全 文 ：12 　刘中权 ,等.中药材龟甲及原动物的高特异性 PCR鉴
定研究.药学学报 , 1999 , 34(12)∶941
13 　Ding X , et al.Allele-Specific Primers fo r Diagnostic PCR
Authentication of Dendrobium officinale. Planta Med ,
2003 , 69(6)∶587
(2004-04-21收稿)
Application of Allele-Specific Primer in the Identi ficatin of Hedyotis diffusa
Liu Zhongquan , Hao M inggan , Wang Jialian
(Depar tment of Biology , Yancheng Teachers College , Yancheng 224002)
Abstract　Objective:To develop a convenient and effective method for the identification of Hedyotis dif fusa.Methods:DNA
templates w ere ex tracted from H.di ff usa and its adulterants samples on commercial markets.And DNA fragments o f rDNA ITS-2
regions w ere amplified and sequenced subsequently.ITS-2 sequences of all samples were aligned.The allele-specific primer w as de-
signed for distinguishing H.dif f usa.Results:The nucleotide difference between H.dif fusa and 8 other species is obvious in the
ITS-2 region.In addition , the allele-specific primers were employed to amplify the DNA from H.dif f usa and 8 o ther species.The
result indicated that a 392 bp DNA fragment was amplified from H.di ff usa , w hereeas no any fragment w as amplified from 8 other
species under the same reaction condition.Conclusion:The primers designed in the present study were highly specific for H.di f-
fusa.They could be used as key components in the H.dif fusa identification kit.
Key words　Hedyotis dif f usa;Allele-specific primer;Authentication
薄层色谱法鉴别辛夷药材
于宗渊1　孙中矾2　苏本正1
(1.山东省中医药研究院 ,济南 250014;2.山东大学化学与化工学院 ,济南 250012)
　　摘要　从望春花蕾中分离出 5 个化学成分 ,经波谱分析分别鉴定为辛夷脂素 、松脂素二甲醚 、木兰脂素 、里立
脂素 B二甲醚和望春花黄酮醇苷Ⅰ ;并建立了以辛夷脂素 、里立脂素 B 二甲醚和望春花黄酮醇苷 Ⅰ为对照品鉴别
望春花 、玉兰 、武当玉兰和木兰的薄层色谱法。本方法可有效地鉴别中国药典收载过的 4 个不同品种的辛夷药材。
关键词　辛夷　辛夷脂素　里立脂素 B 二甲醚　望春花黄酮醇苷Ⅰ 　薄层色谱鉴别
　　辛夷是一个多品种来源的中药材。中国药典对
辛夷药材原植物品种的规定经历了如下变化:1963
年版一部中仅规定了木兰 Magnolia l ili f lora
Desr.1 个品种;1977 年版一部中改变为望春花
Magnolia biondi i Pamp.、玉兰 Magnolia denudeata
Desr.和木兰 3个品种;而 1985 、1990 、1995和 2000
年版一部中又规定以望春花 、玉兰和武当玉兰
Magnolia sprengeri Pamp.3 种同属植物的干燥花
蕾作为辛夷供药用。辛夷药材各个品种所含的化学
成分有何异同 ,能否根据化学成分上的差异来有效
地对它们进行鉴别 ,尚未见报道。
我们从辛夷药材的主流品种望春花蕾中提取分
