全 文 ：[论著 ]
紫花高乌头总碱对吗啡依赖大鼠 CYP2E1
代谢活力的影响
薛永志 杨玉梅 刘和莉 李月玲 武海军 李艳玲
(包头医学院药理教研室 ,包头 , 014010)
摘要　目的:观察紫花高乌头总碱对吗啡依赖大鼠 CYP2E1代谢活力的影响 。方法:采用剂量递增法建立吗啡依
赖大鼠模型 , 注射纳洛酮催促产生戒断症状 , 高效液相色谱法(HPLC)测定经 CYP2E1代谢的探针药物氯唑沙宗血
药浓度经时变化。结果:吗啡依赖可致大鼠 CYP2E1对探针药物氯唑沙宗的代谢活性增强 , 催促戒断可致体重减
轻 , CYP2E1对探针药物氯唑沙宗的代谢活性进一步增强。紫花高乌头总碱可降低大鼠的戒断反应症状分值 ,控制
大鼠的体重下降 , 下调吗啡依赖所致的 CYP2E1的代谢活性增强。结论:紫花高乌头总碱可抑制吗啡依赖大鼠的
戒断症状 , 使吗啡依赖及其催促戒断后增高的 CYP2E1代谢活力下调。
关键词　紫花高乌头总碱;吗啡依赖大鼠;戒断症状
EFFECTOFTOTALALKALOIDESOFACONITUMEXCELSUM REICHBONCYP2E1
METABOLISMACTIVITYINMORPHINEDEPENDENTRATS
XUEYongzhi, YANGYumei, LIUHeli, LIYueling, WUHaijun, LIYanling
(DepartmentofPharmacology, BaotouMedicalColege, Baotou, 014010)
ABSTRACT　Objective:Tostudytheefectoftotalalkaloidesofaconitumexcelsumreichb(AER)
onCYP2E1metabolismactivityinmorphinedependentrats.Methods:Morphinedependentratmodelwas
inducedbyadministration(im)ofmorphineatagradualincreasingdosage;withdrawalsyndromeswere
precipitatedbynaloxone(im), andCYP2E1 metabolismactivitywasdeterminedbyhighperformance
liquidchromatography(HPLC).Results:MorphinewithdrawalsyndromesofratswereinhibitedbyAER;
bodyweightlossratswereinhibitedtosomedegree, andCYP2E1 metabolismactivitythathadbeen
heightenedbymorphinewithdrawalwasdepressed.Conclusion:AERcaninhibitmorphine-withdrawal
syndromesanddownregulateCYP2E1 metabolismactivityheightenedbywithdrawal.
KEYWORDS　totalalkaloidesofaconitumexcelsumreichb;morphinedependentrat;withdrawal
syndrome
　　CYP2E1 是主要在肝脏表达的细胞色素
P450(cytochromeP450, CYP450)酶重要的亚型之
一 [ 1] 。免疫性损伤 、应激刺激 、酒精依赖等因素都
会使其蛋白表达和代谢活力发生变化[ 2-3] 。紫花高
乌头总碱是从紫花高乌头 (aconitum excelsum
reichd,蒙名:宝日呼和图古勒嘎其其格)根中提取
的有效成分 ,为习用蒙药 ,属二萜类乌头属生物碱 。
据报道 ,大部分二萜类生物碱有较强的镇痛 、抗炎和
戒毒作用[ 4] 。但其对吗啡依赖动物的 CYP2E1代谢
活力的作用尚未见报道。本文拟观察紫花高乌头总
碱对吗啡依赖大鼠催促戒断症状及其 CYP2E1代谢
活力的影响 ,为总碱的研发应用及寻找新的戒毒药
提供实验依据和理论支持。
1材料与方法
1.1药物
紫花高乌头总碱 ,内蒙古医学院药学系植化室
提供(每毫克总碱相当于生药 100 mg),用盐酸溶
