全 文 ：北方药学 2011年第 8卷第 1期
HPLC法测定蒙药加味乌兰牧仁汤中桅子苷的含量
孔 文 赵燕红（内蒙古阿拉善盟药品检验所 阿拉善 750306）
摘要：目的：建立高效液相色谱法测定蒙药乌兰牧仁汤中桅子苷的方法。方法：采用 C18柱，流动相为乙腈—水（9∶91），检测波长
为 238nm，流速 1ml·min-1，柱温为 30℃，进样量为 10μl。结果：桅子苷在 0.2407～0.6419μg进样量范围内线性关系良好，r=
0.9996，回收率为 103.47%，R=0.62（n=6）。结论：本法简便、快速、灵敏、重现性好，可供该制剂定量用。
关键词：蒙药乌兰木仁汤 HPLC 桅子苷 含量测定
中图分类号：R927.2 文献标识码：B 文章编号：1672-8351（2011）01-0007-02
乌兰牧仁汤是由诃子、川楝子、栀子、茜草、枇杷、紫草茸、
苏木、甘草、北沙参、拳参、紫草、西河柳等十二味药组成的蒙
古族验方。具有清热解毒，利咽，利胆的功效。用于治疗咽喉
炎、病毒性感冒、过敏性紫癜等。
为提高民族药的内在质量，建立了高效液相色谱法测定
主成分中桅子苷的含量。该法灵敏、重现性好，专属性强，为该
制剂的质量提供了准确的测定方法。
1 仪器与试药
1.1仪器：岛津 LC—10ATvp泵，SPD—10Avp型检测器,SCL—
10Avp控制器，class—vp色谱工作站。岛津 UV—1700型紫外
分光光度仪。Sartorious BP2110D 型电子天平（d=0.01mg），
Precisa XT-220A型电子天平（d=0.1mg）。
1.2试剂与试药：桅子苷对照品（批号：110749-200512，供含量
测定用）：由中国药品生物制品检定所提供；乙腈、甲醇为色谱
纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。
1.3供试品：由阿拉善盟额济纳旗中蒙医院提供；模拟样自制。
2 方法与结果
2.1色谱分析条件：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，本
实验研究采用 PhenomenexC18柱（250mm×4.6mm，5μm）。以乙
腈—水（9∶91）为流动相，检测波长为 238nm，流速1ml·min-1，柱
温为 30℃。理论板数按桅子苷峰计算应不低于 1500。进样量
10μl，按外标法以峰面积计算。
2.2对照品溶液的制备：取桅子苷对照品约 10mg，精密称定，
置 50ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取
5ml至 25ml量瓶中，加甲醇至刻度（即每 1ml含栀子苷对照品
40μg）。
2.3供试品溶液的制备：取本品 0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶
中，精密加入甲醇 50ml，密塞，称定重量，超声处理 30分钟，放
冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤
液，即得。
2.4阴性对照试验：取按处方比例并以相同工艺制备的缺桅子
的阴性对照供试品，按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶
液、供试品溶液各 10μl，分别注入液相色谱仪，测得结果为：阴
性对照色谱图中在与桅子苷对照品以及供试品色谱图相对应
的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分对桅子苷的测定
无干扰。
2.5 线性关系考察：精密称取桅子苷对照品 10mg（实际为
10.03mg），置 50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，
精密量取 3、4、5、6、7和 8ml，分别置 25ml量瓶中，用甲醇稀释
至刻度，摇匀，各取 10μl进样，按上述色谱条件测定，以峰面
积对进样量进行回归分析，结果桅子苷在 0.2407～0.6419μg范
围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=3E+06X-38801，r=
0.9996。标准曲线数据见表 1。
表1桅子苷的标准曲线数表
2.6稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别在 0h、4h、8h、12h
进行测定，结果见表 2。
表2不同时间测定样品中桅子苷的峰面积积分值
从表中数据可见，桅子苷在 12小时内的峰面积积分值基
本稳定不变。
2.7重复性试验：取同一批号样品（批号：20080228-011）6份，
精密称定 0.4g，按含量测定方法，测定每份样品含量。按外标
法计算含量，结果见表 3。
表3桅子苷含量重复性试验结果
进样量
（μg） X 0.2407 0.3210 0.4012 0.4814 0.5617 0.6419
峰面积积
分值
Y 759636 1001921 1245062 1530954 1794128 2055591
放置时间（小时） 0 4 8 12 RSD（%）
峰面积积分值 1097525 1073331 1066563 1069564 1.31
样品号 取样量（g） 峰面积值
含量
（mg·g-1）
平均含量
（mg·g-1） RSD（%）
1 0.3996 1083550 4.481
4.514 0.61
2 0.3997 1084136 4.483
3 0.4004 1103463 4.555
4 0.4001 1093400 4.517
5 0.4002 1095647 4.525
6 0.4003 1094649 4.520
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北方药学 2011年第 8卷第 1期
含量测定。结果见表 5。
表5样品测定结果
3 讨 论
3.1本实验采用薄层色谱法对丹参、枸杞子和麦冬进行鉴别，特
征斑点清晰，阴性无干扰，重现性、专属性均良好，可有效
地判别虫草参芪口服液中上述三种投料饮片的质量真伪。
3.2采用双波长反射锯齿扫描方法，对方中黄芪所含主要有效成
分黄芪甲苷进行含量测定，方法操作简便、快速、重复性好，分离
效果较佳，且无干扰，适用于该制剂中黄芪甲苷的含量测定。
3.3本文通过实验研究，对虫草参芪口服液质量标准在原有的
基础上进行了必要的提高，增加了丹参、枸杞子和麦冬的薄层
色谱鉴别，建立了双波长反射锯齿扫描法测定黄芪甲苷含量
的方法，为更好地控制其质量、保障临床用药安全有效提供了
技术依据。
3.4因皂苷类成分在含水正丁醇中溶解性好，故文中采用含水
正丁醇直接萃取，提取效率高；本文中试验方法专属性强、灵
敏度高，也可供其他含黄芪药材的中药制剂之借鉴。
参考文献
[1]WS-5852（B-0852）-2002.
