全 文 ：大叶秦艽 HPLC指纹图谱研究
曹晓燕 1 ,李勇慧2 ,王喆之 1＊
(1.陕西师范大学生命科学学院药用植物资源与天然药物化学教育部重点实验室 ,陕西西安 710062;2.洛
阳师范学院生命科学系 ,河南洛阳 471022)
　　摘要　目的:建立大叶秦艽药材 HPLC指纹图谱分析方法 , 为其质量控制和药材鉴别提供依据。方法:高效液
相色谱法 , 色谱柱:ShimadzuC18(150 mm×4.6 mm, 5 μm);洗脱条件:甲醇-0.4%磷酸水溶液梯度洗脱;检测波长:
230nm;柱温:25 ℃;流速:1.0 mL/min。结果:确定构成大叶秦艽药材指纹的 5个共有峰 ,所测定的 14批秦艽药材
具有很高的相似度 , 劣质秦艽及伪品秦艽相似度较低。结论:大叶秦艽药材的 HPLC指纹图谱可用于药材鉴别和
质量控制。
关键词　大叶秦艽;指纹图谱;HPLC
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)04-0498-04
StudyonHPLCFingerprintofGentianamacrophyla
CAOXiao-yan1 , LIYong-hui2 , WANGZhe-zhi1
(1.KeyLaboratoryofMedicinalPlantResourcesandNaturalPharmaceuticalChemistry, CollegeofLifeSciences, ShanxiNormalUni-
versity, Xi an710062, China;2.ColegeofLifeSciences, LuoyangNormalUniversity, Luoyang471022, China)
Abstract　Objective:ToestablishHPLCfingerprintofGentianamacrophyla, whichwasexpectedtobestandardsofqualitycon-
trolandidentificationoftheChinesecrudedrug.Methods:TheHPLCmethodwasused, chromatographyconditionswereShimadzuC18
(150 mm×4.6 mm, 5μm)columnwithgradientmobilephaseofmethanol-0.4% Phosphoricacid, UVdetectionwavelengthwasat
230nmandthecolumntemperaturewasat25℃ withtheflowrateof1.0 ml/min.Results:5peakswereidentifiedasthecharacteris-
ticfingerprintsofGentianamacrophylaandthefingerprintsofthe14 sampleshadhighsimilarities.Thesimilaritiesofdisqualifiedand
fakemedicinalmaterialswerelow.Conclusion:ThisHPLCfingerprintofGentianamacrophyllacanbeusedasastandardofquality
controlandidentificationoftheChinesecrudedrug.
Keywords　GentianamacrophylaPall.;Fingerprints;HPLC
作者简介:曹晓燕(1975-), 讲师 , 主要从事药用植物资源与应用方面的研究;E-mail:caoxiaoyan@snnu.edu.cn。＊通讯作者:王喆之 , E-mail:zzwang@snnu.edu.cn。
　　秦艽 (GentianamacrophylaPal.)为龙胆科
(Gentiamaceae)多年生草本植物 ,是我国传统常用
中药材 ,也是国家重点保护的野生药材之一 ,其根
