全 文 ：网络出版时间:2014 － 1 － 17 16:22 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． Ｒ． 20140117． 1622． 035． html
醋制降低京大戟细胞毒性部位对小鼠肝脏氧化损伤机制研究
曹雨诞，陈海鹰，张 丽，丁安伟
(南京中医药大学，江苏省方剂高技术研究重点实验室，江苏 南京 210046)
Vinegar processing attenuation the oxidative injury
in mice livers caused by cytotoxic fraction of Eu-
phorbia Pekinensis Ｒadix
CAO Yu-dan，CHEN Hai-ying，ZHANG Li，DING
An-wei
(Jiangsu Key Laboratory for High Technology Ｒesearch of Tradi-
tional Chinese Medicine Formulae，Nanjing University of Chinese
Medicine，Nanjing 210046，China)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2014． 02． 035
文献标志码:A 文章编号:1001 － 1978(2014)02 － 0295 － 02
中国图书分类号:Ｒ-332;Ｒ284． 1;Ｒ322． 47;Ｒ329． 24
关键词:京大戟;醋制;细胞毒性部位;肝毒性;氧化损伤;减
毒
Key words:Euphorbia Pekinensis Ｒadix;vinegar processing;
cytotoxicity parts;hepatotoxicity;oxidative injury;detoxication
收稿日期:2013 － 10 － 22，修回日期:2013 － 12 － 02
基金项目:江苏省普通高校研究生科研创新计划(No 2010_467) ;江
苏省高校自然科学研究面上项目(No 12KJB360004) ;江
苏省中医药局科技项目(No LZ13021)
作者简介:曹雨诞(1977 －) ，女，博士生，讲师，研究方向:中药炮制
与质量控制，Tel:025-85811519，E-mail:raindc@ 163． com;
丁安伟(1950 －) ，男，教授，博士生导师，通讯作者，Tel:
025-85811523
京大戟为大戟科植物大戟(Euphorbia pekinensis Ｒupr．)
的干燥根［1］，始载于《神农本草经》，列为下品，为中医临床
常用的峻下逐水药。其性寒，味苦，有毒。由于其生品毒性
较大，故采用醋制法降低京大戟的毒性，缓和其泻下作用［2］。
本课题组前期实验已经证实京大戟的细胞毒性部位为石油
醚、乙酸乙酯部位［3］，但有关醋制降低京大戟毒性作用的物
质基础和作用机制尚缺乏明确的揭示。因此，本实验拟采用
整体动物模型，通过多次给予小鼠京大戟生品和醋品细胞毒
性部位提取物，比较醋制前后对小鼠的肝组织形态和氧化损
伤的影响，初步探讨醋制降低京大戟对小鼠肝毒性的作用机
制，以期为进一步研究京大戟醋制减毒的物质基础及作用机
制提供依据。
1 仪器与材料
1． 1 动物 ICＲ小鼠 70 只，♀♂各半，体质量 18 ～ 22 g，购
自浙江省实验动物中心，合格证号:SCXK (浙)2008 － 0033。
1． 2 药物 京大戟饮片购于安徽省亳州市药材总公司，经
南京中医药大学乐巍副教授鉴定为大戟科植物大戟 Euphor-
bia pekinensis Ｒupr．的块根。京大戟生品:取净京大戟饮片 2
kg，打粉;京大戟醋品:取净京大戟饮片 2 kg，用米醋 600 g闷
润，加水稀释至3 000 ml，继续闷润，文火煮沸至醋吸净，取
出，室温晾干，40 ℃减压干燥，打粉。
将京大戟生品和醋品粗粉(过 2 号筛)以 6 倍量乙醇回
流提取 3 次，回收乙醇提取液，得到京大戟生、醋品醇提浸膏
(得率分别为 13. 65%和 15. 64%) ，醇提浸膏用水悬浮，悬浮
