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第 1 7 卷 第 1 1 期
2015 年 11 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 17 No. 11
Nov .，2015
飞龙掌血别名见血飞，为芸香科飞龙掌血属
植物飞龙掌血（Toddalia asiatica Lam）的干燥的
根或根皮，始载于《植物名实图考》。味辛，微苦，
性温；入肝、肺经。是贵州苗族习用药材，分布于
在我国西南、华南、印度等亚洲地区及非洲、大洋
洲。功可散瘀止血、祛风除湿、消肿解毒、止痛、接
骨、解表。主治感冒、胃气痛、胸胁痛、风湿性关节
炎、跌打损伤、月经不调、腰腿痛、牙痛、痢疾、疟
疾、劳伤吐血、疮疖肿痛、毒蛇咬伤、外伤出血 [1-2]。
现代研究表明其具有抗 A 型流感病毒活性、抑制
白色念珠菌、痢疾杆菌等细菌、抗心肌缺血等作
用 [3-6]，研究前景广阔。在飞龙掌血药材分离得到
的化合物中生物碱占 54.5%[7]，总生物碱作为一个
有效部位群，有明显的抗炎、镇痛、止血活性 [8-9]。
近年来，国内外对飞龙掌血的研究主要在含量测
定及药理学作用方面，但尚无优选飞龙掌血总生
物碱提取工艺研究的报道。酸性染料比色法可对
总有效部位进行含量测定，已有用于飞龙掌血提
取物中总生物碱含量的测定 [10]。本工艺以总生
物碱含量为指标，采用单因素和正交试验法，确
定了最佳提取工艺，对飞龙掌血药材的开发利用
具有重要意义。
1 仪器与试药
紫 外 - 可 见 分 光 光 度 计（WFZ UV— 2100
型，尤尼柯仪器有限公司）；分析天平（XS225A
型，瑞 士 普 利 赛 斯 公 司）；可 控 硅 恒 温 水 浴 锅
（GKC21CR4 型，上海锦屏仪器仪表有限公司）；
氮气吹扫仪（MD200-2 型，杭州奥盛仪器有限公
司） ；超声波清洗仪（MODEL HN1006 型，中国华
南超声设备厂）。
柠檬酸固体、溴百里香草酚蓝、十二水磷酸氢
二钠（天津市大茂化学试剂厂）；乙醇、甲醇（天津
市百世化工有限公司）；三氯甲烷（衡阳市凯信化
工试剂有限公司） ；氢氧化钠（广州市海珠区化学
试剂厂）；无水硫酸钠（天津市致远化学试剂有限
公司）；盐酸小檗碱对照品（批号：0713-200208，
飞龙掌血总生物碱提取工艺研究
刘思艺，谷悦，赵俐婷，叶嘉敏，赵钟祥，张蕾，卢丽萍
（广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006）
摘 要：目的：优选飞龙掌血总生物碱的提取工艺。方法：以酸性染料比色法测定的总生物碱含量为指标，采
用单因素和正交试验法，考察液料比、乙醇体积分数、提取温度对提取工艺的影响，确定最佳提取工艺。结果：各因
素对乙醇回流提取工艺的影响顺序为提取温度、液料比、乙醇体积分数，最佳提取工艺为用25倍量75%乙醇，75 ℃
回流提取40 min。结论：优选的提取工艺稳定可行，提取率高，为飞龙掌血资源的充分利用提供实验依据。
关键词：飞龙掌血；总生物碱；正交试验；提取工艺
中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2015) 11- 0065- 03
收稿日期：2015-03-16
基金项目：广东省省级大学生创新实验项目（1057213014）
作者简介：刘思艺（1993-），女，广东广州人，本科学生，研究方向：中药质量控制。
通讯作者：卢丽萍（1974-），女，广东广州人，高级实验师，硕士，研究方向：中药质量标准研究。
Study on the Optimization of Extraction Process of Total
Alkaloids in Toddalia asiatica Lam
LIU Siyi，GU Yue，ZHAO Liting，YE Jiamin，ZHAO Zhongxiang，ZHANG Lei，LU Liping
（Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，Guangdong，China）
Abstract：Objective：To optimize the extraction process of total alkaloids in Toddalia asiatica. Methods：
With extraction amount of total alkaloids determined by acid dye colorimetry as index，effect of solid-liquid
ratio，ethanol concentration，extraction temperature，the best process was screened by single factor and
orthogonal experimental design. Results：The influencing order of each factor on ethanol reflux extraction
process was extraction temperature，solid-liquid ratio，ethanol concentration. The optimum extraction
process is as following：extracted 40 min with 25 times the amount of 75% ethanol at 75 ℃ . Conclusion：
Optimized technology is stable and feasible with high extraction rate，and it provides the experimental basis
for full use of Toddalia asiatica.
