLC图
2． 3 标准曲线的绘制
2． 3． 1 没食子酸标准曲线的绘制
精密吸取 0． 101 2 mg / mL 的没食子酸对照品
溶液，用 50%甲醇配置成浓度为 0． 010 12 mg / mL、
0． 025 3 mg / mL、0． 050 6 mg / mL、0． 075 9 mg / mL、
0． 101 2 mg / mL的 5 种溶液，摇匀，分别进样20 μL，
用上述色谱条件测定。以进样量(μg)为横坐标，测
得的峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，回归方
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第 6 期 许 敏，等:HPLC法测定 3 种老鹳草药材中没食子酸和柯里拉京的含量
程:Y = 2 742． 5X + 29． 546，r = 0． 999 6。表明在
0． 202 4 μg ～ 2． 024 0 μg之间有良好的线性关系。
2． 3． 2 柯里拉京标准曲线的绘制
精密吸取 0． 126 0 mg /mL的柯里拉京对照品溶
液，用 50% 甲醇配置成浓度为 0． 006 3 mg /mL、
0． 012 6 mg /mL、0． 025 2 mg /mL、0． 063 0 mg / mL、
0． 126 0 mg /mL的 5 种溶液，摇匀，分别进样 20 μL，
用上述色谱条件测定。以进样量(μg)为横坐标，测
得的峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，回归方
程:Y = 1 845． 4X － 58． 619，r = 0． 999 2。表明在
0． 126 0 μg ～ 2． 520 0 μg之间有良好的线性关系。
2． 4 精密度试验
精密吸取等体积的没食子酸(0． 025 3 mg /
mL)、柯里拉京(0． 025 2 mg / mL)对照品溶液注入
液相色谱仪，重复 6 次，没食子酸 ＲSD =1． 6%，柯里
拉京 ＲSD =4． 3%，表明仪器精密度良好。
2． 5 稳定性试验
精密吸取供试品溶液，分别于 0、3、6、9、12、24 h
测定，没食子酸 ＲSD = 4． 8%，柯里拉京 ＲSD =
2． 2%，表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2． 6 重复性试验
精密称取同一样品 6 份，按“2． 2． 1”项方法制
备，在“2． 1”项条件下测定，没食子酸含量分别为
0． 23%、0． 22%、0． 23%、0． 23%、0． 23%、0． 23%，平
均值为 0． 23%，ＲSD = 1． 7%;柯里拉京含量分别为
0． 23%、0． 23%、0． 23%、0． 23%、0． 23%、0． 21%，平
均值为 0． 23%，ＲSD = 3． 4%，表明方法的重复性良
好。
2． 7 检测限及定量限
分别将没食子酸和柯里拉京对照品溶液逐渐稀
释后进样，取 S /N = 3 时的浓度为检测限，经测定，
没食子酸检测限为 0． 032 μg /mL，柯里拉京检测限
为 0． 126 μg /mL;取 S /N = 10 时的浓度为定量限，经
测定，没食子酸定量限为 0． 063 μg /mL，柯里拉京定
量限为 0． 252 μg /mL。
2． 8 回收率试验
精密称取0． 25 g样品6份，分别加入相当于样品
含量 100%的两种对照品，同样品测定方法提取、制
备、计算，结果见表 2，表明本法具有较好的准确性。
2． 9 样品的含量测定
分别精密称取老鹳草、野老鹳草、牻牛儿苗粉末
约 0． 5 g，按“2． 2． 1”项方法处理，分别精密吸取供
试品溶液进样 20 μL，用外标法测定含量(n = 3)，结
果见表 3。
表 2 回收率测定结果
对照品
称样量
(g)
加入量
(mg)
理论值
(mg)
检测值
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
没食子酸
0． 252 1 0． 52 1． 10 1． 05 95． 40
97． 40 1． 4
0． 252 0 0． 52 1． 10 1． 08 97． 95
0． 252 1 0． 53 1． 11 1． 09 97． 93
0． 250 8 0． 54 1． 12 1． 09 97． 32
0． 251 5 0． 54 1． 12 1． 08 96． 38
0． 251 3 0． 51 1． 09 1． 08 99． 43
