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长柄扁桃茎尖离体分化成苗的培养基筛选



全 文 :陕西林业科技 2015,(1):32~37
Shaanxi Forest Science and Technology
 收稿日期:2015-01-19
 基金项目:林业公益性行业科研专项(201104074)和省科技厅农业攻关项目。
 作者简介:蒋晋豫(1984-),男,山西阳泉人,博士研究生,助理研究员,研究方向:林木遗传育种。
长柄扁桃茎尖离体分化成苗的培养基筛选
蒋晋豫1,施智宝1,冯光惠2,杨 涛1,史社强1,李 剑1
(1.陕西省治沙研究所,陕西 榆林719000;2.榆林学院,陕西 榆林719000)
摘 要:探索河北丰宁、包头固阳、内蒙乌审旗和陕西神木等四产地长柄扁桃茎尖离体分化成苗的最适
培养基,为优良品种的种质资源保存和大量繁殖奠定基础。以 MS、WPM 和B5培养基为基础培养基,
添加不同浓度的生长素和细胞分裂素,共组成48种培养基,每种培养基分别接种长柄扁桃优良品种茎
尖50个,茎尖大小为0.3~0.5mm,25℃、16h/3 000Lx光照培养,20℃、8h暗培养,10d后统计茎尖
离体分化成苗情况。实验结果得出,10d后形成黄绿色的愈伤组织,25~30d时可分化出幼苗,培养基
为 WPM+NAA0.1mg/L+BAP1.0mg/L+GA3 0.10mg/L时,四产地长柄扁桃最适合茎尖分化成苗
率均最高,河北丰宁、内蒙乌审旗、包头固阳和陕西神木四产地的分别为62%、54%、48%和60%,且幼
苗生长健壮。WPM培养基是长柄扁桃茎尖离体培养最合适的基础培养基,在筛选激素组合的培养基
上培养可获得大量的长柄扁桃组培苗。
关键词:茎尖;培养基筛选;分化苗
中图分类号:S662.1 文献标识码:A 文章编号:1001-2117(2015)01-0032-06
Media Screening for Stem Tip Differentiation into Sprout
JIANGJin-yu1,SHI Zhi-bao1,FENG Guang-hui 2,YANGTao1,SHI She-qiang1,LIJian1
(1.Shaanxi Institute of Sand Control,Yulin ,Shaanxi 719000;
2.Yulin Institute,Yulin ,Shaanxi 719000)
Abstract:Experiments were conducted to find out the proper media for stem-tip differentiation into
sprout of Prunes pedunculata colected from Fengning of Hebei,Guyang of Baotou,Wushengqi and
Shenmu of Shaanxi.MS,WPM and B5were used as media respectively,added with different concen-
trations of auxin and cytokinin.48different media were formed to cultivate 50stem-tip sized 0.3~
0.5mm for ilumination incubation with 16h/3000Lx at temperature 25℃or dark incubation at tem-
perature 20℃for 8h.After 10d,the differentiation of stem-tip was calculated.The result showed
that after 10d,yelow-green calus were formed and after 25~30dthe differentiation into seedlings
were formed.When media WPM+NAA0.1mg/L+BAP1.0mg/L+GA3 0.10mg/L was applied,
differentiation of stem-tips of Prunes pedunculata from four locations produced maximum survival
seedlings and survival rate were 62%、54%、48%and 60%,respectively.WPM is proved to be the
best basic medium for stem-tip differentiation of Prunes pedunculata.