离并鉴定了 5个化学成分 ,而后建立了以其中 3 个
化学成分为对照品 ,用薄层色谱鉴别辛夷药材各个
品种的方法。本研究结果可为今后建立更加科学规
范的辛夷药材质量评价和控制方法提供参考 。
1 　材料与试剂
望春花蕾 Magnolia biondii Pamp.购自河南省
药材公司;玉兰花蕾 Magnolia denudeata Desr.购
自江苏省药材公司 ,武当玉兰花蕾 Magnol ia spren-
geri Pamp.购自陕西省安康市药材公司;木兰花蕾
Magnolia lili f lora Desr.采自济南植物园木兰园。
以上辛夷原植物品种均经山东省中医药研究院钟方
晓副研究员鉴定 。硅胶 G 薄层板为青岛海洋化工
集团公司产品;所用试剂均为分析纯 。
2 　望春花蕾化学成分的提取分离与鉴定
取干燥的望春花蕾 ,用溶剂回流提取 ,提取物用
色谱法进行分离 ,得到 5个单体化合物粗品 ,经混合
溶剂重结晶 ,得到 4个无色晶体 Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ、Ⅳ ,和 1
个黄色粉末状化合物Ⅴ。
根据各化合物的紫外光谱 、红外光谱 、1H 核磁
共振谱 、13C核磁共振谱及质谱数据 ,分别鉴定为辛
夷脂素(Ⅰ)、松脂素二甲醚(Ⅱ)、木兰脂素(Ⅲ)、里
立脂素 B 二甲醚〔1〕(Ⅳ)和望春花黄酮醇苷 Ⅰ〔2〕
·487·中药材第 27 卷第 7 期 2004 年 7 月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2004.07.010
(Ⅴ)。
3 　辛夷药材的薄层色谱鉴别
3.1 　对照品溶液的制备　取辛夷脂素 、里立脂素 B
二甲醚和望春花黄酮醇苷 Ⅰ ,分别加甲醇制成每 1
ml含 1 mg 的溶液 ,作为对照品溶液 。
3.2 　供试品溶液的制备　取望春花 、玉兰 、武当玉
兰和木兰的干燥花蕾粗粉各 1 g ,分别置圆底烧瓶
中 ,加甲醇 10 ml ,回流提取 30 min ,滤过 ,取滤液作
为供试品溶液。
3.3 　以辛夷脂素为对照品的辛夷药材的薄层色谱
　取望春花 、玉兰 、武当玉兰和木兰的供试品溶液各
10μl ,辛夷脂素对照品溶液 5 μl ,分别点于同一块硅
胶G薄层板上 ,以石油醚(60 ～ 90℃)-醋酸乙酯(3∶2)
为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 10%硫酸乙醇液 ,
于 100℃烘箱内加热至斑点显色清晰 ,结果见图 1 。
图 1　以辛夷脂素为对照品的辛夷药材的薄层色谱
1 , 6.辛夷脂素　2.望春花　3.玉兰　4.武当玉兰　5.木
兰
图 2　以里立脂素 B 二甲醚为对照
品的辛夷药材的薄层色谱
1 , 6.里立脂素 B 二甲醚　2.望春花　3.玉兰　4.武当玉
兰　5.木兰
3.4 　以里立脂素 B二甲醚为对照品的辛夷药材的
薄层色谱　取望春花 、玉兰 、武当玉兰和木兰的供试
品溶液各 10 μl ,里立脂素 B 二甲醚对照品溶液 5
μl ,分别点于同一块硅胶 G 薄层板上 ,以氯仿-醋酸
乙酯(13∶1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 10%硫
酸乙醇液 ,于 100℃烘箱内加热至斑点显色清晰 ,结
果见图 2。
3.5 　以望春花黄酮醇苷 Ⅰ为对照品的辛夷药材的
薄层色谱　取望春花 、玉兰 、武当玉兰和木兰的供试
品溶液各 10μl ,望春花黄酮醇苷 Ⅰ对照品溶液 5μl ,
分别点于同一块硅胶 G 薄层板上 ,以氯仿-甲醇-水
(4∶1∶0.1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 5%三氯
化铁乙醇溶液 ,结果见图 3。
图 3　以望春花黄酮醇苷Ⅰ 为对照
品的辛夷药材的薄层色谱
1 , 6.望春花黄酮醇苷 Ⅰ 　2.望春花　3.玉兰　4.武当玉
兰　5.木兰
4 　讨论
通过上述薄层色谱可有效地将中国药典收载过
的 4个辛夷药材的原植物品种即望春花 、玉兰 、武当
玉兰和木兰的花蕾进行鉴别:可先用望春花黄酮醇
苷 Ⅰ为对照品将望春花和武当玉兰的花蕾与玉兰和
木兰的花蕾进行区别(图 3);再以辛夷脂素为对照
品鉴别玉兰花蕾和木兰花蕾(图 1);以里立脂素 B
二甲醚为对照品鉴别望春花蕾和武当玉兰花蕾(图
2)。
致谢:山东中医药大学中药学院实习学生刘海军 、李凤华 、王新
科 ,山东大学药学院实习学生邹忠杰等参与本实验工作。
参 考 文 献
1　马玉良 , 等.辛夷中木脂素成分的研究.中国中药杂志 ,
1995 , 20(2)∶102
2 　陈雅研 ,等.辛夷水溶性成分研究.药学学报 , 1994 , 29
(7)∶506
(2003-11-18收稿)
·488· 中药材第 27 卷第 7期 2004 年 7 月