全 文 ：97.24%,其 RSD分别为 1.63%、2.16%,表明方法
回收率较好 。
2.8 　样品测定　精密吸取对照品溶液与地锦草供
试品溶液各 5 μl,按上述色谱条件测定 ,并计算槲皮
素 、山柰素的含量 。地锦草中槲皮素含量为 1.59 ～
2.08mg/g,山柰素含量为 0.48 ～ 0.74 mg/g。
3 　讨论
根据文献报道地锦草中黄酮类化合物大多以糖
苷的形式存在 , 主要为槲皮素及苷 、山柰素及苷
等 〔4〕。直接测定地锦草药材中槲皮素 、山柰素的含
量 ,发现其含量很低 ,均不到 0.01%,并且直接测定
可能难以准确反映其中黄酮的实际含量 ,因此本试
验采取酸水解后测定其槲皮素 、山柰素的含量 ,获得
满意效果。
对于水解条件的选择 ,考察了不同盐酸浓度和
酸水解时间的影响。结果显示 ,用盐酸-甲醇(1∶20)
回流 60 min,能使地锦草中以槲皮素及山柰素为苷
元的黄酮苷水解完全 ,盐酸的浓度不宜再高 ,酸性太
强对进样阀和色谱柱的腐蚀作用较大。色谱条件摸
索时 ,发现流动相的 pH值对色谱峰的峰形及分离
度影响很大 ,比较甲醇-不同浓度的磷酸溶液等多种
溶剂系统 ,确定流动相为甲醇-0.025%磷酸 (60∶
40),得到的色谱峰峰形尖锐 ,分离度高 ,且基线稳
定。
参 考 文 献
1　国家药典委员会编 .中华人民共和国药典 .一部 .北
京:化学工业出版社 , 2000∶96
2　朱英 ,等 .地锦草的研究进展 .现代中药研究与实践 ,
2003, 17(5)∶62
3　褚小兰 ,等 .地锦草类中药的药理作用研究 .时珍国医
国药 , 2001, 12(3)∶193
4　韩广轩 ,等 .中药地锦草的研究概况 .药学实践杂志 ,
2001, 19(5)∶308
(2005-03-23收稿)
华山参中总东莨菪内酯的提取及其 HPLC测定方法研究
李松武 1, 2　王　勇1　姜芳婷3　李明静 1　刘绣华 1＊
(1.河南大学化学化工学院 ,河南开封 475001;2.河南省食品药品监督管理局 ,河南郑州 450002;3.商丘
师范学院 ,河南商丘 476000)
　　摘要　建立了 HPLC法对华山参中总东莨菪内酯含量的测定方法。色谱柱为Agilent1100(21 mm×150mm, 5
μm);流动相为 0.5%醋酸水-甲醇(体积比 55∶45);流速 0.3 ml/min;检测波长 340nm;柱温 30℃;在 0.024 μg-1.8
μg范围内线性关系良好 ,加样回收率 101.4%。该方法快速简捷 , 精密度高 ,重现性好 , 可用于华山参中总东莨菪
内酯含量的测定。
关键词　HPLC;华山参;东莨菪内酯
　　华山参(PhysochlaineinfundibularisKuang)系茄
科(Solanaceae)泡囊草属植物 ,学名漏斗泡囊草 ,又
名华山人参 、华山参 、秦参 ,因主产于西岳华山而得
名 。河南 、山西也有大量分布。具有滋补强壮 、平喘
止咳 、补虚温中 、安神镇静 、除风寒 、健脾胃等作用 。
用于神经衰弱 、精神分裂 、胃腹疼痛 、失眠头痛 、咳喘
多汗和防治慢性气管炎等 〔1、2〕。七十年代末 ,中药
厂家已将其加工成华山参片 、气雾剂等。华山参药
材中含有东莨菪内酯(scopoletin)及其樱草糖甙 〔3〕。
而评价华山参药材或其制剂质量时 ,目前大多以其
生物碱含量为标准。笔者认为东莨菪内酯亦应是华
山参的主要药理活性成分之一 。关于东莨菪内酯的
测定方法 ,文献报道的大多是丁公藤中东莨菪内酯
的测定 ,有 HPLC〔4 ～ 7〕 、薄层光密度法〔8〕等。关于华
山参中总东莨菪内酯的提取和含量测定 ,文献〔9〕报
道了采用紫外分光光度法测定东莨菪内酯的总含
量 ,但紫外测定方法选择性不好 ,干扰严重。本文首
次利用 HPLC方法 ,对华山参药材中总东莨菪内酯
含量进行了测定。
1　仪器与试剂
Agilent1100高效液相色谱仪;甲醇为色谱纯 ,
其它试剂均为分析纯;东莨菪内酯对照品(中国药
品生物制品检定所);华山参(Physochlaineinfundib-
ularisKuang)样品由河南天方药业集团提供。
2　色谱条件
色谱柱:AgilentZorbacC18(21 mm×150 mm, 5
·667·中药材第 28卷第 8期 2005年 8月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2005.08.015