可入药 ,能祛风湿 、清湿热 、止痹痛 〔1〕。现代医学研
究表明 ,秦艽中主要含有以龙胆苦苷为代表的环烯
醚萜苷类活性成分 ,龙胆苦苷对风湿性关节炎有显
著的作用 〔2〕 ,还具有保肝 、利胆 、抗炎 、抗过敏 、抗
菌 、利尿 、健胃 、镇静 、镇痛 、退热等作用 〔3〕 ,已开发
为中药新药 。中国药典 2005年版收载的秦艽为龙
胆科植物秦艽(大叶秦艽 ,又称大叶龙胆)(Gentiana
macrophyla Pal.)、 麻 花 秦 艽 (G.straminea
Maxim.)、粗茎秦艽(又称粗茎龙胆)(G.crasicaulis
DuthieexBurk.)或小叶秦艽(G.dahuricaFisch.)的
干燥根 〔1〕。目前 ,市场上的秦艽药材质量存在一定
的差异 ,一些伪品秦艽在市场上也时有发现 〔4〕。中
药指纹图谱研究作为现代中药质量控制和鉴别的新
兴技术 ,为质量评价问题的解决提供了新的思路和
方法〔5〕。本实验对不同产地 、不同采收期的 14批大
叶秦艽的药材进行了 HPLC指纹图谱测定和比较 ,
选出 5个色谱峰作为指纹峰 ,建立了秦艽药材指纹
图谱 。为检验所建指纹图谱的适用性 ,本文选取一
批秦艽药材发生霉变 ,并从药材市场收集到黑秦艽
和红秦艽两种常见的伪品秦艽 ,进行指纹图谱鉴别 ,
结果表明建立的指纹图谱可有效地对伪品及劣质秦
艽进行鉴别。
1　仪器与材料
1.1　实验仪器　SHIMADZULC-2010高效液相色
谱仪(包括自动进样器 ,紫外检测器 , LCsolution色
谱工作站等);MILLI-Q超纯水仪(MILLIPORE公
司);RE-52AA旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器
厂);KQ5200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有
限公司)等 。
1.2　试剂　甲醇(天津市科密欧化学试剂开发中
心 ,色谱纯);磷酸(天津市化学试剂三厂 ,分析纯);
所用水为超纯水。
1.3　标准品 、药材　标准品:龙胆苦苷(gentiopic-
·498· 中药材　JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 4期 2008年 4月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.04.053
rin, 110770-200409)购自中国药品生物制品检定所 。
药材:实验用药材样品共 17批 ,其中前 14批分别从
陕西 、甘肃等地采集 ,经陕西师范大学生命科学学院
植物分类教研室鉴定为龙胆科植物秦艽(Gentiana
macrophylaPal.)的根 ,用于秦艽药材指纹图谱的
建立;后三批分别为霉变处理的药材 、从药材市场收
集的黑秦艽和红秦艽两种伪品秦艽 ,经陕西师范大
学生命科学学院植物分类教研室鉴定黑秦艽和红秦
艽分别为龙胆科植物西藏黑秦艽(GentianaWaltoni
Burkil.)和唇形科植物甘西鼠尾 (Salviaprzewalski
Maxim)的干燥根 ,用于检验所建指纹图谱的适用
性 。样品来源详见表 1。
　表 1 　实验所用样品来源
样品号 产地 日期 年限
1 陇县栽培 2005.08 三年生
2 陇县栽培 2005.08 二年生
3 凤县栽培 2005.09 三年生
4 凤县野生 2005.09
5 凤县栽培 2005.10 三年生
6 凤县野生 2005.10
7 凤县栽培 2005.11 二年生
8 凤县栽培 2005.11 三年生
9 千阳野生 2005.11
10 凤县栽培 2005.12 三年生
11 凤县野生 2005.12
12 凤县栽培 2006.01 三年生
13 陇县栽培 2006.01 三年生
14 甘肃天水 药材公司收购
15 霉变样品 为 5号样品霉变
16 红秦艽 药材市场收购
17 黑秦艽 药材市场收购
2 　实验方法
