全 文 ：— 66 — 现代中药研究与实践2012年第26卷第5期Chin Med J Res Prac,2012 July.,Vol.26 No.5
4　讨论
4.1　黄芩苷紫外检测波长的选择
用流动相配制黄芩苷的标准溶液 0.02 mg·mL-1 ，
在 260~360nm 的波长范围内测定，结果在 280nm 处有
最大吸收，所以选择 280nm 为黄芩苷检测波长。
4.2　流动相的选择
根据黄芩苷的化学性质，参考有关文献，起初采
用乙腈 -0.5% 磷酸溶液作为流动相，黄芩苷峰处有
杂质干扰。后来按甲醇（A 48%）-0.3% 磷酸溶液（B
52%）[2] , 黄芩苷峰的分离度与不对称度符合要求。
本论文采用高效液相色谱法测定清热凉血膏中
黄芩苷含量，此法专属性强，重现性高，可作为清热
凉血膏医院制剂含量控制标准。
参考文献 ：
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华 山 参 中 东 莨 菪 苷 的 含 量 测 定 研 究
代雪平，宋汉敏
（河南省食品药品检验所，河南 郑州 450003）
摘　要 ：目的　建立华山参中东莨菪苷的含量测定方法。方法　采用高效液相色谱法对华山参中东莨
菪苷进行含量测定。结果　东莨菪苷在 0.0264 ～ 0.792μg 范围内线性关系良好，检测限为 1.432×10-3μg，
平均回收率为 100.5%， RSD 为 1.9%。结　论　该方法简便、准确、重现性好，可做为华山参的质量控制方法。
关键词 ：东莨菪苷 ；HPLC ；含量测定 ；华山参
中图分类号 ：R284.1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673-6427(2012)05-0066-03
Study on the Content Determination of Scopolin in Huashanshen
DAI Xue-ping, SONG Han-min
(Henan Province Institute for Drug Control, Zhenzhou 450003, China)
Abstract: Objective To establish the method of determining the content of scopolin in Huashanshen.
Methods Using the means of HPLC to determine the content of scopolin contained in Huashanshen. Results
scopolin was linear in the range of 0.026 4～0.792 μg ,and the average recovery was 100.5% with RSD 1.9%.
Conclusion The method was simple and reproducible which could apply to the quality control of Huashanshen.
Key words: scopolin; HPLC; content determination; Huashanshen
收稿日期：2012-05-13
DOI:10.13728/j.1673-6427.2012.05.024
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华 山 参 为 茄 科 植 物 漏 斗 泡 囊 草 Physochlaina
infundibularis Kuang 的干燥根，具有温肺祛痰，平喘
止咳，安神镇惊的功效，用于寒痰喘咳，惊悸失眠 [1]。
生于山坡、沟谷或草地，在陕西、山西、河南等地均
有分布 [2]。其主要化学成分有阿托品、东莨菪碱、山
莨菪碱等生物碱，东莨菪内酯、华山参苷、东莨菪苷
等香豆素，以及氨基酸、多糖、还原糖、淀粉和甾醇
类 [3~4]。《中国药典》规定华山参药材中含总生物碱
以莨菪碱计算，不得少于 0.20%，含东莨菪内酯不得
少于 0.080%[1]。本文对华山参药材中所含的活性成分
东莨菪苷进行含量测定研究，建立了华山参药材中东
莨菪苷的 HPLC 含量测定方法。
1　仪器与试药
Aglient 1100 series 高 效 液 相 色 谱 仪 ；KQ-250
型 超 声 波 清 洗 器（ 昆 山 市 超 声 仪 器 有 限 公 司 ）；
XR205SM-DR 型电子天平（瑞士 Precisa）；东莨菪苷
对照品由天津马克生物技术有限公司提供，甲醇为
色谱纯（Merk 公司），其余试剂均为分析纯（中国医
药集团上海化学试剂公司）。华山参药材来源见表 4，
均经我所聂桂华主任药师鉴定。
2 　方法与结果
2.1　色谱条件
Phenomenex Luna C18 (4. 6 mm X250 mm，5 μm)
色谱柱 ；甲醇 -0.5% 醋酸 (13 ：87) 为流动相 ；检测波
长为 347 nm ；流速为 1.0 mL /min ；柱温 40℃。在此
条件下东莨菪苷峰和杂质峰分离较好，色谱图见图 1。
A
B
图 1　对照品和样品的高效液相色谱图
Fig.1　HPLC chromatograms of reference and sample
注 ：A 东莨菪苷对照品 B 华山参样品
2.2　对照品溶液的制备
取东莨菪苷对照品约 10 mg，精密称定，用 60%
甲醇溶解制成每 1 mL 含 0.025 mg 的对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备
取华山参药材细粉 1 g，精密称定，置具塞瓶
中，精密加入 60% 甲醇 20 mL，密塞，超声处理 30
min，放冷，滤过，取续滤液，微孔滤膜（0.45μm）
滤过，作为供试品溶液。
2.4　样品提取溶剂的考察
称取同批华山参药材细粉 5 份，每份约 1 g，精
密称定，分别精密加入水、50% 甲醇、60% 甲醇、
75% 甲醇、甲醇 20 mL，密塞，超声处理 30min，放冷，
滤过，取续滤液，微孔滤膜（0.45μm）滤过，进样测定，
结果见表 1。结果表明，甲醇提取率最低，水杂质峰多 ,