Key words：Toddalia asiatica Lam；total alkaloids；orthogonal experimental design；extraction process
DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2015.11.020
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 7 卷
中国药品生物制品鉴定所），所用试剂均为分析
纯。
飞龙掌血药材购自广州致信中药饮片有限公
司，经广州中医药大学周劲松副教授鉴定为芸香
科植物飞龙掌血（Toddalia asiatica Lam）的干燥
根。
2 方法与结果
2.1 测定方法的建立
2.1.1 溶液的配制[10]
（1）酸性染料溶液的制备：精密称取 62.5 mg
溴百里香草酚蓝于 250 mL 容量瓶中，加入 2.0 mL
0.05 mol·L-1 NaOH 溶液，用蒸馏水定容至刻度，摇
匀备用。
（2）缓冲溶液的制备：称取适量十二水磷酸氢二钠
和柠檬酸固体，用水充分溶解，配制浓度为0.2 mol·L-1
的磷酸氢二钠溶液及 0.1 mol·L-1 的柠檬酸溶液，将
磷酸氢二钠溶液作为碱溶液加入柠檬酸溶液中调配
pH 为 5.5 的缓冲液，摇匀备用。
（3）对照品溶液的制备：取小檗碱对照品适量，
精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释成每毫
升含小檗碱 50 μg 的对照品溶液。精密吸取浓度为
50 μg·mL-1 小檗碱对照品溶液 3.0 mL，空气吹干
后精密加入酸性染料溶液 4.0 mL 及缓冲液 4.0 mL，
用 10.0 mL 氯仿萃取，取氯仿层（无水硫酸钠除去水
分），用氯仿稀释并定容至 10 mL。
（4）供试品溶液的制备：取飞龙掌血药材粉末
（40 目）约 1.0 g，精密称定，按单因素实验和正交试
验中不同的提取条件进行提取，滤液置 25 mL 量瓶
中，滤渣和滤纸用 75% 乙醇洗涤，洗液并入同一量
瓶中，用 75% 乙醇定容至刻度，摇匀，即得。精密吸
取药材储备液 0.5 mL，自空气吹干后按对照品溶液
的制备方法操作，备用。
（5）阴性溶液的制备：精密吸取酸性染料溶液
4.0 mL及缓冲溶液4.0 mL，用10.0 mL氯仿萃取（无水
硫酸钠除去水分），取氯仿层，用氯仿定容至10 mL。
2.1.2 专属性和测定波长
分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性溶液
进行全扫描，记录吸收曲线，对照品和供试品的
吸收曲线形状一致，均在波长 418 nm 处有最大
吸收，阴性溶液无干扰，故选择 418 nm 为测定波
长。
2.1.3 标准曲线的绘制
精密吸取小檗碱对照品储备液（50 μg·mL-1）
0.6、1.2、1.8、2.4、3.0、3.6 mL 于锥形瓶中，空气吹干，
按“2.1.1（3）”操作，418 nm 处测定吸光度。以吸
光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回
归方程为 Y=0.044X+0.050，r =0.9991。
2.1.4 精密度试验
取同一份对照品溶液，于 418 nm 处连续测定吸
光度 6 次，计算吸光度的 RSD 为 0.8%。结果显示精
密度良好。
2.1.5 重复性试验
精密吸取药材提取液 0.5 mL，平行 6 份，空气吹
干，按“2.1.1（3）”方法操作，418 nm 处测定吸光度，
按外标一点法计算总生物碱含量的 RSD 为 3.5%。
2.1.6 稳定性试验
精密吸取对照品储备液 3.0 mL，依法显色后
放置 0、0.5、1、2、3、4 h，测定吸光度。结果表明，
溶液显色后 4 h 内基本稳定，其吸光度的 RSD 值为
2.3%。
2.2 提取工艺优化
