全 文 ：委陵菜嫩茎再生体系建立的研究
凌 杰1，宁淑香2 (1．铁岭卫生职业学院，辽宁铁岭 112001;2．辽宁师范大学生命科学学院，辽宁大连 116081)
摘要 ［目的］建立委陵菜再生体系技术，保护野生资源，实现人工栽培。［方法］以委陵菜嫩茎为材料，用组织培养的方法，进行愈伤组
织诱导与分化、试管苗生根、继代增殖、移栽定植的研究。［结果］愈伤组织诱导培养较适宜的培养基为:MS + 40 g /L蔗糖 + 0． 3 mg /L
6-BA +2． 8 mg /L 2，4-D;愈伤组织分化培养的合适培养基为:MS +35 g /L蔗糖 +0． 4 mg /L AgNO3 + 0． 1 mg /L NAA + 0． 8 mg /L ZT;不定
芽生根培养的较适宜培养基为 1 /3MS +15 g /L蔗糖 +0． 5 mg /L ABT +0． 2 mg /L IBA +0． 3 mg /L NAA。试管苗移栽成活率为 95． 1%，定
植成活率为 97． 8%。［结论］建立的再生体系，1株试管苗 1年能繁殖 23万株试管苗，定植的试管苗保持了野生委陵菜的植物学性状。
关键词 委陵菜;组织培养;再生体系
中图分类号 S812 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2012)36 －17547 －03
The Study on Establishment of Regeneration System for Potentilla chinensis
LING Jie et al (Tieling Health Vocational College，Tieling，Liaoning 112001)
Abstract ［Objective］ To establish regeneration system for Potentilla chinensis，protect wild resources and realize artificial cultivation．
［Method］By using tissue culture methods，the tender stems of Potentilla chinensis were used as materials to do the research on callus induc-
tion and differentiation，rooting and transplanting of tube seedlings． ［Results］The results showed that MS + sugar 40 g /L + 6-BA 0． 3 mg /L
+ 2，4-D 2． 8 mg /L and MS + sugar 35 g /L + AgNO3 0． 4 mg /L + NAA 0． 1 mg /L + ZT 0． 8 mg /L were the optimum media for callus induc-
tion and differentiation respectively． 1 /3 MS + sugar 15 g /L + ABT 0． 5 mg /L + IBA 0． 2 mg /L + NAA 0． 3 mg /L was the ideal medium for
rooting of adventitious buds，and 1 /3 MS + sugar 15 g /L + ABT 0． 5 mg /L + IAA 0． 2 mg /L was the ideal medium for rooting of subculture．
The transplanting survival rate of tube seedlings was 95． 1% and stable planting survival rate was 97． 8% ． ［Conclusion］The regeneration sys-
tem was established． The propagation speed of tube seedlings could be up to 230 000 per year． Colonization of plantlets maintained for all bio-