提取率较低，选择 60% 甲醇作为样品的提取溶剂。
表 1　溶剂对华山参中东莨菪苷提取影响
Tab.1　The influence of solvent to the extraction of scopolin
提取溶剂 水 50% 甲醇 60% 甲醇 75% 甲醇 甲醇
东莨菪苷测定结果（mg/g） 1.55 1.67 1.73 1.63 1.24
2.5　样品提取方法的考察
称取华山参药材细粉，每份约 1 g，精密称定，
置圆底烧瓶中，精密加入 60% 甲醇 20 mL，分别采
用置水浴加热回流 1 h、冷浸 24 h、超声处理 30 min
的处理方法提取，提取液滤过，取续滤液进样，测定。
三种提取方法测定结果基本一致，故选择简便快速的
超声提取方法。
2.6　线性关系考察
取浓度为 52.8 μg/mL 的东莨菪苷对照品溶液进
样不同体积，测定峰面积，结果见表 2。以进样量 (μg)
为横坐标（X.），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，
进行回归分析，得回归方程为 Y= 1285.7 X—0.791（r
= 1.0000）。东莨菪苷在进样量 0.0264~0.792μg 范围
内，进样量与峰面积线性关系良好。
表 2　线性关系的试验结果
Tab.2　Results of linear relationship
进样体积 (μL) 0.5 1 2 5 10 15
进样量 X(μg) 0.0264 0.0528 0.1056 0.264 0.528 0.792
峰面积 Y 46.47 201.73 437.05 336.9 677.1 1018.7
2.7　精密度试验
精密吸取东莨菪苷对照品溶液 (0.047 73 mg/mL)
5μL 进样，在相同实验条件下重复进样 6 次，分别
记录峰而积。结果平均峰而积为 304.4， RSD 为 0.2%，
表明测定方法精密度良好。
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2.8　重复性试验
取同批华山参药材粉末 6 份，每份 1. 0 g，精密
称定，照供试品溶液的制备项下方法处理，在给定的
色谱条件下进行测定。结果 6 份华山参中东莨菪苷的
平均含量为 1.77 mg/g，RSD 为 0.6 %，表明方法重复
性良好。
2.9　稳定性试验
取华山参药材粉末 1. 0 g，精密称定，按供试品
溶液的制备方法，制得供试品溶液，于 0、2、4、
6.5、8.5 h 进样 5μL，测定峰面积。结果平均峰面积
为 596.5， RSD 为 0.5%，表明样品溶液中东莨菪苷在
8.5 h 内稳定性良好。
2.10　最低检出限
精密吸取东莨菪苷对照品溶液 (0.047 73 mg/mL)
，用流动相稀释后进样，测得本测定方法东莨菪苷的
最低检出限（三倍信噪比）为 1.432×10-3μg。
2.11　定量限
精密吸取东莨菪苷对照品溶液 (0.04773 mg/mL) ，
用流动相稀释后进样，测得本方法东莨菪苷的定量限
（十倍信噪比）为 4.773×10-3μg。
2.12　测定范围试验
取同批华山参药材粉末 0.5g、0.7g、1.2g、1.5 g
各 2 份，精密称定，照供试品溶液的制备项下方法处
理，在给定的色谱条件下进行测定。结果 8 份华山参
中东莨菪苷的测得平均含量 1.80 mg/g，RSD 为 2.3 %，
表明方法测定范围较广。
2.13　加样回收率试验
取己知东莨菪苷含量为 1.8 mg/g 的华山参药材
粉末约 0.5 g，共六份，精密称定，分别精密加入浓
度为 0.047 73 mg/mL 的东莨菪苷对照品 60% 甲醇溶
液 20 mL，密塞，超声处理 30 min，放冷，滤过，取
续滤液，作为供试品溶液。按在给定的色谱条件下
进行测定，计算回收率。结果测得回收率在 98.2%-
102.7% 之间，平均回收率为 100.5%，RSD 为 1.9%，
表明本法具有良好的回收率（见表 3）。
表 3　华山参药材中东莨菪苷的加样回收实验
Tab.3　Results of recovery test
取样量（g）
样品含量
（mg）
对照品加入量
（mg）
测得总量
（mg）
回收率（%）
0.5063 0.911 0.955 1.876 101.0
0.5354 0.964 0.955 1.904 98.5
0.5428 0.977 0.955 1.930 102.3
0.5301 0.954 0.955 1.892 98.2
0.5039 0.907 0.955 1.888 102.7
0.5151 0.927 0.955 1.884 100.7
2.14　样品测定
取收集的华山参药材样品，按上述给定含量测定
方法测定东莨菪苷的含量（见表 4）。
表 4　华山参药材中东莨菪苷的含量测定结果（n=3）
Tab.4　Results of content determination
样品产地及来源 东莨菪苷含量 （mg/g）
河南（河南天方药业中药有限公司，批号 1） 0.50
河南（河南天方药业中药有限公司，批号 2） 1.04
河南舞阳 （自采） 0.298
河南（本所标本室） 1.80
河南登封嵩山（自采） 0.60
河南登封嵩山（自采） 0.21
河南 ( 浙江中医药大学中药饮片厂 080815，原药材 ) 1.30
贵州 ( 浙江中医药大学中药饮片厂 080816，原药材 ) 1.34
河南 ( 浙江中医药大学中药饮片厂 080815，饮片 ) 0.46
贵州 ( 浙江中医药大学中药饮片厂 080816，饮片 ) 1.35
山东蒙城（市场购买） 0.20
湖北（市场购买） 1.05
3 　结论与讨论
3. 1　通过对所收集的华山参药材中东莨菪苷含量
测定研究发现，华山参药材中东莨菪苷的含量在
0.20 ～ 1.80 mg/g 之间，平均 0.84 mg/g，不同产地样
品中东莨菪苷含量差异较大，可以考虑采用东莨菪苷
作为华山参药材质量控制指标。
3.2　本含量测定方法简单便捷，结果准确可靠，适
用于华山参药材、饮片的质量控制。方法经适当修订
后可以应用于复方制剂中东莨菪苷的含量测定。
参考文献
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