2.1 　色谱条件　色谱柱:ShimadzuC18(150 mm×
4.6mm, 5μm);流动相:甲醇-0.4%磷酸水溶液 ,
低压梯度洗脱模式见表 2;柱温:25 ℃;流速:1.0
ml/min;检测波长:230 nm;进样量:10μl。
　表 2 　指纹图谱流动相线性梯度表
时间(min) 甲醇(%) 0.4%磷酸(%)
0.00 10 90
30.00 15 85
50.00 20 80
70.00 22 78
2.2 　对照品溶液制备　精密称取龙胆苦苷标准品
5.0mg,置 10 mL容量瓶中 ,加甲醇定容至刻度 ,摇
匀 , 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,即得。
2.3　供试品溶液制备　精密称取 37 ℃干燥至恒
重的秦艽样品 0.50g(过 40目筛),置 50 ml具塞锥
形瓶中 ,准确加入甲醇 10 ml,称定重量 ,超声提取
40 min,用甲醇补足重量 ,摇匀 , 1000 r/min离心 2
min, 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,即得 。
2.4　指纹图谱评价方法　采用国家药典委员会开
发的中药色谱指纹图谱相似度评价系统研究版
(2004A)进行指纹图谱分析 。相似度计算方法为夹
角余弦法 ,可支持多点校正。
2.5　方法学考察
2.5.1　稳定性试验:取同一批供试品溶液 ,分别于
0、12、24、36、48 h检测指纹图谱 ,各特征峰表观丰度
无明显差异。比较色谱峰保留时间 ,各色谱共有峰
保留时间 RSD在 0.09% ～ 0.34%之间 ,计算相似度
均大于 0.995 ,表明样品溶液在 48 h内稳定。
2.5.2　精密度试验:取同一供试品溶液 ,连续进样
5次 ,检测指纹图谱。比较各色谱峰的保留时间 ,结
果表明 5次进样各共有峰保留时间 RSD在 0.05%
～ 2.96%之间 ,计算相似度均大于 0.991,表明供试
品进样精密度良好 。
2.5.3 　重复性试验:取同一批秦艽药材 5份 ,按
2.3项下方法制备供试品溶液 ,分别检测指纹图谱 ,
并考察各特征峰的表观丰度 ,结果表明各共有峰保
留时间 RSD在 0.05% ～ 2.48%之间 ,计算相似度均
大于 0.996,表明本法测定的重复性良好。
3　实验结果
3.1　秦艽药材 HPLC指纹图谱的测定　取秦艽药
材 1 ～ 14号样品 ,按 2.3项下方法制备供试品溶液 ,
在已确定的色谱条件下取样品溶液 5μl注入高效液
相色谱仪进行分析测定 ,即得样品 HPLC色谱图。
其特征指纹峰见图 1。
图 1　14批秦艽样品 HPLC指纹图谱
S1 ～ S14分别代表表 1中 1 ～ 14号样品
3.2　秦艽药材 HPLC指纹图谱的建立　对 1 ～ 14
号样品进行测定 ,记录 70 min色谱图 ,并对不同供
·499·中药材　JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 4期 2008年 4月
试品所得指纹图谱进行分析 , 以龙胆苦苷的特征峰
为参照峰进行谱峰校对 ,各样品间确定了 9个共有
峰 ,为使指纹图谱不太复杂 ,去掉 4个平均峰面积不
足 1%的较小峰 ,据此建立了由 5个峰组成的秦艽
药材HPLC指纹图谱见图 2 ,各特征峰保留时间及
图 2　秦艽样品 HPLC指纹图谱
相对峰面积见表 3。
3.3　劣质及伪品秦艽药材 HPLC指纹图谱的建立
对 15 ～ 17号样品进行测定 ,其各种峰出现的位置及
相对峰面积与前 14号样品具有明显差异。见图 3。
3.4　相似度计算　采用中药色谱指纹图谱相似度
评价系统研究版(2004A)进行计算 。首先将色谱工
作站数据输入中药指纹图谱相似度计算软件 ,以 2
号样品为对照药材 ,选定 4号峰为参照峰进行谱峰
匹配 ,通过中位数矢量计算得出秦艽样品指纹图谱
的共有模式 ,并以此共有模式为标准 ,采用夹角余弦