logical traits which wild plant has．
Key words Potentilla chinensis;Tissue Culture;Regeneration System
作者简介 凌杰(1966 － ) ，女，辽宁铁岭人，副教授，从事细胞生物学研
究，E-mail:nsx-567@ 163． com。
收稿日期 2012-10-22
委陵菜(Potentilla chinensis)为蔷薇科(Rosaceae)多年生
草本植物，生长于山坡、路旁或沟边，在我国的东北、华北和
西南等地区有分布［1］，在辽宁省的铁岭等地也有分布［2］。委
陵菜的嫩茎、叶和根可食，也可作家畜的饲料［3］，全株还可提
取栲胶和维生素［4］。委陵菜全草含槲皮素、山柰素、没食子
酸和壬二酸等成分，作中草药用，具有凉血止痢、清热解毒和
消炎止疼等功效，能治菌痢、阿米巴痢、咳嗽、吐血、便血、崩
漏、痔疮出血、带下、疮疖毒肿等疾病［4 －5］。近年来辽宁地区
的养猪专业户发现，用委陵菜的鲜草喂猪，能明显减少发病
率，提高养猪效益。由于委陵菜不仅具有重要的中药价值，
而且还能提高养猪效益，辽宁地区的人们都大量采挖药用、
饲用或出售，导致委陵菜的野生资源迅速减少，使其处入濒
危的状态。为了保护这种野生草药资源，实现栽培，研究者
对其进行了愈伤组织诱导培养与再生体系建立的研究。虽
然目前已有植物愈伤组织培养研究的报道［6 －8］，并有委陵菜
属植物组织培养研究的报道［9 －11］，但关于委陵菜嫩茎愈伤组
织诱导培养及再生体系建立的研究鲜有报道。为了保护这
种中草药资源，并进行栽培，笔者对委陵菜的嫩茎进行愈伤
组织培养研究，以期为建立起嫩茎再生体系提供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。委陵菜嫩茎，于 2012 年 6 月中旬采自铁
岭市郊区林旁，经鉴定为蔷薇科(Rosaceae)多年生草本植物
委陵菜(Potentilla chinensis)。
1． 1． 2 主要仪器。BOXUN立式压力蒸汽灭菌器，购自上海
博迅实业有限公司医疗设备厂;SP-DJ系列水平净化工作台，
由上海浦东物理光学仪器厂生产;sartorius分析天平，购自北
京塞多斯天平有限公司［13］。
1． 1． 3 主要试剂。氯化铵，由天津市大茂化学试剂厂生产;
硫酸镁，由天津市福晨有限公司生产;硝酸钾，由天津市光复
科技发展有限公司生产;琼脂，由北京奥博星生物技术有限
公司生产;蔗糖，由沈阳新兴试剂厂生产;乙醇，由天津市富
宇精细化工有限公司生产;氯化钙，由天津博迪化工股份有
限公司生产［13］。
1． 2 方法
1． 2． 1 试材灭菌。取委陵菜嫩茎适量，切成段，放在广口瓶
中，先用自来水冲洗后，再用浓度 0． 003%的安利洗涤液摇洗
3 min，接着用蒸馏水洗涤 2 次后转移到超净工作台上，再用
浓度 70%乙醇灭菌 5 ～10 s，迅速倒掉乙醇，并用无菌水洗涤
2次，接着用浓度 0． 06%的 HgCl2 溶液表面灭菌 13 min，最后
再用无菌水漂洗 7次，即获得无菌嫩茎［12］。
1． 2． 2 培养条件。参见凌杰大丁草的研究［12］。
1． 2． 3 嫩茎愈伤组织诱导。将嫩茎切成长0． 3 cm左右的无
生长点茎段后，接种到装有以 MS + 40 g /L蔗糖 + 0． 3 mg /L
6-BA为基本培养基，附加浓度不同的 2，4-D、IBA和 NAA培
养基上，进行无生长点嫩茎对愈伤组织诱导培养试验。嫩茎
愈伤组织诱导培养试验重复 3 次，每种处理接种 100 个
材料。
1． 2． 4 嫩茎愈伤组织的分化培养。把在 MS + 40 g /L 蔗糖
+0． 3 mg /L 6-BA +2． 8 mg /L 2，4-D培养基上培养的颗粒状
愈伤组织用枪状镊子分成包括多个颗粒、直径为 0． 3 ～ 0． 4
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(36):17547 － 17549 责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.36.170
