全 文 ：续表 2
峰号 相对峰面积
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
平均值 RSD(%)
16 0.177 0.177 0.175 0.175 0.174 0.174 0.169 0.166 0.164 0.161 0.171 3.396
17 0.055 0.055 0.054 0.054 0.054 0.054 0.054 0.054 0.053 0.053 0.054 1.040
18 0.182 0.182 0.181 0.182 0.182 0.182 0.182 0.181 0.180 0.181 0.182 0.308
19 0.262 0.260 0.261 0.261 0.262 0.262 0.259 0.261 0.259 0.261 0.261 0.428
20 1.193 1.194 1.186 1.184 1.189 1.181 1.185 1.189 1.176 1.170 1.185 0.629
21 0.085 0.085 0.084 0.083 0.083 0.083 0.086 0.086 0.084 0.083 0.084 1.419
S1 0.999 6 0.999 4 0.999 5 0.999 5 0.999 4 0.999 3 0.999 7 0.999 7 0.999 0 0.999 6
S2 0.999 7 0.999 7 0.999 7 0.999 7 0.999 7 0.999 6 0.999 8 0.999 8 0.999 5 0.999 8
　　S1为 “相关系数 ”法;S2为 “夹角余弦 ”法
2.5.3　标准指纹图谱的技术参数及相似度计算 在共有指纹
峰中 , 7号峰(S峰)、20号峰的峰面积大于总峰面积的 10%, 3, 6,
10号峰的峰面积大于总峰面积的 5%, 参照中药注射剂指纹图谱
研究的技术要求 , 只考虑 3号峰 、6号峰 、7号峰 、10号峰及 20号
峰的峰面积比值 , 其余各共有峰均按其相对保留时间定性。
标准指纹图谱的技术参数:以金丝桃苷色谱峰的保留时间和
峰面积积分值为 1, 计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面
积;以 21个共有峰峰面积的均值做模板 , 利用 “相关系数 ”法和
“夹角余弦”法 [ 2]计算指纹图谱的相似度 , 结果见表 2和表 3, 2
种方法计算的相似度结果均在 0.99以上。
3　讨论
3.1　检测波长的选择 实验过程中运用 PAD检测器对各色谱峰
进行了 200 ～ 400 nm扫描 ,并根据宁心红杞胶囊中各化学成分的
紫外吸收波形选择 205, 254, 270, 360 nm波长下的色谱图进行分
析比较。结果表明 , 在 205 nm下 , 各峰分离良好 , 共有峰较多且
峰形较好 , 因此选定 205nm为指纹图谱测定波长。
3.2 　柱温的选择 同一条件下考察柱温(25, 30, 35℃)对各峰
的影响 , 结果柱温为 30℃时峰形更好 , 故将柱温定为 30℃。
3.3　流动相的选择 主要考察了水 -甲醇 、水 -乙腈 、0.1%磷
酸 -乙腈 、 0.1%甲酸 -乙腈等多种流动相系统的色谱分离情况 ,
结果表明 , 0.1%磷酸 -乙腈流动相系统的色谱图基线不漂移且
分离度良好 , 故选择 0.1%磷酸 -乙腈组成流动相进行梯度洗
脱。比较了 0.1%磷酸 -乙腈系统不同梯度变化程序的色谱图
分离情况 ,结果表明 ,表 1中程序分离情况较好 , 最终选定为指纹
图谱测定梯度洗脱程序。
3.4 　提取方法考察 比较发现超声与回流两种提取方法供试品
溶液色谱图基本一致 , 从操作方便等方面考虑 ,选择超声处理为
提取方法。
本实验在严格考察实验方法的基础上 , 建立了宁心红杞胶囊
的 RP-HPLC分析方法 , 通过对 10个不同批次宁心红杞胶囊的
分析 ,确定了 21个共有峰 , 利用 “相关系数”法和 “夹角余弦 ”法
计算这 10个色谱图的相似度 , 结果均在 0.99以上 , 上述结果表
明所建立的宁心红杞胶囊指纹图谱具有代表性 , 其技术指标可
靠 ,稳定 , 重现性好。
参考文献:
[ 1 ] 　韦熔澄 ,徐昌芬 ,马　红 ,等.宁心红杞胶囊对围绝经期综合征的治
疗作用 [ J] .药学进展 , 2004, 28(11)521.
