全 文 ：有毒物质诱导 Kupfer细胞 、肝窦内皮细胞内的 iNOS活性显著
增高 , 由其诱导肝内巨噬细胞及一些杀伤细胞产生的 NO明显
增多 , 增多的 NO作为一种重要细胞因子引起肝损伤 , 一方面通
过抑制线粒体的呼吸 ,使肝细胞因能量缺乏或产生大量的自由
基而死亡。另一方面还原型 NO能与超氧阴离子作用形成过氧
亚硝酸阴离子(ONOO-), ONOO-与其分解产物羟自由基(OH-)
能引起组织细胞酯质过氧化和细胞毒性 , 从而对肝细胞造成损
伤。本实验结果显示模型组的小鼠肝组织中 NO含量明显增
加 , 而黄芩苷元组肝组织中的 NO含量呈剂量相关性下降 ,表明
黄芩苷元干预 CCl
4
肝损伤可能通过抑制 NO生成而保护肝组
织的作用。
　　肝脏脂质过氧化的程度可通过测定脂质过氧化物等来评
价 , MDA是不饱和脂肪酸过氧化作用的终产物 , 可严重破坏细
胞膜结构 , 导致细胞肿胀 、坏死。它在血清及组织中的含量高
低 , 间接反映了机体细胞受自由基攻击时组织的破坏程度。因
此 , 肝组织内 MDA含量的变化可反映肝损害的程度及治疗后
肝功能恢复的情况。本实验通过测定小鼠肝脏 MDA含量的变
化 , 发现 Bai能明显减少肝脏氧化产物 MDA的含量 , 低剂量组
未能显著性降低肝损伤血清中 ALT、AST酶的含量 , 但能显著性
地抑制 MDA的产生。同时黄芩苷元干预组的肝组织和血清中
的总抗氧化能力增强 ,表明该药对肝脏的保护作用与其清除或
抑制自由基有关。
　　综上所述 , 黄芩苷元在降酶 、抗氧自由基 、抑制细胞因子
NO等方面都有很明显的作用 , 对实验性肝损伤脂质过氧化的
保护作用有多种机制参与。
参考文献
1　 ShiehDE, LiuLT, LinCC.Antioxidantandfreeradicalscavenging
efectsofbaicalein, baicalinandwogonin.AnticancerRes, 2000;20(5A)∶
2861～ 2865
2　 JieunShin, HawonCho, SunWookHwang, etal.Bradykinin- 12-li-
poxygenase-VR1signalingpathwayforinflammatoryhyperalgesia.ProcNatl
AcadSciUSA, 2002;99(15)∶10150 ～ 10155
3　 ShimizuI, MaYR, MizobuchiY, LiuF, etal.EfectsofSho-saiko-to,
aJapaneseherbalmedicine, onhepaticfibrosisinrats.Hepatology, 1999;29
(1)∶282～ 284
4　ShiJ, AisakiK, lkawaY, etal.Evidenceofhepatocyteapoptosisinrat
liveraftertheadministrationofcarbontetrachloride.AmJPathol, 1998;153
∶515～ 525
5　 CampsJ, BargaloT, GimenezA, , Relationshipbetweenhepaticlipid
peroxidationandfibrogenesisincarbontetrachloride-treatedrats:efectofzinc
administration.ClinSci(Lond), 1992;83∶ 695 ～ 700
冷水七单体皂苷抗炎镇痛和免疫活性研究＊
周雪峰 ,唐　斓 1 ,张　鹏 ,阮汉利 ,张勇慧 ,皮慧芳 ,吴继洲＊＊
(华中科技大学同济医学院药学院 ,武汉　430030;1南方医科大学药学院 ,广州　510515)
　　摘　要　目的:研究从冷水七单体皂苷(Impatienspritzelisaponins, IPS)A～ E的抗炎镇痛和免疫抑制活性。方法:采用二甲
苯诱导的小鼠耳肿胀实验考察冷水七单体皂苷的抗炎活性 ,采用小鼠醋酸扭体实验考察镇痛活性 , 采用血清溶血素实验考察冷水
七单体皂苷的免疫调节活性。结果:IPSB、 IPSD、 IPSE有明显抗炎作用;IPSD有较好的镇痛作用;IPSA对体液免疫有较强的抑
制作用。结论:冷水七单体皂苷有一定的抗炎镇痛或免疫抑制作用。
　　关键词　冷水七单体皂苷;抗炎镇痛;免疫调节
　　冷水七(ImpatienspritzeliHook.f.var.hupehensisHook.
