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Laboratory culture of Tetraselmis strains isolated from the coasts of China

我国沿海四爿藻的室内培养



全 文 :应 用 生 态 学 报    年 ! 月 第 !∀ 卷 第 ! 期
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我国沿海四月藻的室 内培养 关
欧阳叶新 罗立明 胡鸿钧“ 张成武 李夜光
2中国科学院武汉植物研究所武汉植物园, 武汉 ∀   9∀3
【摘要】 在水产养殖中, 四月藻是一种重要的饵料资源 : 从我国沿海2包括广东 、浙江 、 山东等省 3采集到的
海洋单细胞绿藻四引藻 , 用毛细管法挑取进行单种培养 , 然后在固体培养基中稀释划线分离得到无菌纯培
养物 : 利用改良的 4 ;<= =>? ≅ Α , Β7 Χ6? 24 ;<= => ?≅ /3 培养基 、 海洋 Δ 号培养基和改良的海洋 Δ 号培养基对四 月
藻进行了实验室培养 : 结果发现 , 改良的海洋班号培养基中四月藻的生长速率最快 , 最适 Ε∃ 范围为 9 : 
一 Φ :  , 加人维生素 Γ!  2! 陷 · %) 一 ‘3 , 也可以适当增加四 月藻的生长速率 , 这种改良的海洋! 号培养基配
制简单 , 适合于水产养殖中四月藻的规模生产 ,
关键词 绿藻 四月藻 无菌纯培养
文章编号 !  ! 一 Η  2   3!  一 ! 9  ! 一  ∀ 中图分类号 ΙΗ ∀ Η :   ϑ 文献标识码 −
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! 引 言
在水产养殖中 , 海洋和淡水藻类资源 日显其重
要性 , 已有许多微藻在水产养殖 中得到 了广泛应
用仁’, ’! : 水产养殖中的微藻要么是 自然居群中的浮
游生物 , 要么是营养价值高的单种藻类 : 单种藻类的
无菌纯培养物的利用 , 可以减少一些病原体对水产
养殖 中培养的水产动物的危害〔‘, ’! : 四 月藻 2Ο6 Ψ
7?> Π6= Δ <Π 3是一种具有 ∀ 根鞭毛的单细胞真核绿藻 ,
多为海生 , 也有淡水类型〔“⊥ , 能进行放氧光合作用 ,
是具有重要经济价值的贝类和鱼虾类养殖的主要饵
料_ , ’, ‘, 〕: 目前人工培养四月藻 、生产水产养殖饵
料受到广泛重视 , 国外已有其室内培养和大规模培
养报道 _Φ, “ 一 ’∀ ⎯ , 国内则报道不多 : 而且四 月藻的培
养基成分大多较为复杂 , 配制过程烦琐 , 导致培养饵
料成本较高_ ! : 为了了解我国四 月藻的资源 , 为水
产养殖提供饵料信息 , 近年来我们从我国沿海地 区
2广东、 浙 江 、 山东等 地 3采集到一 些 四 月藻品
系%’α, ‘9 ⎯ , 并在实验室培养成功 : 经毛细管法分离单
种 , 再通过平板稀释划线法 , 获得了四 月藻无菌纯
培养物 : 利用改良的 4 ; <==> ? ≅ Α , Β 7Χ 6 8 24 ; <一=> ? ≅ /3
培养基 、海洋 ! 号培养基和改良的海洋 班号培养基 ,
对四月藻进行 了实验室培养实验 , 寻找到一种配制
简单的培养基 , 可能适合于水产养殖中四 月藻的规
模生产 :
 材料与方法
: ! 试验材料
试验所用海洋单细胞四 月藻材料采 自我国沿海地区 2包
括广东 、浙江 、山东等省 3〔‘“一 ‘, =, 具体取样地点见表 ! :
 :  四 月藻的单种分离与培养
采用毛细管法分离纯化藻种 , 置于 ., ∃ 一 !ϑ 一4 型恒温
光照培养箱中培养 : 培养温度为   土  ℃ , 持续光照培养 , 光
强     一 ∀   .; Ρ , 摇床转速为 一ΤΛ ? · Δ <Θ 一 ! :
 : 培养基选择
改良的 4 ; <==> ?≅ Α , Β7Χ6 ? 24 ; <==> ?≅ /3培养基和海洋班