Key words:buds;Medium selection;green plant;regeneration
  长柄扁桃又名野樱桃,是蔷薇科桃属落叶灌
木,主要分布于我国内蒙古自治区中西部山区,山
西北部地区,河北中西部地区、宁夏贺兰山区和陕
西省榆阳区、神木县境内,抗寒、抗旱力极强,是优
良的多抗型果树育种材料和荒山、沙漠地区的造
林树种。因原生地生态环境恶劣和人为破坏,长
柄扁桃自然分布范围迅速缩小,种群数量快速下
降,已被列为国家二级濒危植物[1]。国内外对长
柄扁桃研究甚少。长柄扁桃与桃、扁桃亲缘关系
很近,是潜在的桃、扁桃矮化多抗型砧木种质资
源。研究长柄扁桃组织培养再生植株,即茎尖分
化成苗,对这一珍贵濒危树种的保护和开发利用
具有重要意义。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 长柄扁桃外植体 2014年4月中下
旬采集生长至长度约5cm的幼嫩萌发新梢,流水
下冲洗1h,剪下约1cm的茎尖备用,品种分别来
自河北丰宁、包头固阳、内蒙乌审旗和陕西神木四
个产地。
1.1.2 实验药品 培养基及不同植物生长调节
剂所含药品,均购自北京康贝斯生物科技有限公
司。琼脂糖、蔗糖等购自北京全式金生物科技有
限公司。
1.2 方法
1.2.1 培养基组成 以MS、WPM和B5培养基
为基本培养基,添加不同质量浓度配比的植物生
长调节剂,其中,细胞分裂素6-BA的4个浓度
分别 0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L、2.0
mg/L,生长素 NAA 的4个浓度分别为0.025
mg/L、0.05mg/L、0.075mg/L、0.1mg/L,赤霉
素GA3的浓度为0.1mg/L,共组成48种培养基
(表1),蔗糖30g/L,卡拉胶5g/L,pH 5.8。
1.2.2 茎尖剥离与接种 剪取长势较好的无菌
苗,以注射器针代替解剖针在40倍的体视显微镜
下进行茎尖剥离。因剥离茎尖越大,成活率越高,
但脱毒率低,为提高再生苗的成活率,试验全部剥
离带2个叶原基的茎尖,茎尖大小约0.3~0.5
mm,壮苗茎尖稍大,弱细苗茎尖稍小。培养温度
为25℃,光 照 时 间 为 16 h/d,光 照 强 度 为
3 000Lx。
为降低污染率,每个试管只接种1个茎尖,每
个处理的培养基接种50个茎尖。10d后观察并
记录茎尖生长情况,20d后统计愈伤组织诱导率、
分化成苗率。
愈伤组织诱导率(%)=形成愈伤组织个数/
接种茎尖个数×100%
茎尖分化成苗率(%)=分化成苗个数/接种
茎尖个数×100%
2 结果与分析
2.1 MS培养基对四种长柄扁桃茎尖分化成苗
的影响
由表1可以看出,剥离带2个叶原基的茎尖
接种在不同激素组合的16种 MS培养基中均能
形成愈伤组织,M16培养基的愈伤组织诱导率最
低,为82%;M09等4个培养基愈伤组织诱导率
最高,为96%,表明 MS培养基均能诱导四种长
柄扁桃的茎尖分生组织发生脱分化,四产地的茎
尖分化成苗率几乎没有差异。较适合长柄扁桃茎
尖分化成苗的培养基为 MS+6-BA 1.0mg/L
+NAA 0.1mg/L+GA3 0.10mg/L。
2.2 B5培养基对四种长柄扁桃茎尖分化成苗的
影响
由表2可以看出,剥离带2个叶原基的茎尖
接种在不同激素组合的16种B5培养基中均能
形成愈伤组织,B04培养基的愈伤组织诱导率最
低,为70%;B09等3个培养基愈伤组织诱导率
最高,为86%,表明B5培养基均能诱导四种长柄
扁桃的茎尖分生组织发生脱分化,但较 MS培养
基的愈伤组织诱导率下降,四产地的茎尖分化成
苗率同样没有差异。较适合长柄扁桃茎尖分化成
苗的培养基为B5+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1
mg/L+GA3 0.10mg/L。
2.3 WPM 培养基对四种长柄扁桃茎尖分化成
苗的影响
由表3a-d可以看出,剥离带2个叶原基的
茎尖接种在不同激素组合的16种 WPM 培养基
中均能形成愈伤组织,愈伤组织诱导率在不同品
种之间差异很小,表明 WPM 培养基均能诱导四
种长柄扁桃的茎尖分生组织发生脱分化,但较
MS培养基的愈伤组织诱导率下降,与B5培养基
的差异较小。但是,四产地的茎尖分化成苗率差
异较大。最高为河北丰宁,其次为陕西神木、乌审
旗,包头固阳最低,最适合长柄扁桃茎尖分化成苗
的培养基为 WPM+6-BA 1.0mg/L+NAA