f.)为凤仙花科凤仙花属植物 ,其根茎为湖北省土家族治疗类风
湿关节炎常用的民族药。我们前期研究采用抗炎镇痛实验和
牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型 ,证实了冷水七的抗类风湿
关节炎作用 , 并筛选出正丁醇部位是其抗类风湿关节炎的活性
部位 [ 1, 2] 。我们对活性部位的化学成分研究发现其主要含有皂
苷类化合物 [ 3] 。为了寻找有望开发成抗类风湿关节炎新药的
活性单体 , 我们进一步对从活性部位分离得到的已经鉴定结构
的 5种皂苷类化合物冷水七单体皂苷(Impatienspritzellisapo-
nins, IPS)A～ E进行活性研究和筛选。
1　材料与方法
1.1　试验药物　冷水七单体皂苷 IPSA～ E由本课题组提供 ,
纯度高于 98%, 化学结构见图 1, 结构鉴定见文献 [ 3] 。双氯灭痛
(DS),河南驻马店制药厂。 硫唑嘌呤(AZP), 上海九福药业有
限公司。
图 1　 IPSA～ E的化学结构
27中药药理与临床 2008;24(1)
＊ 基金项目:国家自然科学基金(30371733)资助 　　　　＊＊通讯作者
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2008.01.017
1.2　 动物　昆明种小鼠 、豚鼠血清由华中科技大学同济医学
院实验动物中心。绵羊红细胞(SRBC)由湖北省防疫站实验动
物中心。
1.3　 方法
1.3.1　急性毒性研究 　选用体重 20±2g的昆明小鼠进行急
性毒性研究 , 以适当剂量一次性腹腔注射 , 注射量为 0.2 ml/20g
体重 , 每个受试药物设 5个剂量组 , 每组 10只 , ♀♂各半 , 剂距
为 0.85, 注射 2 h后给食 , 观察 7天。用 Bliss法计算 LD50及其
95 %的可信区间。
1.3.2　二甲苯诱导的小鼠耳肿胀实验 　取体重 30±3g的昆
明小鼠(♂)按体重随机分成 7组 , 每组 8只 ,各组小鼠乙醚麻
醉后 , 于左耳前后两面涂含有各单体皂苷或阳性药(DS)1 mg/
ml的二甲苯溶液各 40 μl,模型对照组直接涂 40 μl二甲苯。三
小时后将小鼠脱臼处死 , 用直径 9 mm打孔器在左右耳相同位
置打下耳朵片 , 称重 ,左右耳朵片的重量差作为肿胀度 , 并比较
组间差异显著性。
1.3.3　醋酸诱发小鼠扭体实验　 取体重 20±2 g的昆明小
鼠 , ♀♂各半 ,随机分为 12组 ,每组 8只。各单体皂苷和阳性药
DS用含 10%吐温的生理盐水配制所需浓度的溶液 , 各单体皂
苷剂量等同 ,约 LD50的 1/10和 1/20分别为高 、低剂量 ,即 2 mg/
kg和 1 mg/kg,阳性药 20mg/kg, 10%吐温的生理盐水作为阴性
对照。各组 ip给药 30 min后 ip0.3%醋酸 0.3 ml/20g, 记录注
射醋酸后 15min内扭体反应的次数。
1.3.4　血清溶血素实验　取体重 20±2 g的昆明小鼠(♂),
随机分为 8组 , 每组 8只。用含 10%吐温的生理盐水配制所需
浓度的溶液 , 各单体皂苷高低剂量分别设 2 mg/kg和 1 mg/kg,
阳性药 AZP10 mg/kg, 10%吐温的生理盐水作为阴性对照 , ip
给药 8d。于给药第 4d小鼠 ip20% SRBC0.2 ml/20g, 免疫后
继续给药。第 9d称体重后摘眼球取血 ,并取下脾脏和胸腺 ,称
重。分离血清后稀释 400倍。进行溶血素测定 ,计算每只小鼠
样品的 50%溶血值 HC50。
2　结果
2.1 　 IPSA～ E的 LD50　见表 1。
　　表 1　 IPSA～ E的 LD50和 95%可信区间 (n= 10)
组别 LD50 /(mg/kg) 95%可信区间 /(mg/kg)
IPSA 15.5 14.1～ 17.0
IPSB 23.8 21.5～ 26.3
IPSC 24.7 22.6～ 27.0
IPSD 24.8 22.8～ 27.0
IPSE 16.0 14.6～ 17.5
2.2　IPSA～E对二甲苯诱导的小鼠耳肿胀度的影响　表 2结
