全 文 ：续表 1
序号 时间
t /m in
化合物 分子式
分子
量
相对含
量(%)
相似
度(%)
19 17. 583 Guaiol(愈创木醇) C15H 26O 222 0. 95 87
20 17. 683 Bulneso l(异愈创木醇) C15H 26O 222 1. 03 85
21 19. 492 α-eude smo l(α-桉醇) C15H 26O 222 1. 51 81
22 20. 983
L ong ifolen - 5-one(长叶烯-5-酮) C15H 22O 218 5. 78 87
23 29. 208 n-Hexadecano ic acid (正十六酸) C16H 32O2 256 30. 63 95
24 32. 883 Phy to l(植醇) C20H 40O 296 2. 41 95
25 33. 142
9, 12-Oc tadecadieno ic
acid(9, 12-十八碳二烯酸) C18H 32O2 280 1. 35 83
26 33. 292 7, 10, 13-Hexadeca triena l(7, 10, 13-十六三烯醛) C16H 26O 234 8. 45 91
从波罗蜜叶挥发油中鉴定了 26个化合物 , 占挥发油总量的
71. 94%, 其中含 8类化合物。主要是萜类化合物 ,其中单萜氧化
物类 3个 , 占 2. 48%;倍半萜类 10个 , 占 10. 88%;倍半萜氧化物
7个 ,占 13. 21%;四萜类 1个 ,占 2. 41%;酸类 2个 , 占 31. 98%;
醛类 1个 , 占 8. 45%;酯类 1个 ,占 1. 91%, 醚类 1个 , 占 0. 62%。
含量最高的是正十六酸 , 占 30. 63%;其次是 7, 10, 13-十六三烯
醛 , 占 8. 45%;居第 3位的是长叶烯-5-酮 ,占 5. 78%。
参考文献:
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收稿日期:2007-01-04;　修订日期:2007-03-08
基金项目:仲恺农业技术学院科研基金资助项目(No. G3052727)
作者简介:凌育赵(1967-),男(汉族),广东平远人 ,现任仲恺农业技术学
院高级实验师 ,学士学位 ,主要从事教学及应用化学研究工作.
酸性染料比色法测定虎舌红
中总生物碱的含量
凌育赵 , 杨妙贤
(仲恺农业技术学院 ,广东 广州　510225)
摘要:目的 建立测定虎舌红总生物碱的含量测定方法。方法 采用溶剂萃取酸性染料比色法测定 , 以去氢飞廉碱(C16
H
22
N
4
O
2
)为对照品 ,溴甲酚绿为酸性染料 , 用氯仿萃取 ,检测波长 418 nm。结果 去氢飞廉碱在 0. 72 ～ 14. 02 mg /L范围
内与吸光度呈良好线性关系 , 回归方程为:Y =19. 254X - 1. 6247, r=0. 999 5(n =5), 平均回收率为 101. 65%, RSD 为
0. 75%(n =5)。结论 所建立方法简便 、准确 、选择性强。
关键词:虎舌红总生物碱;　酸性染料比色法;　去氢飞廉碱
中图分类号:R284. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)07-1597-02
Determ ination of the Tota lA lkalo ids inArdisia mam illata by Acid Dye Colormi etry
L ING Yu-zhao, YANG M iao-x ian
(Department of Chem istry and Chem icalE ngineering , Zhongkai Agritechnological College,Guangzhou 510225,
China)
Abstract:Objective To e stablish a m ethod fo r quantitative de term ination o f the to ta l alka lo ids in the roo t o fArd isia mam illata.
M ethods The conten tw as de te rm ined by solven t ex traction and acid dye co lo rim e tiy, w ith Acantho ine Ruscope - ine (C16H22
N4O2) as a con tro l c riterion and brom ocreso l green as the acid dye, and thew ave length w as at 418 nm. R esu lts Acan tho ine Rus-
cope - ine showed a good linea r re la tionsh ip w ith abso rbance when its concentra tion w as w ithin 0. 72 ～ 14. 02 m g /L. The reg res-
sion equa tion e stablished w as Y =19. 254X - 1. 624 7, r=0. 999 5(n =5). The recovery o f Acan thoine Ruscope - ine was
101. 65%, RSD was 0. 75% (n=5). Conc lu sion Th is me thod is ea sy, accura te and spec ific.