0.1mg/L+GA3 0.10mg/L。所成苗叶片较绿,
生长健壮。见图1,表3系列见附录
·33·2015年第1期 蒋晋豫等 长柄扁桃茎尖离体分化成苗的培养基筛选
表1 MS培养基对四种长柄扁桃茎尖分化成苗的影响
处理
激素组合 (mg/L)
6-BA  NAA
接种个数
愈伤组织诱导率
(%)
分化成苗率
(%)
M01  0.5  0.025  50  94  16
M02  1.0  0.025  50  92  20
M03  1.5  0.025  50  88  20
M04  2.0  0.025  50  80  26
M05  0.5  0.05  50  94  20
M06  1.0  0.05  50  94  24
M07  1.5  0.05  50  86  24
M08  2.0  0.05  50  84  28
M09  0.5  0.075  50  96  24
M10  1.0  0.075  50  96  28
M11  1.5  0.075  50  86  30
M12  2.0  0.075  50  84  30
M13  0.5  0.1  50  96  34
M14  1.0  0.1  50  96  40
M15  1.5  0.1  50  86  34
M16  2.0  0.1  50  82  36
表2 B5培养基对四种长柄扁桃茎尖分化成苗的影响
处理
激素组合 (mg/L)
6-BA  NAA
接种个数
愈伤组织诱导率
(%)
分化成苗率
(%)
B01  0.5  0.025  50  82  20
B02  1.0  0.025  50  80  24
B03  1.5  0.025  50  76  24
B04  2.0  0.025  50  70  30
B05  0.5  0.05  50  82  24
B06  1.0  0.05  50  82  30
B07  1.5  0.05  50  80  30
B08  2.0  0.05  50  74  28
B09  0.5  0.075  50  86  28
B10  1.0  0.075  50  84  32
B11  1.5  0.075  50  84  36
B12  2.0  0.075  50  72  36
B13  0.5  0.1  50  86  40
B14  1.0  0.1  50  86  42
B15  1.5  0.1  50  82  38
B16  2.0  0.1  50  76  36
·43· 陕 西 林 业 科 技
表3a WPM培养基对河北丰宁长柄扁桃茎尖分化成苗的影响
处理
激素组合 (mg/L)
6-BA  NAA
接种个数
愈伤组织诱导率
(%)
分化成苗率
(%)
WH01  0.5  0.025  50  86  24
WH02  1.0  0.025  50  84  36
WH03  1.5  0.025  50  80  30
WH04  2.0  0.025  50  74  38
WH05  0.5  0.05  50  86  34
WH06  1.0  0.05  50  86  36
WH07  1.5  0.05  50  82  40
WH08  2.0  0.05  50  76  38
WH09  0.5  0.075  50  90  40
WH10  1.0  0.075  50  86  46
WH11  1.5  0.075  50  86  44
WH12  2.0  0.075  50  76  38
WH13  0.5  0.1  50  92  48
WH14  1.0  0.1  50  90  62
WH15  1.5  0.1  50  88  50
WH16  2.0  0.1  50  84  40
·53·2015年第1期 蒋晋豫等 长柄扁桃茎尖离体分化成苗的培养基筛选
表3b WPM培养基对内蒙乌审旗长柄扁桃茎尖分化成苗的影响
处理
激素组合 (mg/L)
6-BA  NAA
接种个数
愈伤组织诱导率
(%)
分化成苗率
(%)
WN01  0.5  0.025  50  86  24
WN02  1.0  0.025  50  86  26
WN03  1.5  0.025  50  80  26
WN04  2.0  0.025  50  76  28
