全 文 ：应用酸性染料测定华山参总生物碱的含量
河南省药检所 陈冠芬 胡光一 刘爱国
摘要 本文根据生物碱与酸性染料形成有色络合物的原理 , 选用了嗅甲酚绿为络合剂 , 川比色法测
定生物碱含量 , 并与 《 药典 》 85 版规定的测定方法相比较 , 结果此法稳定 , 重现性好 。
华山参为茄科植物漏 斗 泡囊草 P h ys oc hl -
a i n a i n f u n d i b u l a r i s K u a n g 的干燥根 。 有平喘
镇咳 、 祛痰之效。 其主要成分为食 若 类 生 物
碱〔 ` ’ “ ’ 。 根 据生物碱与酸性染料形成有色络合
物后 , 再被适当有机溶剂定量提取的原理 〔 ” ,
本试验选用嗅甲酚绿为络合剂 , 用比色法测定
其含量 , 并与药典法 ( 85 年版 )相比较 , 结果此
法稳定 , 重现性好。
裹 1 生物碱最大吸收波长洲定结果
材料与仪器
1
. 材料 华山参药材购于河南省驻马店市
药材公司 。 对照品: 硫酸阿托品 、 氢澳酸山食
若碱 、 氢澳酸东食若碱均由北京药品生物制品
检定所提供 , 分别恒重干燥 后 配 成 每 m l 含
.0 lmg 生物碱的水溶液作为标准溶液 。
2
.仪 器 紫外分光光 度 计一 U v 2 0 S , 日
本岛津 。 p H 4 . O磷 酸 氢二钠一柠檬酸缓冲澳
甲酚绿 , 氯仿均为分析纯 。
\ 令 \ 一 彗 品 趁若碱 东贯若碱 山蓖若碱
抬 琴 \ 吸 一 _笑 _ 价 \ 收 ,份、 i 月皿卫卫 I \ 、 之戈、
4 1 0 0
。
5 9 0 0
。
3 5 8 0
。
1 9 6
4 1 1 0
。
5 9 2 0
。
3 6 0 0
。
1 9 7
4 1 2 0
。
5 9 4 0
。
3 6 1 0
。
1 98
4 1 3 0
。
5 9 4 0
。
3 6 2 0
。
1 98
4 1 4 0
。
5 9 5 0
。
3 6 3 0
。
1 98
4 1 5 0
。
5 9 6 0
。
3 6 4 0
。
1 9 9
4 1 6 0
。
5 9 5 0
。
3 6 3 0
。
1 9 9
4 1 7 O
。
5 9 4 0
。
3 6 2 0
。
1 9 8
4 1 8 0
。
5 9 2 0
。
3 6 2 0
。
1 9 8
4 1 9 0
。
5 9 0 0
。
3 6 1 0
。
1 97
4 2 0 0
。
5 8 8 0
。
3 6 0 0
。
1 9 7
方法与结果
一 、 实脸条件的选择
1
. 最大吸收波长的测 定 在 60 m l 的 分 液
漏斗中 , 加入 I Om l 氯仿 , 精密 加 入 10 m l p H
4
.
0缓冲液及 2m l0 . 04 %澳甲酚 绿 p H 4 . O缓 冲
液 , 然后各精密加入乏m l 硫酸阿托品 、 氢澳酸
山蓖若碱 、 氢澳酸东蓑若碱标准溶液 , 振摇 5
分钟 , . 待溶液完全分 .层后 , 分取氯仿液 , 用氯
仿湿润的浦纸滤入 2 5ml 量瓶中 , 水层再用氯仿
萃取三次 , 每次 sml ,用同一滤纸依次滤入量瓶
中 , 并用抓仿洗涤滤纸 , 洗液滤入量瓶中 , 加
抓仿稀释至刻度 。 以不加标准品 ,加入同体积蒸
馏水 , 如法操作的溶液作空白 , 在 4 1 0一 4 2 0n m
处测定吸收度 , 其最大吸收波长为 4 15 n m 。 结
果见表 1
二种舜碑币万雨硕死而百下不闭不
2
. 最佳 p H 值的测 定 根据薄层 分 离 结
果 , 华山参所含主要的三种生物碱中以山蕊若
碱含量为最高 , 其次为蓑若碱 , 东 艾 若 碱 最
低 。 本实验用蓑若碱及山蓑若碱为代表 。 分别
在 60 m l 分液漏斗中加入 1 0m l 氯仿 , 精密 .加入
10 lm 不 同 p H 值 ( 见表 2 ) 的磷酸氢二钠一
柠檬酸缓冲液及 Zm lo . 04 %澳甲酚绿水 溶液 ,
再分别精密加入 Zm l 蓑若碱 、 山蓖若碱标准溶
液 , 用氯仿分次提取 。 操作方法同 .上。 结果以
p H 4
.
O时吸收度最高 。 在相同条件下 , 以蓑 若
碱与澳甲酚绿络合后吸收度最高 。结果见表 2 。
裹 2 . 佳 p H 侧 定 结 .