柯里拉京
0． 252 1 0． 75 1． 33 1． 28 96． 29
96． 74 0． 9
0． 252 0 0． 78 1． 36 1． 31 96． 17
0． 252 1 0． 77 1． 35 1． 31 96． 71
0． 250 8 0． 79 1． 37 1． 31 95． 66
0． 251 5 0． 75 1． 33 1． 30 97． 91
0． 251 3 0． 75 1． 33 1． 30 97． 68
表 3 含量测定结果
样品名
没食子酸 柯里拉京
含量(%) ＲSD(%) 含量(%) ＲSD(%)
老鹳草 0． 25 2． 3 0． 20 2． 9
野老鹳草 0． 75 0． 9 1． 63 0． 4
牻牛儿苗 0． 93 0． 7 3． 00 0． 3
3 讨 论
3． 1 老鹳草素(geraniin)属于可水解鞣质中的鞣花
鞣质(ellagitannin)，加水分解时分解为没食子酸，六
羟基联苯二甲酸，柯里拉京，鞣花酸等［4］。有报道
对野老鹳草采用水提［5 － 6］，实验发现水提均可增大
3 种老鹳草来源中没食子酸和柯里拉京的含量。
3． 2 前期考察了不同提取溶剂:50%甲醇、50%丙
酮、10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇、40%乙醇和水回
流提取，结果证实水提取得到没食子酸、柯里拉京总
量最多，又比较了不同提取时间(1 h、1． 5 h、2 h)和
提取次数(1 次、2 次、3 次)，结果表明水回流 1． 5 h
提取两次基本提取完全。
3． 3 样品测定结果表明，3 种来源的老鹳草中没食
子酸和柯里拉京的含量差异较大:老鹳草中没食子
酸和柯里拉京的含量最低，两者仅为 0． 2%左右;野
老鹳草和牻牛儿苗中没食子酸的含量均较高，其中
牻牛儿苗中最高;牻牛儿苗中柯里拉京的含量是老
鹳草的 15 倍、野老鹳草的 2 倍。研究表明［7］，柯里
拉京具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌、抗炎等广泛的生物
活性，具有很大的药用价值，市场前景广阔，已引起
国内外学者的重视，本研究结果对该化合物的进一
步深入研究和开发提供了有益的参考。
参考文献:
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医药科技出版社，2010:113．
( 下转第 44 页)
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 32 卷
3 讨 论
3． 1 流动相的选择。分别考察了甲醇 －水、乙腈 －
水、甲醇 － 0． 2%磷酸水、乙腈 － 0． 2%磷酸水 4 个溶
剂系统。结果表明采用甲醇 － 0． 2%磷酸水等度洗
脱，桦木酸的在样品中的峰形和分离度均达到要求。
为保证色谱峰定性的准确性，除上述流动相外，还采
用甲醇 － 0． 2%磷酸水溶液(70 ∶ 30)、乙腈 － 0． 2%
磷酸水溶液(65 ∶ 35)作为流动相，进行了样品与对
照品的定性比较，结果在不同洗脱条件下，样品均有
相同的色谱峰与对照品对应。
3． 2 检测波长的选择。桦木酸的紫外扫描结果表
明，在 202 nm处有最大吸收，且无其他成分干扰，所
以选定检测波长为 202 nm。
3． 3 样品提取方法的选择。根据对照品的溶解性，
选择以乙醇为溶剂。考察了甲醇质量分数、提取方
式、时间、温度和提取次数、对样品中所测成分的影
响，以桦木酸的峰面积为评价指标，结果表明:95%
乙醇热回流提取 4 h为最佳提取条件。
3． 4 不同批次药材的含量分析。对采自安徽和江
苏的 10 批药材进行含量测定后发现，所有批次的药
材中均含有桦木酸。但是由于采收时间不同，导致
不同批次中桦木酸含量有差异。同时贮存方法、种
植条件等也会对桦木酸的含量产生影响。
本研究首次建立了 ＲP － HPLC 法测定泽兰中
桦木酸含量的方法。该方法准确、灵敏，可为建立泽
兰的质量标准提供参考。
参考文献:
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( 上接第 41 页)
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390 － 394．
2014 年《现代中药研究与实践》征订启事
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