全 文 ：[成分分析 ]
贯叶连翘超临界提取物的高效液相色谱分析
罗艳萍 1, 2 , 　郭立玮 1 , 　朱方剑 2
(1.南京中医药大学 ,江苏 南京 210015;2.浙江佐力药业股份有限公司 ,浙江 湖州 313200)
收稿日期:2008-06-10
作者简介:罗艳萍(1971-),女 ,副研究员 ,研究方向:中药现代化与中药新药的开发。 E-mail:yanpinglq@163.com
关键词:HPLC;贯叶连翘;CO2超临界流体提取
摘要:目的:对贯叶连翘 CO2超临界提取物的成分进行分析 , 并测定其中主要化学成分的含量。方法:以高效液相色谱法
分别测定超临界提取物中主要黄酮类成分和贯叶金丝桃素含量。 CO2超临界提取条件:萃取温度 40 ℃, 萃取压力 20
MPa, 分离温度为 45℃, 压力为 8 MPa,提取 1h。结果:纯 CO
2
超临界提取的提取物不含黄酮成分 ,贯叶金桃丝素含量达
180.6mg/g;以乙醇为夹带剂的超临界提取物含有黄酮类成分和贯叶金丝桃素 , 芦丁 、金丝桃苷 、槲皮素含量分别为 1.10
mg/g、1.84mg/g、1.33 mg/g, 贯叶金丝桃素含量为 26.19 mg/g。结论:用纯 CO2超临界提取 ,提取物中贯叶金丝桃素含
量远高于加夹带剂超临界提取 ,可用本法制备贯叶金丝桃素含量高的提取物。
中图分类号:R284.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2009)04-0582-03
IdentificationofcompoundsinsupercriticalCO2 extractionfromHypericumPer-
foratumL.byHPLC
LUOYan-ping1, 2 , 　GUOLi-wei1 , 　ZHUFang-jian1
(1.NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine, Nanjing210015 , China;2.ZhejiangJolyPharmaceuticalCo., Ltd., Huzhou313200, China)
KEYWORDS:HPLC;HypericumperforatumL.;CO2 supercriticalfluidextraction/SFE-CO2
ABSTRACT:AIM:ToidentifyanddeterminecompoundsinsupercriticalCO2 extractionfromHypericumperfora-
tumL.METHODS:ThecontentsofflavonesandhyperforinweredeterminedbyreversephaseHPLC.Thecondi-
tioninsupercriticalfluidextraction(SFE)was:extractiontemperatureat40 °C, extractionpressureat20 MPa,
separationtemperatureat45 °C, separationpresureat8 MPa, extractiontime1 h.RESULTS:Therewasnofla-
vonesandthecontentofhyperforinwas180.6mg/ginthesampleofSFEusingneatCO2.Theflavonesandhyper-
forinwerefoundinSFEextractusingethanolasmodifierandthecontentsofrutin, quercetin, hyperoside, hyper-
forinwere1.10mg/g、1.84mg/g、1.33 mg/g、26.19 mg/g, respectively.CONCLUSION:Theconcentrationof
hyperforinbySFEwithneatCO2 issignificantlyhigherthanthatwithmodifiedsupercriticalCO2 extraction.The
methodofSFEwithneatCO2 canbeusedtoprepareextractswithhighconcentrationhyperforin.