cm的愈伤组织块后，接种到以 MS + 35 g /L蔗糖 + 0． 4 mg /L
AgNO3 + 0． 1 mg /L NAA 为基本培养基、附加浓度分别为
0. 4、0． 8、1． 2、1． 6 和 2． 0 mg /L的 6-BA、ZT和 KT3 中细胞分
裂素的培养基上，进行不同浓度细胞分裂素对愈伤组织分化
培养影响试验。每个试验重复 3 次，每种处理接种 100 块
材料。
1． 2． 5 不定芽生根培养及生根继代增殖培养。将分化培养
的不定芽从与愈伤组织表面处剪下，接种到以 1 /3MS + 15
g /L蔗糖 +0． 5 mg /L ABT2号生根粉(下称 ABT)+0． 2 mg /L
IBA为基本培养基，附加浓度分别为 0． 1、0． 3、0． 5、0． 7和 0． 8
mg /L的 2，4-D、NAA和 IAA 3 种生长素的培养基上，进行不
同浓度的生长素对不定芽生根的影响试验。试验重复 2次，
每种培养基接种 100个不定芽。
把由不定芽在 1 /3MS + 15 g /L蔗糖 + 0． 5 mg /L ABT +
0． 2 mg /L IBA +0． 3 mg /L NAA的培养基上生根培养的试管
苗剪成具有 2个生长点且生长着 2个叶片的茎段，然后接种
到 1 /3MS +15 g /L蔗糖 +0． 5 mg /L ABT并附加浓度分别为
0． 1、0． 2、0． 3、0． 4 和 0． 5 mg /L的 NAA、IAA 培养基上，进行
试管苗的生根继代增殖培养。试验重复 2次，每种处理培养
100个茎段。在理想培养基上生根继代增殖培养 6 代，每代
接种 300个茎段。
1． 2． 6 试管苗的移栽和定植。把试管苗从培养瓶中取出，
洗净附着的培养基，一部分移栽到温室内下部为干净河沙的
营养钵中，试验重复 2次，移栽数量为 400 株;另一部分移栽
到温室内下半部为营养土的营养钵中，试验重复 2 次，移栽
数量 500株。把在营养钵中移栽成活的 850 株试管苗，于 6
月 15日一次性定植到大连市郊区的草地上，并定期观察
统计。
2 结果与分析
2． 1 不同材料对愈伤组织诱导培养的影响 培养 65 d观察
统计可知，附加不同浓度 2，4-D、NAA 的培养基上能较好的
诱导生长出愈伤组织;但从生长的愈伤组织块的长势、大小
和诱导率 3个方面看，在附加 NAA 的培养基上愈伤组织诱
导生长效果比附加不同浓度 2，4-D的差;在附加 2，4-D的培
养基上，浓度不同，其效果也不同。诱导率最高、愈伤组织生
长最快，且长势较旺盛的是出现在附加浓度为 2． 8 mg /L 2，4-
D的培养基上。对诱导培养过程的观察还看到，接种第 9 天
时，培养的嫩茎几乎没有变化。从 10 d左右开始，在附加浓
度为 2． 8 mg /L 2，4-D的培养基上可见在嫩茎切口接触培养
基的位置开始诱导生长出愈伤组织。初期生长的愈伤组织
几乎是无色的，但随着培养天数的增加，愈伤组织的诱导率
迅速增加，并且诱导生长为由许多浅嫩绿色直径为 0． 2 ～ 0． 5
cm颗粒组成的半球状愈伤组织(见图 1)。试验结果表明，
MS +40 g /L蔗糖 +0． 3 mg /L 6-BA +2． 8 mg /L 2，4-D是委陵
菜嫩茎愈伤组织诱导培养较适宜的培养基(表 1)。
2． 2 不同浓度细胞分裂素对嫩茎愈伤组织分化培养的影
响 培养 65 d观察统计可知，附加不同浓度 2，4-D、NAA 的
培养基上能较好的诱导生长出愈伤组织;但从生长的愈伤组
表 1 不同浓度的 2，4-D、IBA、NAA嫩茎愈伤组织诱导培养的影响
2，4-D
mg /L
IBA
mg /L
NAA
mg /L
诱导率
%
愈伤组织块平
均直径∥cm
长势
0 0 0 0 0 －
0． 7 0 0 41 0． 7 +
1． 4 0 0 67 1． 1 +
2． 1 0 0 89 1． 6 + +
2． 8 0 0 94 1． 8 + +
3． 5 0 0 52 1． 0 +
0 0． 7 0 0 0 －
0 1． 4 0 0 0 －
0 2． 1 0 0 0 －
0 2． 8 0 0 0 －
0 3． 5 0 0 0 －
0 0 0． 7 17 0． 3 +
0 0 1． 4 28 0． 4 +
0 0 2． 1 50 0． 6 +
0 0 2． 8 31 0． 5 +