解 ,调 pH7-8,加生理盐水稀释到所需浓度;生理
盐水 (NS), 包 头康力药业 有限公司 , 批 号:
0602280103;盐酸吗啡注射液 ,沈阳第一制药厂 ,批
号:030806;盐酸纳洛酮注射液 ,益侨(湖南)制药有
·262· 中国药物依赖性杂志(ChinJDrugDepend)2007, 16(4):262-265DOI :10.13936/j.cnki.cjdd1992.2007.04.001
限公司 ,批号:20031204;氯霉素对照品 ,购自中国药
品生物制品检定所;氯唑沙宗对照品 、氯唑沙宗片
剂 ,山东省医药工业研究所提供;乙腈 , CALEDON
laboratories生产 ,色谱纯;乙酸乙酯 ,北京北化精细
化学品有限公司生产 ,分析纯。
1.2动物
Wistar大鼠 (清洁级 )60只 , ♂, 体重 160 -
180(168.5±s9.8)g,购自内蒙古大学实验动物中
心 ,许可证号:SCXK(蒙)2002-0001。
1.3方法
1.3.1紫花高乌头总碱对吗啡依赖大鼠催促戒断的
影响　取♂Wistar大鼠 40只 ,随机分为 5组 ,每组 8
只 。采用剂量递增法 ,连续 14 d肌肉注射 (im)吗
啡 ,建立吗啡依赖大鼠模型 [ 5] 。实验期间每 2 d称
体重 1次。实验 d14晚 20:00始禁食 ,不禁水 。于
d15上午 8:00进行实验:(1)组为吗啡戒断组 , im
等体积的 NS;(2)组为吗啡维持组 , im吗啡 20mg·
kg-1;(3)-(5)组分别为紫花高乌头总碱低 、中 、高
剂量组 ,分别灌胃(ig)1.5、3、6 mg·kg-1紫花高乌头
总碱。各组在给药后 2 h, im纳洛酮 4 mg·kg-1 ,观
察并记录大鼠 1h内戒断反应及体重变化百分率 。
1.3.2高效液相色谱法 (highperformanceliquid
chromatography, HPLC)测定大鼠 CYP2E1代谢活性
　取♂Wistar大鼠 20只 ,随机分为 4组 ,每组 5只 ,
(1)组为 NS空白对照组 , (2)-(4)组按照上述方
法复制吗啡依赖模型 。实验 d14晚 20:00始禁食 ,
不禁水 。于 d15上午 8:00进行实验:(1)组为 NS
空白对照组 , im等体积的生理盐水;(2)组为吗啡维
持组 , im吗啡 20 mg·kg-1;(3)组为吗啡戒断组 , im
纳洛酮 4 mg·kg-1;(4)组为紫花高乌头总碱组 , ig
3 mg·kg-1紫花高乌头总碱。取(1)-(4)组大鼠单
次 ig氯唑沙宗 50 mg·kg-1 ,分别于给药后 0.5、1、
1.5、2、3、4、6 h从眼内眦静脉丛采血 ,每次采血 0.5
ml于肝素化试管中 ,以 3000r·min-1离心 5min,取
血浆 ,保存在 -20℃冰箱后待测。根据文献[ 6]的方
法 ,测定血浆中 CYP2E1探针药物氯唑沙宗浓度的经
时变化。用药物代谢动力学软件 3P87对血药浓度数
据进行拟合 ,得出曲线下面积(AUC)、血浆消除半衰
期(T1 /2)、峰浓度(Cmax)、达峰时(Tmax)、消除速率常
数(Ke)等各项药代参数。
1.3.3统计分析　采用 SPSS11.0软件包进行数据
处理 ,结果以 x±s表示 ,组间比较采用单因素方差分
析 ,两组间比较采用 t检验:方差齐采用 Dunnet st
检验 ,方差不齐采用 Dunnet sT3检验;统计结果以
P<0.05为差异有显著性。
2结果
2.1紫花高乌头总碱对吗啡依赖大鼠催促戒断的影
响
给大鼠注射吗啡 14 d后 ,大鼠出现了明显的吗
啡依赖;注射纳洛酮进行催促 ,吗啡维持组没有显示
戒断症状和体重下降 ,吗啡戒断组大鼠出现戒断症
状和明显的体重下降 ,体重下降与吗啡维持组比较
差异有显著性(P<0.05)。紫花高乌头总碱各剂量
组与吗啡戒断组比较 ,均可使大鼠的戒断症状分值
明显降低(P<0.01),且呈明显的剂量依赖性;紫花
高乌头总碱高剂量组还可明显降低体重下降百分率
(P<0.05),且与 20mg·kg-1的吗啡维持组作用强
度相当 ,详见表 1。
表 1 紫花高乌头总碱对吗啡依赖大鼠催促戒断的
影响(n=8 , x±s)