算法对各批样品进行整体相似度评价。结果显示 ,
用于建立指纹图谱的 14批秦艽药材相似度较高 ,范
围在 0.964 ～ 0.999之间;而用于指纹图谱适用性检
验的劣质和伪品秦艽相似度明显较低 , 15 ～ 17号样
品的相似度分别为 0.431, 0.302和 0.875。见表 4。
　　表 3 　特征峰峰号 、保留时间及峰面积相对含量
峰　号 1 2 3 4 5
保留时间(min) 10.091±0.429 25.505±0.322 27.625±0.211 32.295±0.067 38.416±0.365
相对峰面积(%) 1.278±0.240 15.422±4.215 4.488±0.252 72.643±4.112 1.494±1.321
图 3　劣质及伪品秦艽与正品秦艽 HPLC指纹图谱
由下至上:S1:5号样品;S2:黑秦艽;S3:红秦艽;S4:霉变样品
　表 4 　17批样品 HPLC图谱相似度比较
样品号 相似度 样品号 相似度
1 0.981
2 0.995
3 0.966
4 0.998
5 0.997
6 0.997
7 0.990
8 0.999
9 0.998
10 0.999
11 0.978
12 0.967
13 0.964
14 0.995
15 0.431
16 0.302
17 0.875
4 　讨论
本文测试了不同产地 、不同类型 (栽培 、野生)
和不同采样时间的秦艽样品 ,结果显示 ,各样品的
HPLC指纹图谱均具有上述特征峰 ,特征峰保留时
间基本一致 , 5个特征峰的峰面积占总峰面积的
95%以上 。将样品色谱图与标准品色谱图的保留时
间进行比对 ,可以确定 4号峰为龙胆苦苷 ,中国药典
2005版以龙胆苦苷作为秦艽药材质量控制标准 〔1〕 ,
因此 ,确定以龙胆苦苷为主的 5个特征峰为秦艽
HPLC特征指纹图谱是合理的。
　　前人曾对麻花秦艽的指纹图谱进行了研究 ,采
用的供试品溶液的制备方法有所不同 ,虽然都是用
甲醇作为提取溶剂 ,但提取方法有所不同 , 吴启勋
等〔6〕采用的是热回流提取法 ,李晓蒙等人 〔7〕采取的
是超声提取法 。本实验比较了超声提取法 、热回流
提取及索式提取法 , 发现超声提取法所得样品
HPLC指纹图谱各峰响应值较高 ,因此 ,本实验选择
超声提取法 ,用甲醇处理得到供试品样品。
本文用 HPLC法对陕西和甘肃主产的大叶秦艽
进行指纹图谱分析 ,采用低压梯度洗脱方法进行色
谱分离 ,结果显示 ,用于建立指纹图谱的 14批秦艽
药材相似度均在 0.964以上 ,相似度良好。而用于
指纹图谱适用性检验的劣质和伪品秦艽相似度均低
于 0.9,说明所建立的指纹图谱可有效地鉴别药材
的真伪优劣。用于指纹图谱适用性检验的三批药材
中 ,霉变的秦艽药材和红秦艽的相似度非常低 ,分别
为 0.431和 0.302,而黑秦艽的相似度为 0.875,相
·500· 中药材　JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 4期 2008年 4月
对较高 ,这可能是由于黑秦艽与大叶秦艽为同一个
属的植物 ,而红秦艽与大叶秦艽分属不同的科 。
大叶秦艽药材指纹图谱与药典规定的其它 3种
秦艽药材指纹图谱的相似度如何有待进一步研究。
致谢:感谢陕西地道中药材种植有限公司总经理王炳利老师在
样品收集方面提供的帮助。
参 考 文 献
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化学工业出版社 , 2005:190-191.
[ 2] 陈长勋 ,刘占文 , 孙峥嵘 , 等 .龙胆苦苷抗炎药理作用
研究 .中草药 , 2003, 34(9):814-816.
[ 3] 徐国钧 .中国药材学(上).北京:人民卫生出版社 ,
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[ 4] 李新娥 .秦艽及其伪品的鉴别 .湖南中医药导报 ,
2000, 6(3):40-41.