[2]明·龚廷贤撰.寿世保元[M].北京：人民卫生出版社，1994年
10月第二次印刷.
[3]清·莹轩氏.济世良方[M].北京：中医古籍出版社，1987.
[4]国家药典委员会编.中国药典[M].一部.2005年版.北京：化学
工业出版社，附录 31-32.
批号 含量（mg·支-1） RSD（%）
090504 0.36 10.77（n=4）
090709 0.35 4.15（n=4）
090710 0.43 2.03（n=5）
2.8加样回收试验：取供试品（样品，含量 4.514mg·g-1）6份，各
约 0.25g，精密称定，置 50ml量瓶中，各精密加入用甲醇配制
的桅子苷对照品溶液（浓度为 0.2357mg·ml-1）4ml，用甲醇稀释
至刻度，超声处理 30分钟，冷却，滤过。分别按含量测定项下
的方法操作，测定每份供试品含量，计算回收率，结果见表 4。
表4桅子苷加样回收试验结果
2.9样品含量测定：取本品按含量测定方法处理并测定，三批
样品和模拟样的测定结果见表 5。
表5样品中栀子苷含量测定结果
3 结论与讨论
3.1对提取溶剂及提取效率的考察
3.1.1提取溶剂的选择。参照《中国药典》2005年版一部“桅子”
项下的桅子苷含量测定方法，选用甲醇作为提取溶剂。
3.1.2提取效率的考察。以甲醇作为提取溶剂进行超声提取（功
率 300W,频率 40kHz），为保证被测成分提取完全，实验中考察
了超声提取 20分钟、30分钟和 40分钟不同超声提取时间对
提取效率的影响，结果见表 5。
表6提取效率考察表
从表中数据可见，超声处理 20分钟的含量较低，超声处
理 30分钟和 40分钟桅子苷的含量基本一致，故超声提取时
间定为 30分钟。
3.2对流动相的选择
参照《中国药典》2005年版一部“桅子”含量测定项下桅子
苷的测定方法，以乙腈—水（15∶85）为流动相进行流动相条件
摸索，结果供试品色谱中的桅子苷的分离度较差。后将流动相
改为乙腈—水（9∶91）进行摸索，结果供试品色谱中的桅子苷具
有较好的分离度，理论板数较高，并具较适宜的保留时间，故
作为检测流动相。
3.3测定方法选择
本文采用 HPLC法测定乌兰牧仁汤中桅子苷的含量，方法
简便、结果准确、重现性好，建议用于乌兰牧仁汤的质量控制。
参考文献
[1]国家药典委员会，《中国药典》一部[M].化学工业出版社，
2005年.
[2] 内蒙古自治区食品药品监督管理局，《内蒙古蒙药制剂规
范》第一册[M].内蒙古人民出版社，2007年.
序号
样品量
（g）
供试品含
量（mg）
对照品加
入量（mg）
测得总
量（mg）
回收率
（%）
平均回
收率（%）
RSD
（%）
1 0.2503 1.1298 0.9428 2.111 104.1
103.47 0.62
2 0.2502 1.1294 0.9428 2.110 104.0
3 0.2498 1.1276 0.9428 2.096 102.7
4 0.2498 1.1276 0.9428 2.096 102.7
5 0.2501 1.1289 0.9428 2.109 103.9
6 0.2500 1.1285 0.9428 2.103 103.4
批号
取样量
（g）
测得峰面积
值
含量
（mg·g-1）
平均含量
（mg·g-1）
相对偏差
（%）
1
0.3996 1083571 4.482
4.497 0.33
0.3997 1091320 4.513
2
0.3996 1044523 4.320
4.344 0.55
0.3998 1056444 4.368
3
0.4001 1083822 4.477
4.476 0.02
0.4002 1083655 4.476
模拟样
0.3997 703124 2.908
2.925 0.58
0.3999 712078 2.943
超声时间 20分钟 30分钟 40分钟
桅子苷的含量（mg/g） 4.082 4.508 4.526
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