Key words:Ardisia m am illata to ta lA lka lo id;　A cid Dye Co lorim e tiy;　A cantho ine Ruscope - ine
　　虎舌红 Ard isia m am illata ,又名红毛毡 、宝鼎红 、天仙红衣 、毛
凉伞 、金丝红珠等 , 为紫金牛科紫金牛属。原产我国 , 分布于福
建 、广西 、广东 、云南 、四川 、贵州 、江西等地。虎舌红叶片紫红色 ,
果实鲜红色 , 叶果并美 , 是室内观叶植物的首选佳品 [ 1] 。 《云南
中草药选》中记载虎舌红全草可入药 , 有清热利湿 、活血止血 、去
腐生肌等功效 , 对跌打损伤 、风湿骨痛 、肺痨咳嗽 、疳积肝炎均有
疗效 [ 2] , 生物碱是其主要活性成分 [ 3] 。本文以虎舌红中的主要
成分总生物碱为指标 ,建立虎舌红总生物碱的含量测定方法 。现
报道如下。
1　器材
752C紫外 -可见分光光度计 (上海第三分析析仪器厂 );
PHS - 2型酸度计(上海雷磁仪器厂);FA - 1004电子天平 (上海
精密科学仪器有限公司)。
实验所用虎舌红全草采于封开黑石顶森林保护区 ,经本校植
物研究室鉴定为紫金牛科(M yrsinacese)、紫金牛属 (A rdisia)虎舌
红(A. m am illata)。去氢飞廉碱对照品(中国药品生物制品检定
所);溴甲酚绿(北京化工厂);其它试剂均为分析纯。
1597
LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 7 时珍国医国药 2007年第 18卷第 7期
2　方法与结果
2. 1　供试液制备
2. 1. 1　供试品溶液的配制 称取虎舌红粉末 200 g, 用 10倍量
pH =3的 75%乙醇分 3次加热回流提取 , 3 h /次 ,得醇取液 , 60℃
下减压浓缩得浸膏;用 2%盐酸溶解 , 过滤除去不溶性非碱性脂
溶性杂质 , 用乙醚 、氯仿洗涤 3次除去亲脂性非生物碱类成分 ,然
后加浓氨水调 pH值为 6 ～ 7,过滤除去鞣质类杂质沉淀 , 再用氨
水调 pH至 10 ～ 11后 ,用氯仿萃取 , 萃取液置 50 m l容量瓶中 ,用
1 m o l L - 1醋酸钠调至 pH值为 5. 5,摇匀 , 用 pH 5. 5醋酸 -醋酸
钠缓冲液稀释至刻度 ,即得供试品溶液。
2. 1. 2　对照品溶液的配制 精密称取去氢飞廉碱 20 m g,置 50 m l
容量瓶中 , 加 pH 5. 5醋酸 -醋酸钠缓冲液溶解并稀释至刻度 ,得
对照品贮备液。精密吸取 1 m l贮备液置 50 m l容量瓶中 ,加上述
缓冲液稀释至刻度 , 得对照品溶液。
2. 1. 3　酸性染料 、缓冲溶液的配制 酸性染料选择常用的溴甲
酚绿或溴麝香草酚蓝 , 其溶液均按《中国药典》方法 [ 4]配制。 pH
4. 5, pH 5. 0, pH 5. 5, pH 6. 0醋酸 -醋酸钠缓冲液均按文献方法
配制。
2. 2　实验条件的选择
2. 2. 1　测定波长的确定 取对照品溶液 、供试品溶液 20μl置 25
m l具塞试管中 ,精密加入 pH 5. 5醋酸 -醋酸钠缓冲液 3 m l, 溴
甲酚绿染料 2 m l,氯仿 10 m l, 密塞 , 剧烈振摇 2 m in, 转移至分液
漏斗中静置 2 h, 分取氯仿层 , 于 200 ～ 900 nm 之间进行波长扫
描。结果表明 , 对照品溶液 、虎舌红供试品提取液在 418 nm处吸
收最强 , 最终选定 418 nm为检测波长 , 吸收光谱见图 1。
a-虎舌红供试品溶液　　 b-对照品溶液
图 1　供试品溶液 、对照品溶液波长扫描图
2. 2. 2　酸性染料用量的选择 精密吸取对照品溶液 1 m l,分别精
密加入 0. 3, 0. 6, 0. 9, 1. 2, 1. 5 m g m l- 1的溴甲酚绿溶液 2 m l,其
余同样品测定项下操作 ,结果表明在本实验条件下 , 酸性染料达
0. 9 m g m l- 1时有最大吸收。
2. 2. 3　缓冲液 pH值的选择 取 0. 1 m o l L - 1醋酸钠溶液与 0. 1
m ol L -1醋酸溶液配制成 pH值分别为 4. 5, 5. 0, 5. 5, 6. 0, 6. 5的
缓冲液;精密吸取 2 m l对照品溶液 , 分别加入不同 pH值的缓冲
液 3 m l及其配制的溴甲酚绿溶液 2 m l, 按样品测定项下操作。
结果表明 , 当缓冲液 pH 值为 5. 5时 , 吸光度最大 , 即灵敏度
最高。
2. 3　线性范围的考察 精密吸取对照品溶液(2. 0 g /L)0. 0, 5. 0,
10. 0, 15. 0, 20. 0, 25. 0, 30. 0, 35. 0, 40. 0, 45. 0, 50. 0 μl分别置于