2.2.1 提取方法选择
（1）酸水冷浸提取：取飞龙掌血药材粉末（40
目）约 1.0 g，精密称定，用 10 倍量 1.0% 硫酸浸泡
24 h，滤过，用 1.0% 硫酸定容至 25 mL，吸取 0.5 mL，
空气吹干，根据“2.1”项下方法测定总生物碱含量。
（2）酸水冷浸醇沉：取上述酸水冷浸提取液
10 mL，用NaOH溶液调pH=9，缓慢搅拌加入50 mL
95%乙醇，放置过夜，滤去沉淀，用水定容至100 mL，
吸取 0.5 mL，空气吹干，根据“2.1”项下方法测定总
生物碱含量，回收乙醇，浓缩药液，计算出膏率。
（3）超声提取：取药材粉末（40 目）约 1.0 g，精
密称定，加入 75% 乙醇 10 mL，浸泡过夜（16 h）后超
声处理 20 min，放冷，滤过，滤液置 25 mL 量瓶中，滤
渣和滤纸用 75% 乙醇洗涤，洗液并入同一量瓶中，
用 75% 甲醇定容至刻度，吸取 0.5 mL，空气吹干，根
据“2.1”项下方法测定总生物碱含量。
（4）回流提取：取药材粉末（40 目）约 1.0 g，精
密称定，加入 10 倍量 75% 乙醇于 80 ℃水浴回流提
取 1 h（×1 次），滤过，滤液置 25 mL 量瓶中，药渣与
滤纸用 75% 乙醇洗涤后并入滤液，用 75% 乙醇定容
至 25 mL。吸取 0.5 mL，空气吹干，根据“2.1”项下
方法测定总生物碱含量。
结果表明，酸水冷浸、酸水冷浸醇沉、醇超声
提取、醇回流提取的飞龙掌血生物碱含量分别是
6.0、3.2、8.2、9.2 mg·g-1。因此采用乙醇加热回流
提取进一步通过单因素循环和正交试验进行优
化。
2.2.2 单因素考察
结果见表 1。
表 1 单因素考察结果
液料比
总生物碱
（mg·g-1）
乙醇
浓度
总生物碱
（mg·g-1）
提取
温度
总生物碱
（mg·g-1）
提取时间
总生物碱
（mg·g-1）
提取
次数
总生物碱
（mg·g-1）
8∶1 6.42 10% 4.61 60 ℃ 8.93 40 min 9.60 1 次 9.60
10∶1 8.04 30% 5.71 70 ℃ 8.73 60 min 9.79 2 次 10.98
15∶1 6.88 50% 6.72 80 ℃ 9.37 90 min 8.45 3 次 10.48
20∶1 9.93 75% 9.31 90 ℃ 8.28 120 min 8.99
95% 6.35 150 min 10.23
（1）液料比的考察：取药材粉末（40 目）1.0 g，
精密称定，液料比分别为 8∶1、10∶1、15∶1、20∶1，
用 75% 乙 醇 于 80 ℃ 水 浴 回 流 提 取 1 h（×1 次），
过滤，药渣与滤纸用 75% 乙醇洗涤后并入滤液，用
75% 乙醇定容至 25 mL。结果表明，当液料比为 20∶
1 时，总生物碱的提取率最高。
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1 7 卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
（2）乙醇体积分数的考察：取药材粉末（40
目）1.0 g，精密称定，分别于 80 ℃水浴中，用 10 倍
量 10%、30%、50%、75%、95% 乙醇回流提取 1.0 h
（×1 次）。结果表明，从飞龙掌血中提取生物碱
类化合物的乙醇体积分数为 75% 明显优于其它
设定组。
（3）提取温度的考察：取药材粉末（40 目）1.0 g，
精密称定，分别于 60、70、80、90 ℃水浴中用 20 倍量
75% 乙醇回流提取 1.0 h（×1 次）。结果表明，水浴
温度升高有利于生物碱的溶出，在 80~90 ℃可获得
最佳提取效果。
（4）提取时间的考察：取药材粉末（40 目）1.0 g，
精密称定，于 80 ℃水浴中，用 20 倍量 75% 乙醇回流
提取 40、60、90、120 和 150 min（×1 次）。结果表明，