[ 2 ] 　苗爱东 ,孙殿甲.Excel2002在中药指纹图谱相似度计算中的应用
[ J].药学进展 , 2003, 27(1):51.
收稿日期:2007-05-11;　修订日期:2007-08-21
作者简介:万国兰(1964-),女(汉族),江西南昌人 ,现任南昌市第九医院
主管药师 ,主要从事临床药学工作.
白花败酱草提取物耐缺氧作用的研究
万国兰1 ,李洪亮 2 ,杨庆春 2 ,曾　靖2
(1.江西省南昌市第九医院　330000;
2.江西省赣南医学院 ·基础医学院 ,江西 赣州　341000)
摘要:目的 研究白花败酱草提取物对小鼠耐缺氧作用。方法 常压耐缺氧法 、断头喘息法 、结扎双侧颈总动脉法。结果
白花败酱草提取物能显著延长常压耐缺氧条件下小鼠的存活时间;显著性延长断头小鼠的喘息时间;显著延长脑缺氧时
间。结论 白花败酱草提取物具有显著的耐缺氧作用。
关键词:白花败酱草;　耐缺氧;　提取物
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2008)05-1130-01
　　白花败酱草 PatrinavilosaJuss.(PVJ)为败酱科植物 , 味辛 、
苦 , 性寒 [ 1] ,分别含有正三十二碳酸(Ⅰ ), 正三十二烷醇(Ⅱ),棕
榈酸(Ⅲ), 齐墩果酸(Ⅳ), aurentiamideacetate(Ⅴ), 胡萝卜苷
(Ⅵ ), β -谷甾醇(Ⅶ ), 7β -羟基 -β -谷甾醇(Ⅷ ), 豆甾醇
(Ⅸ )[ 2] 。本课题组已报道白花败酱草提取物对小鼠睡眠功能和
自发活动的影响 [ 3, 4] 。现报道白花败酱草提取物耐缺氧作用。
1　器材
1.1　仪器 可密闭的 250 ml磨口广口瓶秒表;架盘天平;电光天
平;手术器械。
1.2 　药品与试剂 实验样品由江西省药物研究所徐研究员提
供。盐酸普萘洛尔注射液 , 北京制药厂(770603);钠石灰 , 北票
矿务局氢氧化钙厂(971001)。
1.3 　动物 18 ～ 22 g昆明种小鼠(雌 、雄兼用), 本院实验动物
中心提供。
2　方法 [ 5]与结果
2.1　对小鼠常压耐缺氧的影响 取小鼠 40只 ,随机分为 4组 , 每
组 10只。第 1组 ipNS20.0ml· kg-1;第 2组 ip1%普萘洛尔溶
液 20.0mg· kg-1;第 3组 ip2.0 mg· kg-1的 PVJ溶液;第 4组 ip
4.0mg· kg-1的 PVJ溶液。 25 min后 , 将小鼠分别放入 250ml的
磨口广口瓶内 ,密封(瓶内放钠石灰 10 g, 用以吸收二氧化碳和
水 , 钠石灰上垫有滤纸 , 用以吸收尿液 , 每瓶放小鼠 1只 , 瓶口涂
以凡士林以防漏气。)以最后 1次呼吸为指标 ,观察小鼠的存活时
间 , 然后进行 t检验。结果见表 1。
2.2　对小鼠脑缺血的影响 取小鼠 30只,随机分为 3组,每组 10只。
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.5　
第 1组 ipNS20.0ml·kg-1;第 2组 ipPVJ溶液 2.0mg· kg-1;第 3
组 ipPVJ溶液 4.0mg· kg-1。 25min后 ,快速断头 ,记录小鼠断头后
至最后 1次喘息所需的时间 ,并进行t检验,结果见表 2。
表 1　白花败酱草提取物对小鼠常压耐缺氧的影响( x±s)
组别 剂量 C/mg· kg-1 存活时间 t/min 延长(%)