25 m l具塞试管中 , 分别加入 pH 5. 5醋酸 -醋酸钠缓冲液 3 m l,
酸性染料溶液 2 m l,氯仿 10 m l, 密塞 , 剧烈振摇 2 m in,转移至分
液漏斗中 , 静置 2 h,分取氯仿层于 418 nm测定吸光度。以去氢
飞廉碱对照品浓度对吸光度进行线性回归 , 得回归方程:Y =
19. 254X - 1. 6247, r=0. 999 5(n =5)。结果表明 , 去氢飞廉碱在
0. 72 ～ 14. 02 mg /L范围内呈良好的线性关系。
2. 4　精密度考察 精密吸取同一供试品溶液 5份 , 每份 25 μl,按
照 2. 3项下的方法进行操作 , 测定吸光度 ,计算样品含量 , RSD为
1. 68%(n =5)。表明该方法精密度良好。
2. 5　重现性考察 取同一批供试样品 , 按 2. 1. 1项下配制成供试
品溶液 ,按 2. 3项下方法测定 , 得以去氢飞廉碱计的总生物碱平
均含量为 16. 61%, RSD为 2. 51%。表明该方法重现性良好。
2. 6　样品稳定性考察 精密吸取供试品溶液 25 μl,分别在制备
后 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48 h时按照 2. 3项下的方法进行操作 ,
测定吸光度 ,计算含量 , 得总生物碱平均含量为 16. 46%, RSD 为
1. 70%,结果表明样品溶液在 12 h内稳定。
2. 7　样品含量测定 精密称取 3批样品(自制),按 2. 1. 1项方法
制备 , 再分别吸取 25 μl, 按照 2. 3项的方法进行操作 ,测定吸光
度 , 计算出虎舌红(以去氢飞廉碱计 )总生物碱含量为 16. 45%,
结果见表 1。
表 1　样品含量测定结果
样品号 样品浓度 C /mg L - 1 含量(%) RSD(%)
1 0. 025 16. 57 2. 26
2 0. 025 15. 95 0. 34
3 0. 025 16. 84 2. 49
　　n =3
2. 8　回收率实验 精密称定虎舌红粉末 0. 1 g(相当于虎舌红总
生物碱 1. 681 m g), 置于 10 m l容量瓶中 ,用 0. 1 m oL /L盐酸溶解
并定容制备成样品溶液 , 取样品溶液 5份 , 每份 10 μl,分别加入
浓度为 2. 032 g /L对照品溶液 30 μl, 按 2. 3项方法操作 , 测定吸
光度 , 计算平均回收率为 101. 65%, RSD为 0. 75%。结果见表 2。
3　讨论
《中国药典》1995版中生物碱的含量测定采用氨水碱化后氯仿
提取的方法,因虎舌红总生物碱有一定的水溶性,用氯仿难以提取完
全 ,使测定结果偏低。而酸性染料分光光度法使虎舌红总生物碱在
微酸性条件下 ,与溴甲酚绿络合成可被氯仿萃取的有色离子对 ,在
418 nm处有最大吸收。该方法专属性强,测定结果更准确 [ 5] 。
表 2　回收率实验结果
编
号
称样量
m /μg
样品中含
量 m /μg
加入量
m /μg
测出总量
m /μg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 101. 2 16. 81 67. 73 85. 73 102. 59
2 101. 2 16. 81 67. 73 85. 67 102. 56
3 101. 2 16. 81 67. 73 85. 33 100. 93 101. 65 0. 75
4 101. 2 16. 81 67. 73 85. 32 100. 92
5 101. 2 16. 81 67. 73 85. 58 101. 23
　　n =5
虎舌红总碱在酸性条件下游离成生物碱后 , 若用酸碱滴定
法 , 则有测定时间长 、取样量大 、操作步骤多 、氯仿用量大 、滴定终
点不易掌握等缺点;而酸性染料比色法简便 、易操作 ,准确度高。
在实验过程中 , 样品加入溴甲酚绿缓冲液及氯仿后 ,要充分振摇
2 m in,以保证生物碱与溴甲酚绿形成的离子对充分转移到氯仿
中 , 使萃取完全。在样品稳定性实验中 , 样品在被碱化 12 h内含
量基本没有改变 , 24 h时开始有下降 , 48 h时含量下降 10%, 因
此进行测定时应在样品处理 12 h内。
实验表明 ,使用酸性染料比色法测定 , 具有良好的线性关系 ,
且方法简便 、准确 、专属性强 ,可用于虎舌红总生物碱的含量测定
及质量控制。
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 7期 LISH IZHEN MED IC INE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 7