0 0 3． 5 16 0． 2 +
注:“－”为不生长;“ +”为生长效果一般;“ + +”为生长效果佳，
下同。
图 1 颗粒状愈伤组织
织块的长势、大小和诱导率 3 个方面看，在附加 NAA的培养
基上愈伤组织诱导生长效果比附加不同浓度 2，4-D的差;在
附加 2，4-D的培养基上，浓度不同，其效果也不同。诱导率
最高、愈伤组织生长最快，且长势较旺盛的是出现在附加浓
度为 2． 8 mg /L 2，4-D的培养基上。对诱导培养过程的观察
还看到，接种第 9 天时，培养的嫩茎几乎没有变化。从 10 d
左右开始，在附加浓度为 2． 8 mg /L 2，4-D的培养基上可见在
嫩茎切口接触培养基的位置开始诱导生长出愈伤组织。初
期生长的愈伤组织几乎是无色的，但随着培养天数的增加，
愈伤组织的诱导率迅速增加，并且诱导生长为由许多浅嫩绿
色直径为 0． 2 ～ 0． 5 cm 颗粒组成的半球状愈伤组织(见图
2)。试验结果表明，MS +40 g /L蔗糖 +0． 3 mg /L 6-BA +2． 8
mg /L 2，4-D是委陵菜嫩茎愈伤组织诱导培养较适宜的培养
基(表 1)。
2． 3 不同浓度的生长素对不定芽生根的影响 培养 32 d时
观察统计可知，在附加浓度为 0． 3 mg /L NAA的培养基上不
定芽的生根效果最好。2次重复试验平均生根率为 96． 5%，
每株试管苗生根 8． 7条，具有 6． 4个叶片，茎粗 0． 2 cm，试管
84571 安徽农业科学 2012 年
苗的株高为 3． 1 ～6． 7 cm，外观上生长旺盛，无效试管苗仅占
1． 4%。试验结果表明，1 /3MS +15 g /L蔗糖 +0． 5 mg /L ABT
+0． 2 mg /L IBA +0． 3 mg /L NAA是委陵菜不定芽生根培养
的适宜培养基。
表 2 不同浓度的 6-BA、ZT、KT对愈伤组织分化培养的影响
6-BA
mg /L
ZT
mg /L
KT
mg /L
分化率
%
平均分化不
定芽个数
长势
0 0 0 0 0 －
0． 4 0 0 17 1． 8 +
0． 8 0 0 13 1． 3 +
1． 2 0 0 6 1． 3 +
1． 6 0 0 0 0 －
2． 0 0 0 0 0 －
0 0． 4 0 78 3． 1 + +
0 0． 8 0 94 5． 5 + +
0 1． 2 0 67 5． 3 +
0 1． 6 0 23 2． 6 +
0 2． 0 0 21 2． 0 +
0 0 0． 4 0 0 －
0 0 0． 8 0 0 －
0 0 1． 2 0 0 －
0 0 1． 6 0 0 －
0 0 2． 0 0 0 －
图 2 愈伤组织分化出绿色芽点
2次重复的生根继代增殖培养试验结果表明，在附加
0. 2 mg /L IAA的培养基上生根继代增殖培养的较最理想，其
平均的生根率为 98． 2%，且试管苗生长非常旺盛，几乎没有
无效苗(见图 3)。研究结果表明，1 /3MS + 15 g /L蔗糖 + 0． 5
mg /L ABT +0． 2 mg /L IAA培养基是生根继代增殖培养的理
想培养基。对 2次重复试验在这种培养基上连续继代增殖
培养 6代观察结果统计还发现，继代增殖培养的培养周期为
30 d，其繁殖系数为 2． 8，且试管苗外观上生长非常旺盛。
2． 4 试管苗移栽、定植与观察 移栽后 36 d观察统计可知，
2次共成活 856株，平均成活率为 95． 1%。定植后 48 d观察
统计可知，试管苗成活 831 株，成活率为 97． 8%。试验结果
表明，成活的试管苗群体生长整齐、旺盛、当年开花结果，保
持了野生委陵菜的植物学性状。
3 讨论
研究表明，在植物愈伤组织诱导培养中，2，4-D对愈伤组
织的作用最强［13 －14］。笔者在进行无芽嫩茎愈伤组织的诱导
图 3 生长旺盛的试管苗
试验中，研究了 2，4-D、IBA 和 NAA 等 3 种生长素对愈伤组
织诱导的影响。试验结果证明，2，4-D对无芽嫩茎愈伤组织
的诱导效果最好。虽然这个试验没有对 IAA进行比较，但在
已经试验的 3种生长素中明显地看出 2，4-D 对委陵菜嫩茎
愈伤组织的诱导作用效果最好。
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