　　贯叶连翘 HypericumperforatumL.为藤黄科金
丝桃属植物 ,多年生草本 ,全草入药。贯叶连翘近年
来由于发现其有抗抑郁作用而广泛流行于欧洲及美
国 [ 1] 。其主要化学成分主要有黄酮类 、苯骈二蒽酮
类及间苯三酚类化合物 [ 2] 。贯叶金丝桃素(Hyper-
forin)仅发现存在于贯叶连翘的花和果实中 ,为该植
物的特征性成分 。贯叶金丝桃素也是贯叶连翘抗抑
郁的主要有效成分之一[ 3] 。由于其对热和光的不
稳定性 ,其提取条件要求避光和低温操作 。二氧化
碳超临界技术由于温度低 ,且系统密闭 ,可大量保存
对热不稳定及易氧化的成分 。我们用该技术对贯叶
连翘药材进行了提取 ,用高效液相色谱法对其主要
成分进行了分析 ,并测定了主要黄酮类成分和贯叶
金丝桃素的含量。
1　仪器与试药
DOINEX高效液相色谱仪(配有 UVD-340U检
测器 , P680HPLC泵 、STH585柱温箱 、ASI-100自动
进样器), Chromeleon色谱工作站。贯叶金丝桃素购
于西格码公司;芦丁 、槲皮素 、槲皮苷 、金丝桃苷中国
药品生物制品检定所提供;乙腈(Merck公司)色谱
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纯;贯叶连翘药材(购于安徽亳州药材市场),经广
西中医药研究所中药室赖茂祥研究员鉴定为为藤黄
科金丝桃 HypericumperforatumL.的干燥地上部分;
以 CO2超临界提取得的贯叶连翘提取物。
2　方法和结果
2.1　超临界提取物的制备　取贯叶连翘药材 2.5
kg,粉碎成粗粉 ,进行 CO2超临界提取 ,提取条件:
萃取温度 40 ℃,萃取压力 20 mPa,分离温度 45 ℃,
分离压力 8mPa,提取 1 h,收集提取物(样品 1),以
乙醇作为夹带剂 ,按上述条件提取 ,另器收集提取物
(样品 2)。
2.2　黄酮类物质的检测
2.2.1　对照品溶液的制备 　分别称取芦丁 、槲皮
素 、槲皮苷 、金丝桃苷对照品适量 ,加甲醇制成含各
对照品约 0.05 mg/mL的对照品混合液 。
2.2.2　供试品溶液的制备　称取提取物适量 ,精密
称定 ,置 25mL量瓶中 ,加甲醇超声溶解 ,加甲醇到
刻度 ,摇匀 ,过 0.45 μm膜过滤 ,取续滤液作为供试
品溶液 。
2.2.3　色谱条件 　VenusilC18色谱柱(250 mm×
4.6mm, 5 μm);流动相:乙腈 -0.1%磷酸水溶液梯
度洗脱:0 ～ 5 min乙腈由 0 ～ 15%;5 ～ 25 min乙腈
由 15-30%;25 ～ 50 min,乙腈由 30% ～ 70%,维持 5
min。流速:0.8 mL/min;柱温为室温;检测波长为
360nm;进样量 20μL。
2.2.4　线性关系考察　准确称量芦丁 、槲皮素 、金
丝桃苷标准品各 5.0mg,用甲醇定容成 10mL,分别
吸取上述溶液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL定容成 25
mL,系列标准品溶液的质量浓度分别为 0.01、0.02、
0.03、0.04和 0.05 mg/mL。分别进样 20 μL,以质
量浓度对峰面积进行回归 ,结果表明 ,在 0.2 ～ 1.0
μg进样范围内 ,芦丁 、槲皮素和金丝桃苷线性关系
良好。
2.2.5　样品测定　按上述检测条件分别检测提取
物中黄酮类物质 ,样品 1未检测到黄酮类成分 ,样品
2能检测到芦丁 、金丝桃苷 、槲皮苷 、槲皮素 4种黄
酮类成分 ,其中芦丁含量为 1.1 mg/g;金丝桃苷含
量 1.84 mg/g;槲皮素含量 1.33 mg/g。槲皮苷由于
与其它杂峰未能基线分离 ,所以未能准确测定其含
量 。各样品色谱图见图 1。
2.3　贯叶金丝桃素的含量测定
2.3.1　对照品溶液的制备　量取贯叶金丝素对照
品贮备溶液适量 ,加甲醇制成每 1 mL含 10 μg的溶
液 ,作为对照品溶液。
A
B
C
图 1　对照品(A)及样品 1(B)、样品 2(C)HPLC色谱图
Fig.1　HPLCchromatogramsofreferencesubstance(A)、
sample(B)andsample2(C)
1.芦丁(rutin)　2.金丝桃苷(hyperoside)　 3.槲皮苷(quercetrin)　
4.槲皮素(quercetin)
2.3.2　供试品溶液的制备　称取提取物适量 ,精密
称定 ,置 25 mL量瓶中 ,加甲醇超声溶解 ,加甲醇到
刻度 ,摇匀 ,过 0.45μm膜过滤 ,取续滤液作为供试
品溶液。
2.3.3　色谱条件色谱柱　VenusilC18色谱柱(250
mm×4.6 mm, 5 μm);检测波长:276 nm;柱温:25
℃;流速:1 mL/min;流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液
(95∶5)。
2.3.4　线性关系考察　移取贯叶金丝桃素标准溶
液 ,用甲醇分别稀释到所需浓度 。在选定的实验条
件下 ,每个浓度溶液进样 3次 ,计算其峰面积的平均
值。以质量浓度对峰面积回归 ,贯叶金丝桃素的线