物依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到京大戟生、醋品石油醚
部位和乙酸乙酯部位混合浸膏(得率分别为 10. 12% 和
9. 01%)。临用前，用 0. 5%的 CMC-Na 溶液和食用油(9 ∶
1)分别配成所需浓度的药液。
1． 3 试剂 谷丙转氨酶(ALT)测定试剂盒、谷草转氨酶
(AST)测定试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒、BCA 蛋
白测定试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、微量丙二醛
(MDA)测定试剂盒、微量还原型谷胱甘肽(GSH)测定试剂
盒，购自南京建成生物工程研究所。
1． 4 仪器 TP1020 自动脱水机、ＲM2135 型石蜡切片机、
DM1000 光学显微镜(均为德国 LEICA 公司) ，CS-VI 型摊片
烤片机(湖北孝感宏业医用仪器有限公司) ，Tissue-Tek TEL
组织包埋机(日本 SAKUＲA 公司) ，powerwave X340 全波长
酶标仪(美国 Bio-Tek 公司) ，AY220 电子分析天平(日本岛
津) ，TGL-16M高速台式冷冻离心机(长沙湘仪离心机仪器
有限公司)。
2 方法
2． 1 动物分组 小鼠按体重随机分为 7 组，即空白对照组，
京大戟生品细胞毒性部位高、中、低剂量组，京大戟醋品细胞
毒性部位高、中、低剂量组，每组 10 只。实验动物饲养于室
温、通风的清洁级动物室中，自由摄食饮水，适应性饲养 3 d。
2． 2 剂量设计 按照人临床用量的 6、4、2 倍，并结合本课
题组前期预试结果，本实验京大戟生品和醋品高、中、低剂量
组分别灌胃给予 60、40、20 mg·g －1，空白对照组灌胃等体积
的 0． 5% CMC-Na溶液和食用油(9 ∶ 1) ，每日两次，连续灌
胃 6 d。
2． 3 肝功能指标测定 末次给药后，禁食 16 h，不禁水，小
鼠称重，摘眼球取血，待血清析出后，3 500 r·min －1，10 min，
分离血清，按照试剂盒说明书，进行 ALT、AST、LDH 活性的
测定。
2． 4 肝脏氧化损伤指标测定 称取 0. 5 g 肝组织，加入预
冷的 0. 9% 生理盐水，冰浴匀浆，制成 10% 肝组织匀浆，
3 500 r·min －1，10 min，吸取上清，用 BCA法测定蛋白含量，
按照试剂盒说明书测定 SOD活性、MDA含量、GSH含量。
2． 5 统计学处理 实验数据采用 SPSS 17. 0 软件进行统计
·592·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2014 Feb;30(2) :295 ～ 6
Tab 1 Effects of Euphorbia Pekinensis before and after processed with vinegar on the activities
of ALT，AST，LDH on liver function and the levels of SOD，GSH and MDA in liver tissue(珋x ± s，n = 10)
Group
ALT /U·
L －1
AST /U·
L －1
LDH /U·
L －1
MDA /
μmol·g － 1 Pro
GSH /mg·
g － 1 Pro
SOD /U·
mg －1 Pro
Control 8． 182 ± 0． 377 8． 910 ± 2． 404 11860 ± 599 0． 220 ± 0． 137 0． 828 ± 0． 072 15． 25 ± 0． 245
Crude 20 mg·g － 1 16． 16 ± 1． 267＊＊ 22． 24 ± 3． 036＊＊ 15509 ± 1126* 1． 284 ± 0． 351＊＊ 0． 326 ± 0． 064＊＊ 8． 371 ± 0． 919＊＊
40 mg·g － 1 20． 63 ± 0． 743＊＊ 31． 66 ± 2． 229＊＊ 18667 ± 978＊＊ 1． 612 ± 0． 349＊＊ 0． 238 ± 0． 023＊＊ 4． 221 ± 0． 858＊＊