丫众一 .卜。卜卜一卜一…5一濡习. :::;:….:;:称4{:批
二 、 澳甲盼缘法的洲定
.
3 5
.
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 1988. 06. 024
1
.生物碱的标准肉线与回 归 方 程 量 `取
IO ml氯仿置 6 O ml分液漏斗中 , 精密加入 I Cm l
P H 4
.
0 缓冲液及 2m l 0 . 0 4% 澳甲酚 绿 p H 4 . 0
缓冲液 , 三种生物碱各加入 0 . 50 、 1 . 0 、 1 . 50 、
2
·
0
、 2
·
S Om l 一系列标准溶液 , 同时各用蒸馏
水补足至相同的体积 , 振摇提取 5 分钟 , 待溶
液完全分层后 , 将氯仿层移至 25 m l 量 瓶中 ,
水层再用氯仿萃取三次 ,每次s m l , 合并氯仿萃
取液 , 并加抓仿稀释至刻度 。 以不加标准溶液 ,
加入同体积蒸馏水 , 如法操作的溶液作空白 ,
衰 3 华山今中生钧玻的含皿 ( % )
样品产地 一…澳甲酚绿法驻马店
}
。一 …一一 - ~一 一 一月户 .一 一一南阳 { 。 ’ ` ,` } 。 . 1 5洛阳
{
。“ 5 !} 0
。
30
} 0
。
1 1
}
注 : 表中数据为 5 次侧定平均值
裹 4 生物旅的回收试脸
生物碱名称 回收率 . ( % ) 变异系数 ( %
阿托品 9 9一 58 1 。 8 8
山蓖若碱 9 9。 50 1。 2 8
东蓑若碱 9 9 。 40 1。 8 2
. 为 5 次侧定平均值
。 ,一二丽万沛节燕愉丫面A
日 生物玻澳甲肠级标准曲锐
1
。 山谈若碱 2 ` 东花若减 3 . 阿托品
法测定 。 结果见表 遇 。
4
. 与橙黄 W法比较 橙黄万法系 《 药典 》
测定华山参片中生物碱含量的方法 。 样品溶液
制备与上述澳 甲酚绿法相同 , 测定方 法 按 照
《 药典 》 【2 ,华山参片的含量测定法 。 测定结果
见表 3 。
.025
.比恤i0sI
在 4 1 5 n m 处测定吸收度 。 标准曲线 见 图 。 回
归方程 :
阿托品: Y = 一 0 。 0 02 4 + O. 3 O4 4 A r = D。 9 99 9
山筐碧碱 : Y = 一 0 . 0 05 + 0 . 0 7 1 6 ^ r = 0 . 99 9`
东蔑著亦: v = 0 . 0 24 4 + 0 . 1 4 3 2 ^ r = 0 . 09 00
2
. 样品的浏定 精密 称 取 药材 中粉 约
0
. 幻g’ 置具塞三角烧瓶中 , 精密加 入 P H 4 . 0
缓冲液 25 血 , 振摇 5分钟 , 放置 过 夜 , 用 滤
纸过滤 , 弃去少量初滤液 , 精密量 取 续 滤 液
Zm l
, 置已有 1 om l 氯仿 、 1 0lm p H 4 . 0缓冲 液
及 Zm lo ; 04 %澳 甲酚绿缓冲液的分液漏 斗 中 ,
按最大吸收波长的测定项下操作 , 在 4 15 nm 处
测定吸收度 。 结果见表 3 。
3
. 生物碱的回收试脸 精密称取华山参中
粉 0 . 2名、 加入 pH 4 . o缓冲 液 2 5m l , 振 摇 5 分
钟 , 加入 l m l 生物碱溶液 ( 1 . Om哪m l) , 摇 匀 ,
放置过夜 。 过滤 , 弃去少量初滤液 , 续滤液按
样品测定项下 自 “ 精密量取 滤 掖 Zm l, 起 , 依
·
36
。
小 结
1
. 用酸性染料澳甲酚绿在 p H 4 . 。条 件下
与食若类生物碱络合稳定 , 用氯仿提取完全 。
提取液在 41 5n m 波长处测定 , 有最大吸收度 。
2
. 澳甲酚绿法在 p H 4 . 0条件下 , 不 经 乙
酞化处理对华山参中食若碱 、 山蓖若碱 、 东花
若碱等三种生物碱均能 获 得 良好 的线 性 关
系 , 测得回收 率 分 别 为 9 9 . 5 8% 、 9 9 . 5 0% 、
9 9
。
4 0%
。
3
. 澳甲酚绿法与橙黄万法相比较 , .前者结
果稳定` 重现性好 , 变异系数不超过 3 % 。
. 考 文 献
〔 1〕 匡可任等 : 植 物 分 类 学 报 , 1 2 ( 4 ) : 4 07 ,
1 974
[ 2〕 中国药典 , 1 9 8 5年版 , 一部 , 1 1 1页
〔3〕 南京药学院等 : 药物分析 , 126 页 , 人民卫生
出版社 , 1 9 8 2
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