生理盐水 - 42.5±3.6 -
普萘洛尔 20.0 81.0±17.0＊＊ 90.60
PVJ提取物(低) 2.0 57.8±4.6＊ 36.00
PVJ提取物(高) 4.0 6.2±4.9＊＊ 79.30
　　与生理盐水组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
表 2　白花败酱草提取物对小鼠脑缺血的影响( x±s)
组别 剂量 C/mg· kg-1 存活时间 t/s 延长(%)
生理盐水 - 18.6±0.8 -
PVJ提取物(低) 2.0 22.1±1.6＊ 18.82
PVJ提取物(高) 4.0 25.3±2.2＊＊ 36.02
　　与生理盐水组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
2.3　对结扎双侧颈总动脉的影响 取小鼠 30只 ,随机分为 3组 ,
每组 10只 , 第 1组 ipNS10.0 mg· kg-1;第 2组 ipPVJ1.0 mg·
kg-1;第 3组ipPVJ1.5mg· kg-1。 3组小鼠喂养条件一致 ,每天
灌胃 1次 , 连续 7d,末次给药后 45min行乙醚麻醉 , 剪开小鼠颈
部皮肤 , 分离出双侧颈总动脉 ,并同时结扎 ,记录小鼠结扎双侧颈
总动脉至呼吸停止的时间 ,并进行 t检验。结果见表 3。
3　讨论
小鼠在密闭容器中受缺氧因素损害 ,主要反应在心和脑缺氧。
由于常压缺氧为非特异性缺氧 , PVJ能显著地延长小鼠的常压耐
缺氧存活时间, 表明 PVJ对脑缺氧或心肌缺血具有改善作用。
表 3　白花败酱草提取物对小鼠结扎双侧颈总动脉的影响( x±s)
组别 剂量 C/mg· kg-1· d-1存活时间t/s 延长(%)
生理盐水 - 86.0±12.8 -
PVJ提取物(低) 1.0 123.4±25.1＊ 43.48
PVJ提取物(高) 1.5 142.2±30.2＊＊ 65.35
　　与生理盐水组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
在断头喘息和结扎双侧颈总动脉的实验中 , 脑血液供应中
断 , 但脑中原有的血和营养物质尚能使脑功能维持一段时间 , 表
现在小鼠规律地喘息 , PVJ能明显延长小鼠的喘息时间 , 即能使
脑耗能减少 ,对断头脑缺氧及结扎颈总动脉脑缺氧具有保护作
用。总之 , PVJ对脑缺氧 、全身性缺氧时所致心肌缺氧所致心肌
耗氧增加引起的心肌缺氧有明显的改善作用。
参考文献:
[ 1 ] 　宋立人.现代中药大辞典 [ M].北京:人民卫生出版社 , 2001:1268.
[ 2 ] 　彭金咏 ,范国荣 ,吴玉田 ,等.白花败酱草化学成分研究 [ J] .中药
材 , 2005, 28(10):883.
[ 3 ] 　陈燕萍 ,曾　靖 ,叶和扬 ,等.白花败酱草水提取液中枢抑制作用的
研究 [ J] .中国药物与临床 , 2005, 5(6):439.
[ 4 ] 　钟星明 ,蒋绍祖 ,曾　靖 ,等.白花败酱草提取物对小鼠睡眠功能和
自发活动的影响 [ J] .中国临床康复 , 2004, 8(30):6688.
[ 5 ] 　陈　奇.中药药理研究方法学 [ M] .北京:人民卫生出版社 ,
2000:781.
收稿日期:2007-04-17;　修订日期:2007-08-20
作者简介:冉域辰 (1979-),女(汉族),四川达州人 ,现任四川省妇幼保健
院住院医师 ,硕士学位 ,主要从事儿童保健工作.
