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六道木嫩芽快速繁殖的研究



全 文 :收稿日期:2012-09-01
*基金项目:辽宁省普通高等教育本科教学改革研究项目(201203041-4);辽宁省大学生创新创业训练项目(201203015011)
作者简介:汪思奇(1992-),女,辽宁开原人,在读本科生,从事植物组织培养研究
**通讯作者:姜长阳(1953-),男,辽宁大连人,教授,从事植物技术研究。E-mail:changyangjiang@126.com
文章编号:1002-2724(2012)05-0012-04
六道木嫩芽快速繁殖的研究*
汪思奇,杨萌萌,宋年平,宁淑香,姜长阳**
(辽宁师范大学生命科学学院,辽宁 大连116081)
摘要:为满足观赏栽培对六道木种苗的需求,以具生长点的嫩茎为材料,采用组织培养的方法,进行了生长点的生长、生
长芽的分化、分化芽的生根、试管苗的生根及生根继代增殖培养、试管苗的移栽与定植的研究。结果表明:1/2MS+6-BA
0.8mg/L+NAA0.1mg/L是生长点伸长生长培养的理想培养基;MS+AgNO30.5mg/L+ZT1.5mg/L+NAA0.1mg/L是生
长芽分化培养与分化继代增殖培养的理想培养基;1/4MS+蔗糖15g/L+ABT0.9mg/L是分化芽生根培养和试管苗生根继
代增殖培养的理想培养基。试管苗移栽成活率为95.6%,定植成活率为98.4%,定植的试管苗保持了六道木的植物学性状和
观赏性状。
关键词:六道木;组织培养;无性系
中图分类号:S722.3+7        文献标识码:A
The Study on Rapid Propagation for Tender Buds of Abelia biflora
Wang Siqi Yang Mengmeng Song Nianping Ning Shuxiang Jiang Changyang
(Colege of Life Science,Liaoning Normal University,Dalian 116029,China)
Abstract:To meet the need of germchits for cultivation,the tender stems with growing points of Abelia biflora were used
as materials to do the research by using tissue culture methods.The study was mainly on growth of growing points,differenta-
tion of adventitious buds,rooting and subculturing of tube seedlings,and tube seedlings transplanting colonization.The results
demonstrated that 1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L and MS+AgNO30.5mg/L+ZT1.5mg/L+NAA 0.1mg/L
were the he optimum medium for growth and differentation of growing points respectively.1/4MS+ABT1.0mg/L+sucrose
15g/L was the suitable medium for rooting and subculture.The transplanting survival rate of tube seedlings was 95.6%and
stable planting survival rate was 98.4%.Colonization of plantlets maintained for al biological traits and ornamental traits of
Abelia biflora.
Keywords:Abelia biflora;Tissue Culture;Clone
  六道木(Abelia biflora)又称二花六道木,属于
忍冬科、六道木属灌木植物[1]。生长于多石山坡的
灌丛中,在我国的河北、陕西、内蒙古等地区有分布,
在辽宁的朝阳、凌海等地也有分布[2]。近年来大连
地区有观赏栽培,既可配植于林下,又可栽培于石