果显示 , 化合物 IPSB, IPSD, IPSE有明显抗炎作用。
　　表 2　 IPSA～ E对二甲苯诱导小鼠耳肿胀度的影响( x±s, n= 8)
组别 剂量(mg) 肿胀度(mg)
Model 15.4±2.9
DS　 0.04 3.9±2.1＊＊
IPSA 0.04 8.6±5.2
IPSB 0.04 3.3±4.1＊
IPSC 0.04 12.5±6.5
IPSD 0.04 8.2±2.2＊
IPSE 0.04 3.0±3.4＊
　　与 Model比较 ＊P< 0.05, ＊＊ P< 0.01 (下同)
2.3　IPSA～ E对醋酸诱发小鼠扭体次数的影响　表 3结果显
示 , IPSD的高低剂量和 IPSE的高剂量有明显镇痛作用。
　　表 3　 IPSA～ E对醋酸诱发小鼠扭体次数的影响( x±s, n= 8)
组别 剂量(mg/kg) 扭体次数　　
Model 33.3±6.7
DS 20 9.0±3.7＊＊
IPS-A 1 35.1±12.2
2 27.3±15.3
IPS-B 1 26.3±11.5
2 25.9±18.6
IPS-C 1 31.2±8.7
2 29.2±13.3
IPS-D 1 22.4±7.6＊
2 17.0±7.4＊
IPS-E 1 27.0±11.0
2 20.7±5.6＊
2.4　 IPSA、IPSD、IPSE对血清溶血素和脾 、胸腺指数的影响
　由于来源有限 , IPSB和 IPSC没有完成本实验。结果显示 ,
IPSA高剂量组可以显著降低溶血值 HC
50
, 此外 , IPSE的高低
剂量也有一定作用。各单体皂苷对免疫器官脾和胸腺没有显著
影响 ,见表 4。
　　表 4　 IPSA、IPSD、IPSE对小鼠溶血值 HC50 、脾和胸腺指数的影
响( x±s, n= 8)
组别 剂量(mg/kg) HC50　　 脾指数 胸腺指数
Model 179.2±30.6 1.00±0.10 1.00±0.20
AZP 10 136.0±8.5 0.83±0.11 0.72±0.24
IPSA 1 193.5±84.5 0.96±0.22 0.89±0.16
2 72.1±4.0＊＊ 0.85±0.14 0.85±0.17
IPSD 1 142.4±92.9 0.87±0.20 0.88±0.26
2 195.1±60.0 0.99±0.13 0.77±0.31
IPSE 1 108.1±41.3＊ 0.88±0.13 0.88±0.08
2 136.8±14.6＊ 0.92±0.25 0.83±0.20
3　讨论
　　炎症和免疫混乱为类风湿性关节炎的主要症状 , 故本实验
主要研究冷水七单体皂苷抗炎镇痛及免疫抑制作用 , 希望筛选
出活性化合物。本研究中的 5个冷水七单体皂苷是以刺囊酸为
母核的一系列三萜皂苷类化合物 , 其中 IPSC、 IPSD、 IPSE是
新化合物 [ 3] 。在本研究的抗炎镇痛和免疫活性实验中 , 除 IPS
C外 , 其他冷水七单体皂苷中都在某一方面显示了一定的活性 ,
说明冷水七有效部位的抗 RA活性并不是某一种活性成分单独
作用的结果 ,而是通过多种物质从抗炎 、镇痛和免疫抑制 ,或者
还有其他我们尚未发现的途径 ,多方面共同作用的综合结果。
参考文献
1　赵晓亚 ,向明 ,张勇慧,等.冷水七活性部位镇痛抗炎作用的研究.医
药导报 , 2005;24(1)∶10 ～ 12
2　ZhouXF, ZhaoXY, TangL, etal.Immunomodulatoryactivityoftherhizo-
mesofImpatienspritzeliivar.hupehensisoncolageninducedarthritismice.
JEthnopharmacol, 2007;109(3)∶505～ 509
3　 ZhouXF, ZhaoXY, TangL, etal.Threenewtriterpenoidsaponinsfrom
therhizomesofImpatienspritzellivar.hupehensis.JAsianNatProdRes,
2007;9(4)∶ 379 ～ 385
28 中药药理与临床 2008;24(1)