飞龙掌血生物碱类成分溶出迅速，40 min 已溶出完
全。
（5）提取次数的考察：取药材粉末（40 目）1.0 g，
精密称定，于 80 ℃水浴中，用 20 倍量 75% 乙醇分别
回流提取 1、2、3 次，每次提取 40 min。结果表明，提
取次数对总生物碱浸出率无明显差异。
2.2.3 正交试验
根据单因素试验结果，设计如表 2 所示的因素
水平进行正交试验，采用 Spss 20.0 统计软件处理，结
果见表 3 和表 4。
表 2 因素水平表
水平因素
A B C
料液比 乙醇体积分数（%） 提取温度（℃）
1 1∶15 70 75
2 1∶20 75 80
3 1∶25 80 85
表 3 正交试验数据表
试验号
因素 总生物碱含量
（mg·g-1）A B C
1 1 1 1 7.73
2 1 2 2 7.19
3 1 3 3 5.54
4 2 1 2 8.88
5 2 2 3 6.82
6 2 3 1 8.96
7 3 1 3 7.25
8 3 2 1 10.95
9 3 3 2 9.67
k1 6.82 7.96 9.21
k2 8.22 8.32 8.58
k3 9.29 8.06 6.54
R 2.47 0.36 2.67
表 4 方差分析结果
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F 值 P 值
液料比 9.206 2 4.603 14.10 0.0660
乙醇浓度 0.214 2 0.1070 0.3280 0.7530
温度 11.74 2 5.870 17.98 0.0530
误差 0.6530 2 0.3260
注：F0.05（2，2）=19.00。
由表 4 可见各因素对飞龙掌血总生物碱含量
的影响为 C>A>B，最佳水平组合为 A3B2C1。由表 5
的方差分析结果可见 A、B 和 C 因素的影响显著性
不大，由 Duncan 多重比较得出 3 个因素对总生物
碱含量影响最优组合亦为 A3B2C1。综合单因素循
环结果和正交试验结果，兼顾考虑缩短生产周期、
减少能耗等因素，确定最佳提取工艺即：用 25 倍量
75% 乙醇，75 ℃水浴中加热回流提取 1 次，提取时
间为 40 min。
2.3 工艺验证性试验
为了考察上述优选工艺的稳定性，按该工艺条
件重复提取3次，测得飞龙掌血总生物碱含量分别为
10.65、10.83、10.58 mg·g-1。平均为10.69 mg·g-1，表
明本实验优选的工艺稳定可靠。
3 讨论
通过查阅文献，选取酸水冷浸、酸水冷浸醇
沉、醇超声、醇回流四种方法提取总生物碱。结果
表明乙醇加热回流提取法最优。在单因素考察
中，提取率随液料比的增大、提取温度的上升分
别有较明显变化，随乙醇浓度的增大出现先增大
后减少，而提取时间和提取次数对提取率的影响
较小，所以选取液料比、提取温度、乙醇浓度 3 个
因素进行正交试验。从正交实验 K 值来看，乙醇
浓度并非越大越好，当浓度达到一定浓度后再增
大，飞龙掌血总生物碱提取率反而下降。这可能
是由于脂溶性物质如三萜类、色素等溶出增多，
与生物碱竞争溶剂，而使其提取量下降。飞龙掌
血的总生物碱中含有热稳定性较差的成分 [11]，所
以提取温度不能太高。综合考虑节约成本和工业
生产的可行性，确定了最佳提取工艺为：用 25 倍
量 75% 乙醇，75 ℃水浴中加热回流提取 1 次，提
取时间为 40 min。
酸性染料形成的络合物见光易分解，在操作中
应注意避光，在 2 周内使用。不同 pH 对结果影响很
大，笔者在预实验中对缓冲溶液的 pH 值进行了考
察，分别配制 pH 为 4、4.5、5、5.5 的缓冲溶液，在其他
条件相同的情况下对同一份提取液进行萃取分离，
检测吸光度，结果显示，当 pH 为 5.5 时总生物碱的含
量最高，所以严格控制水相 pH 为 5.5。◆
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