缝、岩石园或建筑物的背阴面,因其叶秀花美而很受
人们的欢迎[3]。但在大连的观赏栽培中几乎不结种
子,所以只能用扦插和分株的方法进行繁殖。但这
两种繁殖方法繁殖速度慢,难以满足人们绿化栽培
对种苗的大量需求。为此,研究者对其进行了组织
培养及快速繁殖的研究。虽然已有金边大花六道木
组织培养研究的报道[4],但迄今未见六道木组织培
养研究的报告。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 材料 5月中旬,将大连花坛上生长非常旺
盛的六道木嫩枝剪下,在实验室中将除掉叶片的嫩
茎放到广口瓶中,用无菌水洗涤3次后转移到超净
工作台上,用75%的乙醇灭菌10s左右立刻用无菌
水洗涤2次,再用0.05%的 HgCl3 溶液振荡灭菌
12min,接着用无菌水振荡洗涤7次,即可获得有芽
嫩茎。
1.1.2 培养条件 以附加不同浓度、不同种类的植
·21·
山东林业科技  2012年第5期  总202期  SHANDONG FORESTRY SCIENCE AND TECHNOLOGY  2012.No.5
物生长调节剂的1/2MS或1/4MS为培养基,在暗
培养(无光培养)或光照度 3000lx、12h/d、温度
25℃、pH6.0的条件下进行培养。
1.2 方法
1.2.1 生长点的生长培养
在超净工作台上,将无菌嫩茎切成边长0.5cm
左右、具有1个生长点的茎段(下称茎段),接种到附
加浓度为0.1mg/L的IBA、NAA或IAA的1/2MS
+6-BA0.8mg/L的培养基上,进行生长点伸长生
长培养试验。试验重复2次,每个培养基接种100
个茎段。
1.2.2 生长芽的分化培养
把以上培养的生长芽切成长0.5~1.0cm、至少
具有2个生长点的茎段后,接种到以 MS+Ag-
NO30.5mg/L为基本培养基,附加不同浓度 KT或
ZT的培养基上,进行不同种类、不同浓度的细胞分
裂素对生长芽分化培养的影响试验。生长芽的分化
培养试验重复3次,每种培养基接种100个茎段。
1.2.3 不同浓度的生长调节剂对分化芽生根培养
的影响
将以上有分化芽分化继代增殖培养的分化芽从
基部剪下,接种到1/4MS+蔗糖10g/L为基本培养
基,附加浓度分别为0.3mg/L、0.6mg/L、0.9mg/
L、1.2mg/LIBA、NAA、IAA和ABT2号(以下简称
ABT)的培养基上,进行不同浓度、不同种类生长调
节剂对分化芽生根的影响试验。每个处理接种100
个分化芽,重复3次。
把生根试管苗剪成长1.0~1.5cm、至少具有2
个生长点的茎段后,接种到与分化芽生根培养相同
的培养基上,进行生根继代增殖培养试验。试验3
次重复,每次继代增殖培养5代,每代接种培养200
个材料。
1.2.4 试管苗的移栽、定植
将生根继代增殖培养试管苗从培养瓶中取出,
洗净根部的培养基,放到底部有一层约1cm深干净
水层的500ml烧杯中,在温室的光照下炼苗3天后,
将试管苗移栽到上面为一层约6~10cm干净河沙
的苗床上。移栽后要保持前12天遮光、温度≥
18℃、湿度≥80%的环境条件。试验重复2次,移栽
株数分别为500株。
当温室苗床上移栽成活的试管苗长出3~4片
新叶时,定植到花坛上。定植试验重复2次,每次定
植400株。
2 结果与分析
2.1 不同光照条件、不同培养基对生长点生长的影

培养到45天时观察统计,结果见表1。由表说
明,在1/2MS+6-BA0.8mg/L+IBA0.1mg/L的
培养基上,生长点不能伸长生长;在1/2MS+6-
BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L和1/2MS+6-BA
0.8mg/L+IAA0.1mg/L两种培养基上,生长点均
可伸长生长为生长芽。但在光照条件下的生长率较
低、长势较差。综合比较结果明显可见,在1/2MS
+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L这种培养基上,
生长点伸长生长为生长芽的效果最好,不仅伸长生
长率达到了86%,而且生长芽外观上长势旺盛。观
察测量计算证明,在1/2MS+6-BA0.8mg/L+
NAA0.1mg/L这种培养基上培养的生长芽,平均长
度2.8cm,而在1/2MS+6-BA0.8mg/L+IAA
0.1mg/L这种培养基上培养的生长芽,最长的也仅
为1.9cm,并且前者茎较粗,叶片数多,初期培养的
生长芽为浅黄色,后期为黄色。2次重复试验的的
结果基本一致。以上结果说明,在暗培养的条件下,