金银花水提物对双歧杆菌与乳酸杆菌体外生长的影响
冉域辰 1 , 黎海芪2 , 刘明芳 3
(1.四川省妇幼保健院 ,四川 成都　610031;　2.重庆医科大学附属儿童医院 ,重庆　400014;
3.重庆医科大学 ,重庆　400014)
摘要:目的 探讨金银花水提物对双歧杆菌 、乳酸杆菌体外生长的作用。 方法 制备金银花水提物浓度为 50%, 25%,
12.5%, 6.25%, 3.125%, 2%, 1.0625%的 BL肉汤和 MRS液体培养基;取两歧双歧杆菌 Bif1101和保加利亚乳酸杆菌标
准株悬液在药物培养液中生长后接种到平板 ,作平板菌落计数;不同培养时间点测定稀释 10倍后含不同浓度金银花水
提物的细菌培养液和对照组细菌培养液的吸光度(A)值 , 计算各培养基吸光度增加值(DA);测定细菌培养液 20, 24 h时
的 pH值。结果 当金银花水提物浓度 <6.25%时 ,则显著高于对照组;金银花水提物浓度 >6.25%, 则显著低于对照组;
乳酸杆菌培养液和双歧杆菌培养液 20, 24 h的 DA分别在金银花水提物浓度≤6.25%和≤3.125%时高于对照组;金银
花水提物浓度 <6.25%时 ,则 pH值显著低于对照组;而金银花水提物浓度 >6.25%时则相反。结论 低浓度金银花水提
物可以促进双歧杆菌 、乳酸杆菌在体外的生长。高浓度金银花水提物则抑制双歧杆菌 、乳酸杆菌在体外的生长。
关键词:金银花;　双歧杆菌;　乳酸杆菌;　双歧因子;　益生菌
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2008)05-1131-02
　　双歧杆菌和乳酸杆菌是胃肠道正常微生物区系中的重要有益
菌并与宿主终生伴随 ,发挥营养 、免疫调节 、生物屏障 、维持肠道菌
群平衡等重要作用 [ 1]。临床上发现应用双歧杆菌 、乳酸杆菌可以
调节机体免疫 、辅助治疗或预防严重感染 、多种胃肠道炎症 、过敏
性疾病 [ 2, 3] 。而现代药理学的研究发现 [ 4 , 5]许多中药和植物含有
促进双歧杆菌 、乳酸杆菌生长的成分。现代微生态学研究表明 [ 6]
含有多糖类的中药多具有双歧因子(bifidusfactor, BF)作用 ,可促
进双歧杆菌、乳酸杆菌的生长。金银花性寒味甘 ,其水溶剂提取物
含有葡萄糖、鼠李糖 、木糖 、阿拉伯糖等多糖类物质 [ 7] 。本实验对
金银花水提物在体外对双歧杆菌 、乳酸杆菌生长作用进行了研究。
1　材料
1.1　药物来源 金银花购自贵州省中药材公司 , 经重庆医科大学
药学系生药教研室鉴定为黄褐毛忍冬。取生药 300 g制成 300
ml流浸膏 ,定为 100%浓度。
1.2　菌种来源 两歧双歧杆菌 Bif1101 (Bifidobacteriumbifium)、
保加利亚乳酸杆菌(Lactobacillusbulgraticus)由重庆医科大学检
验系临床微生物学教研室提供。
1.3　培养基 BS培养基 、 LBS培养基 、 BL肉汤培养基和 MRS
液体培养基均自制。
2　方法
2.1　药物液体培养基的制备 将 BL肉汤和 MRS液体培养液稀
释为金银花水提物浓度为 50%, 25%, 12.5%, 6.25%, 3.125%,
2%, 1.062 5%的药物液体培养基。将不同浓度金银花水提物BL
肉汤和 MRS培养液的 pH值分别调至 7.22, 6.25, 5 ml/管分装 ,
每一浓度 12管。同时以 5 ml/管无金银花水提物的 BL肉汤和
MRS液体培养液各 12管(pH值分别调至 7.22, 6.25)作为对
照组。
2.2　菌液的制备 两歧双歧杆菌 Bif1101和保加利亚乳酸杆菌经
庖肉基复活后 , 各取一定的纯菌液分别接种于 5 mlBL肉汤和 5
mlMRS液体培养基中 , 37℃, 48 h厌氧培养后 ,无菌生理盐水水
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.5 时珍国医国药 2008年第 19卷第 5期