μm);流动相:0.5%醋酸水 -甲醇(体积比 55∶45);
流速:0.3ml/min;检测波长:340 nm;柱温:30℃。
3 　样品溶液的制备
取干燥样品粉末约 1.0 g,精密称定 ,置 250 ml
圆底烧瓶中 ,加入含 0.1 mol/L盐酸的 80%乙醇溶
液 80ml,提取 2次 ,每次 2 h(90℃水浴)。过滤 ,滤
液减压浓缩至 20 ml,加入 40 ml氯仿提取 2次 ,每
次 1 h(90℃水浴 )。冷却 , 合并氯仿相 。然后在
80℃下将氯仿蒸干 ,残渣用甲醇溶解并定容于 10ml
容量瓶中 ,摇匀 。用 0.22 μm微孔滤膜过滤 ,滤液
作为供试品溶液 。
4 　对照品溶液的制备
精密称取东莨菪内酯对照品 3.0 mg,用甲醇定
容于 25 ml容量瓶中 ,配制成 0.12 mg/ml的对照溶
液 。
5 　方法学考察
进行了线性关系 、精密度 、稳定性及回收率试
验 ,结果均符合 HPLC定量分析要求 。
6 　样品测定
在选定的 HPLC色谱条件下 ,测定华山参中总
东莨菪内酯的含量(质量百分含量),结果见表 1。
　表 1 　华山参中总东莨菪内酯的含量(%)
编号 含量 平均含量 相对标准偏差
1 0.169
2 0.175 0.169 3.25%
3 0.164
7 　结果与讨论
7.1 　提取方法的优化　东莨菪内酯不溶或难溶于
水 ,但东莨菪内酯及东莨菪甙可溶于甲醇 、乙醇 。药
材中总东莨菪内酯常用的提取方法如下:先用乙醇
或甲醇将东莨菪内酯及东莨菪甙提出 ,然后蒸干溶
剂 ,残渣用盐酸或硫酸水溶液进行水解 ,再用氯仿萃
取 ,步骤较为繁琐 。在参考有关文献〔6 ～ 11〕的基础
上 ,我们直接用 0.1 mol/L盐酸的 80%乙醇溶液来
提取 ,可一步得到总东莨菪内酯的乙醇溶液 。根据
东莨菪内酯易溶于氯仿的特性 ,先将提取液中的醇
减压除去后 ,再用氯仿对其中的东莨菪内酯进行热
提取。本实验在酸性条件下提取 ,既有利于限制碱
性成分的提出 、减少干扰 ,又有利于保持东莨菪内酯
结构的稳定 ,使待测物提取完全。
7.2　提取液中所用酸的选择　在文献 〔5 ～ 11〕报道的
基础上 ,分别选用 0.1 mol/L硫酸的 80%乙醇溶液
和 0.1 mol/L盐酸的 80%乙醇溶液按照样品制备的
方法提取华山参中的总东莨菪内酯 ,样品溶液在上
述色谱条件下测定 ,换算成华山参药材中总东莨菪
内酯的含量。
用 0.1 mol/L硫酸的 80%乙醇溶液来提取华山
参中的东莨菪内酯 ,所得华山参药材中东莨菪内脂
的总含量明显低于用 0.1mol/L盐酸的 80%乙醇溶
液所提取的结果 ,推测其原因可能是硫酸的本身特
性造成的 。硫酸是一种难挥发 ,具有氧化性的强酸。
在样品溶液的浓缩过程中 ,酸的浓度增大 ,氧化性增
强 ,在高温下将东莨菪内酯氧化 ,甚至炭化 ,造成样
品溶液中东莨菪内酯含量降低 。为此 ,本实验选择
0.1 mol/L盐酸的 80%乙酸溶液作为提取溶剂。
　　＊通讯作者
参 考 文 献
1　涂思龙 ,等 .食品 ·医药 ·有机化工产品分析测试大
全 .北京:中国社会出版社 , 2000
2　中国医学科学院药物研究所编著 .中草药现代研究(第
二卷).北京:医科大学中国协和医科学联合出版社 ,
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3　陈泽乃 ,等 .华山参化学成分的研究 .中草药 , 1981, 12
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4　李梅 ,等 .HPLC法测定丁公藤中总东莨菪内酯含量 .
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东莨菪苷的含量 .中国中药杂志 , 2004, 29(2)∶185
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8　陆敏仪 ,等 .薄层光密度法测定丁公藤注射液东莨菪素
含量及其质量分析 .中国中药杂志 , 1993, 18(3)∶158
9　秦泽平 ,等 .华山参两种提取方法与酸度对东莨菪内酯
含量的影响 .基层中药杂志 , 1995, 9(45)∶26
(2005-03-21收稿)
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·668· 中药材第 28卷第 8期 2005年 8月