1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L这种培
养基是六道木生长点伸长生长培养的理想培养基。
表1 不同光照条件、不同培养基对生长点伸长生长的影响
光照条件 培养基(单位:mg/L) 接种数量 生长率(%) 生长芽长势
暗培养 1/2MS+6-BA0.8+IBA0.1  100  0 -
暗培养 1/2MS+6-BA0.8+NAA0.1  100  86 ++
暗培养 1/2MS+6-BA0.8+IAA0.1  100  26 +
光照 1/2MS+6-BA0.8+IBA0.1  100  0 -
光照 1/2MS+6-BA0.8+NAA0.1  100  34 +
光照 1/2MS+6-BA0.8+IAA0.1  100  11 +
注:-不生长;+长势一般;++长势旺盛。下同。
2.2 不同种类、不同浓度的细胞分裂素对生长芽分
化培养的影响
观察表明,在培养的前15天左右,培养芽由黄
逐渐变绿,且插入培养基的基部切口有所膨大。之
后,在有的培养基上,伴随生长芽的生长,下部接触
培养基的生长点也逐渐形成分化芽。培养到60天
时统计观察,结果见表2。由表可见,在不加细胞分
裂素和加入不同浓度 KT的培养基上,培养的生长
芽不分化。在不同浓度ZT的培养基上,培养的生
长芽均可分化生长出分化芽。其中在浓度为
1.5mg/L的培养基上,不仅分化率最高、平均分化
·31·
山东林业科技 汪思奇等:六道木嫩芽快速繁殖的研究 2012年第5期
芽数最多,而且分化芽长势旺盛。观察还表明,接种
培养到15天时,接种在浓度为1.5mg/L的培养基
上生长芽,几乎都可见基部长出分化芽,而后,伴随
着先生长的分化芽的生长,又会相继生长出多个分
化芽。培养到60天时,每个培养生长芽就会生长出
一个由2~6个绿色分化芽组成、高2cm左右分化
芽丛。把培养的分化芽从基部切下,接种到相同的
培养基上,进行分化芽的分化继代增殖培养,3次重
复试验,每次试验重复6代的结果证明:42天为一
个培养周期,会培养出一代高为2.6cm左右,繁殖
系数为3.3的生长旺盛的分化芽。3次重复试验的
的结果基本一致。以上试验结果证明:MS+Ag-
NO30.5mg/L+ZT1.5mg/L+NAA0.1mg/L这种
培养基是六道木生长芽分化培养与分化继代增殖培
养的理想培养基。
表2 不同种类、不同浓度细胞分裂素对生长芽分化培养的影响
KT(单位:
mg/L)
ZT(单位:
mg/L)
接种
数量
分化率(%)
平均分化
芽数/个
分化芽长势
0  0  100  0  0 -
0.5  0  100  0  0 -
1.0  0  100  0  0 -
1.5  0  100  0  0 -
2.0  0  100  0  0 -
2.5  0  100  0  0 -
3.0  0  100  0  0 -
0  0.5  100  30  1.6 ++
0  1.0  100  73  2.6 ++
0  1.5  100  94  4.1 ++
0  2.0  100  22  2.4 +
0  2.5  100  14  2.0 +
0  3.0  100  3  1.3 +
2.3 不同浓度的生长调节剂对分化芽生根培养的
影响
培养到32天时观察统计,结果如表3所示,在
附加不同浓度IBA的培养基上几乎不生根;在附加
不同浓度 NAA、IAA 和 ABT的培养基上均可生
根。其中在附加浓度为0.9mg/LABT的培养基上
生根效果最好,不仅生根率为93%、每株试管苗平
均生根为3.8条,而且试管苗长势旺盛。对生根培
养的过程观察还表明,在附加浓度为0.9mg/LABT
的培养基上,培养到14天时,大多数培养的分化芽
就会生长出1~3条、长0.2~0.4cm白色根。试管
苗生根继代增殖培养的结果表明:继代培养周期为
30天,所培养的试管苗平均生根率为95.5%、生根
4.7条/株、株高3.9~4.8cm,试管苗外观上生长旺
盛,平均每个培养周期的繁殖系数为2.8。由此可
见,1/4MS+蔗糖15g/L+ABT0.9mg/L是六道木
分化芽生根培养和试管苗生根继代增殖培养的理想
培养基。
表3 不同浓度的ABT与IAA对不定芽生根培养的影响
IBA
(mg/L)
NAA
(mg/L)
IAA
(mg/L)
ABT
(mg/L)
生根率(%)
平均生根
条数/株
试管苗
长势
0 0 0 0 0 0 -
0.3  0  0  0  0  0 -
0.6  0  0  0  0  0 -
0.9  0  0  0  3  1.3 +
1.2  0  0  0  0  0 -