组别 剂量(mg·kg-1)
大鼠戒断　　
症状分值　　
体重下降
百分率(%)
吗啡戒断组 - 26.5±s1.8 6.64±s0.75
吗啡维持组 20 27.4±s3.1 4.70±s1.67＊
紫花高乌头总碱
　低剂量组 1.5 22.6±s1.2
＊＊# 6.01±s1.42#
　中剂量组 3 19.3±s2.0＊＊# 6.73±s3.19#
　高剂量组 6 17.2±s1.5＊＊# 4.97±s1.41＊
＊P<0.05, ＊＊P<0.01,与吗啡戒断组比较;#P<0.05, 与吗啡维持
组比较
2.2紫花高乌头总碱对吗啡依赖大鼠单次口服氯唑
沙宗后代谢能力的影响
分别给予 NS空白大鼠和吗啡依赖模型大鼠单次
口服 CYP2E1特异性探针药物氯唑沙宗 50 mg·kg-1 ,
在给药后不同时间点观察氯唑沙宗血浆药物浓度 -
时间经过的变化 。结果显示 ,与 NS空白对照组大
鼠相比 ,吗啡维持组大鼠口服氯唑沙宗后在 6 h内 ,
各时间点血药浓度均显著降低 ,吗啡戒断组进一步
降低 ,紫花高乌头总碱组与 NS空白对照组相比差
异无显著性 , 详见表 2、3。其中吗啡维持组大鼠
Cmax较 NS空白对照组减少了 35%(P<0.05), AUC
减少了 38%(P<0.05), T1/2减少(P<0.05),而
两组的 Ke没有显著性差异(P>0.05);吗啡戒断组
Cmax较 NS空白对照组减少了 65%(P<0.05), AUC
减少了 72%(P<0.05), T1/2减少(P<0.05),而两组
·263·中国药物依赖性杂志(ChinJDrugDepend)2007, 16(4):262-265
的 Ke没有显著性差异(P>0.1)。紫花高乌头总碱组
较吗啡维持组 Cmax增加了 54%(P<0.05), AUC增加了
23%(P<0.05)。
表 2 紫花高乌头总碱对吗啡依赖大鼠单次口服氯唑沙宗后血药浓度经时变化的影响(n=5, μg·ml-1)
时间(h) NS空白对照组　　 吗啡维持组　　 吗啡戒断组　　 紫花高乌头总碱组
0 0.00±s0.00 0.00±s0.00 0.00±s0.00 0.00±s0.00
0.5 11.39±s1.05 8.07±s1.08＊ 4.89±s0.32＊# 12.11±s4.36#
1 13.03±s3.04 8.16±s0.92＊ 3.34±s0.52 10.58±s5.56
2 6.26±s1.26 3.78±s0.81 1.74±s0.94＊ 4.61±s3.97
3 3.38±s0.99 1.54±s0.38＊# 0.30±s0.16＊# 1.19±s1.01＊
4 0.71±s0.46 0.23±s0.03＊ 0.14±s0.09＊ 0.37±s0.11
6 0.31±s0.18 0.20±s0.02 0.12±s0.04＊ 0.16±s0.04
＊P<0.05,与同一时间点 NS空白对照组相比;#P<0.05,与同一时间点吗啡维持组相比
表 3　紫花高乌头总碱对吗啡依赖大鼠单次口服氯唑沙宗(50 mg·kg-1)后血浆中氯唑沙宗药代动力学参
数的影响(n=5)
组别 n 　NS空白对照组 吗啡维持组　　 吗啡戒断组　　 紫花高乌头总碱组　
AUC(h·μg·ml-1) 5 26.64±s4.44 16.53±s0.82＊ 7.39±s0.63＊# 20.40±s5.70 #
T(h) 5 0.82±s0.16 0.57±s0.07＊ 0.60±s0.11＊ 0.54±s0.11＊
Cmax(μg·ml-1) 5 13.35±s1.52 8.69±s0.93＊ 4.73±s0.31＊# 13.40±s4.31#
Tmax(h) 5 0.68±s0.18 0.69±s0.10 0.51±s0.08# 0.61±s0.14
Ke(h-1) 5 0.87±s0.16 0.22±s0.14 1.18±s0.23 1.43±s0.60＊
＊P<0.05,与 NS空白对照组相比;#P<0.05,与吗啡维持组相比
3讨论
滥用海洛因等毒品所造成的药物依赖已经成为
世界性难题 [ 7] 。把蒙药用于阿断类脱毒治疗是国
内较具特色的一种戒毒方法。本研究采用剂量递增
法建立大鼠吗啡依赖模型 ,再用吗啡拮抗剂纳洛酮