[ 5] 周玉新 .中药指纹图谱研究技术 .北京:化学工业出版
社 , 2002:31-40.
[ 6] 吴启勋 , 安燕 , 张明锦 , 等 .青海秦艽高效液相色谱指
纹图谱的研究 .西北植物学报 , 2006, 26(1):174-178.
[ 7 ] 李晓蒙 , 何新荣 .秦艽药材 HPLC指纹图谱研究 .中
成药 , 2004, 26(1):4-7.
(2007-10-08收稿)
三种江边一碗水的比较鉴别(Ⅱ)
陈吉炎 ,于　萍 ,杨光义 ,朱海涛 ,安志斌 ,宋登鹏
(郧阳医学院附属太和医院 ,湖北十堰 442000)
　　摘要　目的:鉴定市场中的江边一碗水来源 , 为拟定质量标准和鉴别真伪提供参考。方法:采用薄层色谱法对
市场中 6批江边一碗水进行比较鉴别。结果:江边一碗水分别为小檗科植物南方山荷叶 DiphyleiasinensisLi.、八
角莲 Dysosmaversipellis(Hance.)M.Cheng及六角莲 Dysosmapleiantha(Hance)Woods.的干燥根茎。根据其生药
学特征 , 分别编制了三种江边一碗水的原植物 、性状 、显微鉴别和薄层色谱鉴别检索表。结论:采用薄层色谱鉴别
和编制检索表鉴别三种来源的江边一碗水 ,方法简便 、可靠。
关键词　南方山荷叶;八角莲;六角莲;薄层色谱;检索表
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)04-0501-03
IdentificationonThreeKindsofDiphyleiasinensis(Ⅱ)
CHENJi-yan, YUPing, YANGGuang-yi, ZHUHai-tao, ANZhi-bin, SONGDeng-peng
(TaiheHospitalAffiliatedYunyangMedicalCollege, Shiyan442000, China)
Abstract　Objective:Inordertoprovidereferenceforthedevelopmentofqualitystandardsanddistinctionofauthenticity, some
sourcesofDiphylleiasinensisLi.inthemaketwereidentifiedbysampling.Methods:TheTLCofsixbatchesofDiphyleiasinensisLi.
inthemarketwereidentified.Results:TheywerethedriedrhizomeofDiphyleiasinensisLi., Dysosmaversipellis(Hance.)M.Cheng
andD.pleiantha(Hance)Woods.Accordingtothepharmaceuticalcharacteristics, retrievaltablesofidentificationonplants, traits,
microscopicandTLCwereestablished.Conclusion:ItissimpleandreliabletouseTLCandretrievaltabletoidentifythreesourcesof
DiphyleiasinensisLi.
Keywords　DiphylleiasinensisLi.;Dysosmaversipelis(Hance.)M.Cheng;D.pleiantha(Hance)Woods.;TLC;Retrieval
table
基金项目:湖北省教育厅重点科研项目(B200524024)作者简介:陈吉炎(1952-),男,湖北房县人 ,教授 ,硕士生导师 ,主要从事中药资源研究开发及质量鉴定工作;Tel:0719-8801393, E-mail:Jiyanchen@sohu.com。
　　鄂西北及神农架林区是江边一碗水的主要分布
区域之一。民间有用江边一碗水治疗腰腿劳伤及跌
打损伤的习俗。由于使用不当 ,常有误服或超剂量
服用引起中毒者 。为准确鉴定品种来源 ,防止误用 ,
继性状和显微鉴别〔1〕之后 ,笔者又采用薄层色谱法
对 6批样品进行了比较鉴别 ,编制了三种江边一碗
水的原植物 、性状 、显微鉴别检索表。
1　材料与试剂
1.1　实验材料 　6批不同产地的样品来源见前
文〔1〕。
·501·中药材　JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 4期 2008年 4月