0  0.3  0  0  31  1.9 +
0  0.6  0  0  79  26 +
0  0.9  0  0  27  2.1 +
0  1.2  0  0  29  1.5 +
0  0  0.3  0  13  5.0 ++
0  0  0.6  0  49  5.1 ++
0  0  0.9  0  24  3.1 +
0  0  1.2  0  11  1.9 +
0  0  0  0.3  46  2.6 ++
0  0  0  0.6  72  3.3 +
0  0  0  0.9  93  3.8 ++
0  0  0  1.2  65  3.1 +
2.4 试管苗的移栽、定植
移栽后30天统计表明:第1次移栽成活477
株,第2次479株,两次共成活956株,平均成活率
为95.6%。
定植后45天时统计表明:2次移栽共成活787
株,平均成活率为98.4%。观察表明,定植的试管
苗不仅容易定植成活,而且成活的试管苗生长速度
快,根系发达而洁白,外观上生长旺盛整齐,翌年开
花,并保持了六道木的所有植物学性状和观赏性状。
3 讨论
定植成活的试管苗保持了六道木的所有植物学
性状和观赏性状证明:采用本研究所繁殖的六道木
试管苗,可以作为园林绿化的种苗。
在本研究的试管苗生根继代增殖培养中,30天
为一个继代增殖培养周期,其繁殖系数为2.8。按
照这种繁殖速度,每年能繁殖出2.812(约为23万)
株试管苗。这种繁殖速度,完全能满足人们观赏栽
培对种苗的大量需求。 (转第128页)
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山东林业科技 2012年第5期
模式,更多的要体现在服务地方经济,服务地方社会
上面。尤其是目前中国的教育缺少中间层次,出现了
断层,缺乏一些好的单纯教学型的院校[8]。在这种情
况下,地方师范院校只有结合自身实际情况和地域特
点,找准定位,趋向于培养动手能力强,能够服务地方
经济的应用型人才,才能走出发展困境,在众多高等
院校中脱颖而出,打造出自己的办学特点。
3.4 打造新型人才培养模式
省内师范院校的园林专业,从整体办学实力来
看,与985高校、211高校、地方名牌院校相比,在理
论教学、科研方面存在较大差距,与专科和高职院校
相比,实践教学方面又处于劣势地位。可见,这些本
科院校的风景园林专业人才培养定位更困难、更复
杂。如何在4年的园林专业教学过程中,完善学生
的理论知识储备,提高动手实践能力,打造出具备自
身特色的新型人才培养方案,是目前师范院校面临
的难题和困境。
鉴于办学条件的限制,目前省内师范类院校风景
园林专业可以参照“1+2+3”的新型人才培养模式来
进行,即“1个专业基础平台,2个专业模块,3个专业
方向”。“1个专业基础平台”指专业基础课程和英
语、高数等通识类课程;“2个专业模块”是指风景园
林规划与设计,风景园林工程2个模块课程;“3个专
业方向”是指依据各院校专业实力、学生就业意向、人
才需求等因素,风景园林规划与设计模块设置景区规
划、景观设计、景观建筑3个专业方向,风景园林工程
设置风景园林施工、风景园林管理、风景园林造价3
个专业方向,充分体现了多类型人才培养目标,供学
生依据自身基础、兴趣及就业意愿自由选择[9]。
4 结语
  安徽省师范类院校园林专业,尽管开办较晚,但
近几年发展壮大的很快,区别于传统的研究型人才
培养模式,更多的注重实践教学环节和课外专业技
能的训练。尽管目前在师资力量、办学条件、生源规
模等方面与老牌的农林院校和工科、艺术类高校有
较大差距,但如何才能够创办出自己的特点和优势,
就需要教学机构抓住办学核心是加强实践教学,重
点是强化专业基础、培养专业兴趣、突出专业特色。
通过学习和借鉴老牌院校的办学经验和办学理念,
加以吸收和转化,并结合师范院校自身特点,逐步推
进园林课程体系改革,加快师资队伍完善,提高教学
质量,就能够走出有特色的办学路子,以更好的服务
于地方经济。
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(接第14页)
在前人的试管苗培养研究中,在培养基中加入
的生根剂都是IAA、NAA、IBA 3种生长素[5~7],
ABT生根粉一般只用于嫩枝或硬枝的扦插[8]。但
在本研究中,在培养基中加入了低浓度的 ABT生
根粉也得到了较理想的深耕效果。这证明ABT生
根粉也可用于某些植物试管苗的生根培养。
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