60 mg·g － 1 27． 61 ± 1． 139＊＊ 45． 69 ± 2． 438＊＊ 22456 ± 851＊＊ 1． 955 ± 0． 326＊＊ 0． 194 ± 0． 016＊＊ 2． 073 ± 0． 933＊＊
Vinegar 20 mg·g － 1 11． 97 ± 0． 911# 12． 42 ± 1． 374# 12982 ± 677# 0． 635 ± 0． 145# 0． 561 ± 0． 093# 11． 21 ± 0． 608##
40 mg·g － 1 15． 70 ± 0． 569## 20． 00 ± 2． 489## 15053 ± 1671# 0． 969 ± 0． 305# 0． 408 ± 0． 040## 8． 037 ± 1． 078##
60 mg·g － 1 19． 57 ± 1． 900## 34． 44 ± 1． 124## 19123 ± 790## 1． 193 ± 0． 334# 0． 322 ± 0． 014## 3． 862 ± 0． 588##
* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01 vs control;#P ＜ 0. 05，##P ＜ 0. 01 vs Crude
分析，各组定量检测数据以 珋x ± s表示，组间比较采用 LSD检
验。
3 结果
3． 1 一般情况观察 空白对照组小鼠未见明显异常，京大
戟生品和醋品给药组小鼠均表现出少食、少动、精神不佳、毛
发无光泽、下腹肿胀、体重降低等症状，并随给药剂量增加而
症状加重。
3． 2 京大戟醋制前后对小鼠肝功能的影响 与空白对照组
比较，60、40、20 mg·g －1京大戟生品均明显升高小鼠血清中
ALT、AST、LDH活力(P ＜ 0. 05) ，且呈一定的剂量相关性;与
生品各剂量组比较，醋品各浓度组可明显降低小鼠血清中
ALT、AST、LDH活力(P ＜ 0. 05) ，呈一定的剂量相关性，见
Tab 1。
3． 3 京大戟醋制前后对小鼠肝脏氧化损伤指标的影响 与
空白对照组比较，60、40、20 mg·g －1京大戟生品可明显降低
小鼠肝脏中 SOD活性和 GSH 含量(P ＜ 0. 01) ，增加小鼠肝
脏中 MDA含量(P ＜ 0. 05) ，且呈一定的剂量相关性;与生品
各浓度组比较，醋品各剂量组可明显提高小鼠肝脏中 SOD
活性和 GSH含量(P ＜ 0. 01) ，降低小鼠肝脏中 MDA 含量(P
＜ 0. 05) ，且呈一定的剂量相关性，见 Tab 1。
4 讨论
中药致肝毒性损伤时，可使血中 ALT、AST 活性升高［4］;
LDH是一种糖酵解酶，广泛存在于人体各组织器官中，LDH
的释放是细胞膜受损的敏感指标之一［5］，因此 ALT、AST 和
LDH可作为评价肝损伤程度的指标［6］。氧化损伤机制是引
起肝损伤的主要机制［7］，主要变化为丙二醛(MDA)含量升
高，超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量下降［8］，因
此 MDA 、SOD和 GSH可作为肝毒性氧化损伤程度的指标。
本实验研究结果显示，与空白对照组相比，连续 6 d给予
小鼠不同剂量的京大戟细胞毒性部位后，小鼠血清中 ALT、
AST和 LDH活性明显增高，且随给药剂量增加而增高，呈现
一定的“量 － 毒”关系。小鼠肝脏中 SOD 活性明显下降，
GSH含量明显降低，MDA含量明显增加。该结果提示京大戟
细胞毒性部位致小鼠肝损伤途径可能与氧化损伤有关。
与京大戟生品组相比，连续 6 d 给予小鼠不同剂量的京
大戟醋品细胞毒性部位后，肝功能损伤指标明显降低，氧化
损伤指标减轻，这个结果与前期的京大戟细胞毒性部位对人
正常肝细胞 LO2 毒性研究的结果相符［3］。上述结果提示醋
制可明显降低京大戟肝毒性，其可能机制为通过降低京大戟
对肝细胞膜通透性的影响及减轻氧化损伤而实现，这为进一
步阐明京大戟醋制减毒的物质基础及作用机制提供了的一
定依据。
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