WN05  0.5  0.05  50  86  24
WN06  1.0  0.05  50  86  28
WN07  1.5  0.05  50  82  38
WN08  2.0  0.05  50  76  26
WN09  0.5  0.075  50  90  30
WN10  1.0  0.075  50  86  36
WN11  1.5  0.075  50  86  34
WN12  2.0  0.075  50  74  28
WN13  0.5  0.1  50  92  38
WN14  1.0  0.1  50  92  48
WN15  1.5  0.1  50  88  40
WN16  2.0  0.1  50  84  30
表3c WPM培养基对包头固阳长柄扁桃茎尖分化成苗的影响
处理
激素组合 (mg/L)
6-BA  NAA
接种个数
愈伤组织诱导率
(%)
分化成苗率
(%)
WS01  0.5  0.025  50  86  24
WS02  1.0  0.025  50  84  30
WS03  1.5  0.025  50  82  26
WS04  2.0  0.025  50  74  28
WS05  0.5  0.05  50  84  34
WS06  1.0  0.05  50  86  30
WS07  1.5  0.05  50  82  30
WS08  2.0  0.05  50  76  32
WS09  0.5  0.075  50  88  34
WS10  1.0  0.075  50  86  40
WS11  1.5  0.075  50  84  40
WS12  2.0  0.075  50  76  32
WS13  0.5  0.1  50  92  44
WS14  1.0  0.1  50  90  54
WS15  1.5  0.1  50  88  44
WS16  2.0  0.1  50  82  36
·63· 陕 西 林 业 科 技
表3d WPM培养基对陕西神木长柄扁桃茎尖分化成苗的影响
处理
激素组合 (mg/L)
6-BA  NAA
接种个数
愈伤组织诱导率
(%)
分化成苗率
(%)
WY01  0.5  0.025  50  80  26
WY02  1.0  0.025  50  84  32
WY03  1.5  0.025  50  82  28
WY04  2.0  0.025  50  78  34
WY05  0.5  0.05  50  86  32
WY06  1.0  0.05  50  86  34
WY07  1.5  0.05  50  82  36
WY08  2.0  0.05  50  78  34
WY09  0.5  0.075  50  90  36
WY10  1.0  0.075  50  86  42
WY11  1.5  0.075  50  86  42
WY12  2.0  0.075  50  74  34
WY13  0.5  0.1  50  92  44
WY14  1.0  0.1  50  92  60
WY15  1.5  0.1  50  90  52
WY16  2.0  0.1  50  82  44
3 讨论
实验结果表明,最适合长柄扁桃茎尖分化成
苗的培养基为 WPM+6-BA 1.0mg/L+NAA
0.1mg/L+GA3 0.10mg/L。影响植物器官分化
的内源激素、细胞分裂素和生长素只有达到一定
的浓度和比例才能使器官发生,从而达到预期的
目的。在长柄扁桃茎尖分化成苗培养中,所有处
理的6-BA与NAA浓度比值相同。只有当6-
BA和NAA的浓度达到相对较高时,长柄扁桃的
茎尖分化成苗效果才较好。在该试验中,GA3
对长柄扁桃的增殖效果无明显的影响。
试验处于茎尖分化成苗阶段,还需进行诱导
生根试验、扩繁试验,有待进一步筛选合适的培养
基进行比对研究。
参 考 文 献
[1] 郭春会,罗梦,马玉华,等.沙地濒危植物长柄扁桃特性研究
进展[J].西北农林科技大学学报,2005,(12):126-128.
[2] 徐子勤,贾敬芬.沙冬青愈伤组织对培养基的特殊要求和球
形胚状体分化结构的诱导[J].西北植物学报,2007,17
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·73·2015年第1期 蒋晋豫等 长柄扁桃茎尖离体分化成苗的培养基筛选