进行催促而出现戒断症状 ,大鼠表现为摇体 、攻击 、
跳跃 、体重减轻等 。本实验结果表明 ,紫花高乌头总
碱用于吗啡依赖大鼠催促戒断脱毒治疗 ,可降低大
鼠的戒断反应症状分值 ,不同程度地控制大鼠的体
重下降 。提示 ,紫花高乌头总碱可抑制吗啡依赖大
鼠的戒断症状 ,有望成为吗啡类成瘾后的脱毒治疗
药物。
CYP2E1酶亚型主要在成人肝脏表达 [ 3] ,且富
集于肝小叶中心区域。 CYP2E1在不同动物种属间
较为保守 , 人与啮齿类动物如大鼠或小鼠的
CYP2E1氨基酸序列可具有 78%的同源性 ,其代谢
底物和代谢活性亦极为相似 ,因此有关 CYP2E1的
药理学动物实验对人之临床具有重要的参考价值 。
目前已知经 CYP2E1代谢的底物达 70多种 ,主要参
与前致癌物和前毒物的代谢 [ 1] 。本研究采用高效
液相色谱法检测 CYP2E1对血浆中底物氯唑沙宗的
代谢活性 ,观察吗啡依赖对 CYP2E1的影响。结果
显示 ,吗啡依赖模型组在给予氯唑沙宗后各时间点
血药浓度均较对照组显著降低 , Cmax和 AUC减少 ,
纳洛酮催促戒断可使上述指标进一步减少 ,提示吗
啡依赖可使 CYP2E1酶蛋白在代谢活性水平明显增
强 ,而催促戒断可使 CYP2E1代谢活性进一步增强 ,
此结果与国外报道[ 8]一致 。紫花高乌头总碱除了
能抑制吗啡的戒断症状 ,还下调纳洛酮催促戒断所
致的 CYP2E1代谢活力增强 ,使其接近吗啡依赖组
水平 。吗啡依赖以及催促戒断后 CYP2E1代谢能力
的增强可致各种致癌物 、外源性化合物 、甾体类激素
的激活 ,导致 CYP2E1代谢的致癌化合物易感性增
强 ,内分泌紊乱。 CYP2E1代谢能力的增强还可改
变共用的其他药物生物利用度或效能 , 增加由
CYP2E1代谢的药物或外源性化合物的毒性 ,引发
·264· 中国药物依赖性杂志(ChinJDrugDepend)2007, 16(4):262-265
药物相互作用的改变 。上述结果提示 ,紫花高乌头
总碱对 CYP2E1代谢酶活力的调控 ,可能是其作为
吗啡依赖戒断脱毒治疗的有利因素 ,同时 ,我们在戒
断症状的脱毒治疗时 ,对 CYP450氧化酶系统的影
响不容忽视。
4参考文献
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收稿日期:2006-12-26
修回日期:2007-01-26
[资料 ]
药物依赖易感性的性别差异
张开镐
(北京大学中国药物依赖性研究所 ,北京 , 100083)
　　药物成瘾的神经生物学的研究已在实验动物观察到药物依赖性的某些特征存在性别差异 , 如单次给予吗啡的大鼠和小
鼠 , 给纳洛酮后出现的躯体反应 ,雌性比雄性弱。重复给予吗啡的大鼠 , 用纳洛酮催促后的戒断症状分值 , 雌性比雄性低 , 说
明雄性大 、小鼠给吗啡后发生的适应性变化比雌性大 , 雌性动物对吗啡的耐受能力高于雄性。药物滥用的生理学和流行病学
资料显示 , 女性对中枢兴奋剂 、阿片和尼古丁的强化效应的易感性高于男性 , 女性感受吗啡奖赏效应的程度比男性强 , 但其从
偶而使用转入强迫性使用或无法控制的使用 ,即成瘾的比率比男性低 , 也反映了长期使用吗啡引起的可塑性变化男性高于女
性。高复吸率是药物成瘾的重要特征。与药物相关的环境暗示(drug-associatedenvironmentalcues, Cue)是诱发复吸的主要
因素之一。在药物戒断的依赖性动物 , 各种类型的 Cue可诱使重建觅药和摄取药物的行为 , 在人 Cue亦可引起药物戒断的依
赖者对药物的渴求及其他情感反应和生理反应。药物戒断的依赖者对 Cue诱发的主观效应及情感反应 、生理反应的强弱既
受 Cue类型的影响 ,也与性别有关。女性可卡因依赖者在戒断后由 Cue诱发的渴求可卡因的欲望强于男性 , 海洛因戒断者对
Cue诱发的多种反应也显示女性高于男性。这暗示 ,尽管女性药物滥用发展到成瘾的比率略比男性低 , 但其由 Cue诱发的复
吸的可能性比男性大 。所以 , 在制定对药物依赖者进行治疗和防复吸的方法或策略时应考虑性别差异因素。
·265·中国药物依赖性杂志(ChinJDrugDepend)2007, 16(4):262-265