性回归方程为 Y=15.211X-0.068 1, r=0.999 9,
线性范围 0.102 ～ 0.510μg。
2.3.5　样品测定　按上述检测条件测定 ,样品 1、
样品 2中贯叶金丝桃素含量分别为 180.6 mg/g、
26.19mg/g。各样品色谱图见图 2。
2.4　讨论
　　实验结果表明 ,贯叶连翘用纯CO2超临界提取
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AB
C
图 2　对照品(A)及样品 1(B)、样品 2(C)HPLC色谱图
Fig.2　HPLCchromatogramsofreferencesubstance(A)
andsample1(B)、sample2(C)
1.贯叶金丝桃素(hyperforin)
所得的提取物含贯叶金丝桃素量较高 ,不含黄酮类
成分 ,可用于制备高贯叶金丝桃素含量的样品 ,用于
标准品的分离和纯化 。以乙醇为夹带剂的 CO2超
临界提取物所含化学成分较多 ,含有芦丁 、槲皮素 、
槲皮苷 、金丝桃苷等黄酮类成分 ,同时也含有贯叶金
丝桃素 ,但贯叶金丝桃素含量相对较低 。
　　曾参考文献 [ 4] 在同一条件下采用梯度洗脱同
时测定黄酮类成分和贯叶金丝桃素 ,但一直未检测
到贯叶金丝桃素色谱峰 。原因之一可能是贯叶金丝
桃素不稳定 ,经过长时间流动相洗脱后 ,贯叶金丝桃
素被分解 ,这有待于进一步研究 。另一种原因是贯
叶金丝桃素水溶性极差 ,而本实验所用流动相起步
是高水相 ,导致样品中的贯叶金丝桃素被析出 ,且被
色谱柱吸附而无法洗脱 ,因此检测不到色谱峰。
参考文献:
[ 1] 　AmericanHerbalPharmacopoeiaandTherapeuticCompendiml.St
John swort(HypericumperoraturnL.)Monograph.HerbalGram
[ J] .JAmBotCouncilHerbResFound, 1997, 40:1-16.
[ 2] 　郁　青 , 沈成章 , 谭卫红.贯叶金丝桃(贯叶连翘)研究进展
[ J] .林产化工通讯, 2000, 34(1):22-24.
[ 3] 　SchemppCM.AntibacterialactivityofHyperforinfromStJohn s
wortagainstmultiresistantstaphylococcusaureusandgrampositive
bacteria[J] .Lancet, 1999, 353:2129.
[ 4] 　MariMannila, HakwonKim, CarlIsaacsonandChienM.Wai.
Optimizationofsupercriticalfluidextractionfortheseparationof
hyperforinandadhyperforininStJohn swort(Hypericumper-
oraturnL.)[ J] .GreenChem, 2002, 4:335.
UPLC/ESI-TOF-MS/MS分析蛇床子提取物中香豆素类化合物
李坤平 1, 2 , 　高崇凯 1 , 　李卫民 2
(1.广东药学院 ,广东 广州 510006;2.广州中医药大学 ,广东 广州 510006)
收稿日期:2008-07-12
作者简介:李坤平(1978-),男 ,讲师 ,博士生 ,从事中药制药工程的教学与研究。 Tel:(020)39352118
＊通讯作者:李卫民(1954-),男 ,教授 ,博士生导师 ,从事中药缓控释制剂的研究与开发。 Tel:(020)39358044
关键词:超高效液相色谱 /电喷雾飞行时间质谱;蛇床子;香豆素
摘要:目的:对蛇床子提取物中的香豆素类化合物进行快速分析与鉴定。方法:采用超高效液相色谱法(UPLC), 选择 C18
反相色谱柱 , 以乙腈-水(含 0.1%甲酸)为流动相 , 二元线性梯度洗脱进行分离;联用电喷雾飞行时间质谱(ESI-TOF-MS/
MS)获得蛇床子提取物中各香豆素成分的精确分子量和分子式;采用碰撞诱导解离技术获得各化合物裂解碎片信息 ,结
合文献对蛇床子提取物中的各化合物进行鉴定。结果:蛇床子提取物中各化合物在 10min内达到了基线分离 , 由 MS和
MS/MS结果推断其中的 5种香豆素类成分分别是花椒毒酚 、花椒毒素 、佛手苷内酯 、欧前胡素和蛇床子素。结论:UPLC/
ESI-TOF-MS/MS技术能对蛇床子提取物中香豆素类化合物进行有效鉴别。
中图分类号:R284.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2009)04-0584-04
AnalysisofcoumarinsinextractofCnidiummonnieribyultra-performanceliq-
uidchromatographiccoupledtoelectrosprayionizationtimeofflightmass/mass
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