β 国家自然科学基金重大项目2 Η ΦΗ Η ∀  3 和中国科学院武汉植物研
究所所长基金资助项目:
“ 通讯联系人   ! 一 !  一  Η 收稿 ,     一  ∀ 一 ! 接受 :
! 9 应 用 生 态 学 报 !∀ 卷
表 ! 试验所用的四月燕品系
Ο> Κ =6 ! . <Π7 Λ ? 不叻叮“加公 别 Δ 毖冶 ; Π6≅ <Θ 7Χ=Π %Θ ς 6Π 7<沙7<Λ Θ
种名 培养品系 取样地点脚 : 漏、 、哪⊥<叭 ‘妞袱甩劝泌耐 沁忍痴公山山χ诩 山东省育岛市仓迅公园、潮间带、岩坑Ο : 口诫瓜丽台 Ο : 丽却励。Υ =初 山东省脊岛市石老人、潮间带、岩坑Ο Ξ 心曲顽刀 Ο : 入奋山碰: Υ闭 浙江省象山县渔山岛、大沙湾
Ο : δ Ο : δ 硼阴礴 浙江省象山县渔山岛:ε)、岛不脚咧吻涵 子脚心滋嘴俐自姗ϑ 广东省湛江市海近沙滩土坑Ο : 丽枷袖 , : Ο: ‘洲!耐沐ς>? · 动山俪 广东省珠海市ΜΧ吐面二 铂初α 海近沙滩土坑
号培养基参照文献〔‘, ‘ ⎯方法 , 改良的海洋 ! 号培养基配方
为 8  :  Η · . 一 ! ] &几 ,  :   Η · . 一 ! ] Τ∃0 ∗∀ ,  :   Η · . 一 !
Ζ Σ(∗ 心: 9氏∗ , 土壤浸出液 、过滤海水和少量人体或动物尿
液 , 添加或不添加维生素 Γ!  2! 四 · . 一 ‘3 : 改良的海洋 ! 号
培养基 Ε ∃ 值变化用 ! :  Δ Λ =· . 一 ‘∃ #% 或 ! :  Δ Λ一. 一 ’& >  ∃
进行调节 :
 : ∀ 四月藻的无菌纯培养
在含改良的海洋 Δ 号培养基固体平板上 , 将单种分离藻
种采用稀释划线法 , 经过多次划线、继代培养 : 从中得到无菌
纯培养物 :
 : ϑ 相对生长速率的测定
将预培养于改良的海洋 ! 号培养基中生长良好的 四 月
藻 , 接种到上述液体培养基 中, 接种密度为 ! : 一 ! : ϑ Ρ !  ∀
2Δ =一 ‘3 : 取从接种开始连续 Π ≅ 的四月藻培养物 , 用血细胞
计数法每天测定 ! 次细胞密度 : 根据公式 ] 2≅< ς<Π <Λ ΘΠ · ≅ 一 ! 3
φ ΝΛ ΣΤ 2& =ε &Λ 3ε 27 ! 一 7Λ 3计算其相对生长速率2] 3或每天的
分裂次数「‘∀〕: 式中, 7 。 指起始培养时间2≅3 , 7 = 指最终培养时
间2≅3 , & = 和 &Λ 分别代表在 7 γ 和 7 。 时间细胞培养物的密
度 : 每次测定从平行培养的 ∀ 瓶培养物中测定的生长速率计
算出平均生长速率 :
:  四月藻在不同培养基中的生长速率
测定了 α 个品系的四 月藻在 Ζ 4 Ζ 、 Ζ Δ 和 Ζ
Δ Ζ 培养基中的平均生长速率和标准误差 , 结果
2图  3表明 , 尽管不同 品系在 种培养基中生长速
率变化幅度有差异 , 但这 α 个品系的四月藻都表现
出相同的生长变化趋势 , 即在 Ζ = Ζ 培养基中的
生长速率最快 , Ζ Δ 培养基中的生长速率其次 , 而在
Ζ4 Ζ 培养基中生长最慢 : 其中, 在 Ζ Δ Ζ 培养基中
的生长速率又以 Ο : χ ∃ ! 品系的生长速率最快 , ]
值可达 ! :  Η9 2( 1 φ  :  ! !3 : 由此看来 , 每种四月藻
在 种不同培养基中的生长速率差异较为明显 20
η  : ϑ 3 : 因此 Ζ Δ Ζ 培养基是一种较好的培养
基 , 普遍适合于不同种或不同品系的四月藻的培养 :
Ο : χ ∃ α
Ο : χ ∃ ϑ
Ο : χ ∃ ∀
Ο χ ∃ ∗
Ο : χ ∃ 
Ο : χ ∃ !
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戳撇麟瓣揣麟默川
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一。     ∀  石  名 !  ! 生长速率 4 ?Λ Υ7 Χ ?> 76 21 <ι< Π<Λ Θ Π ·图  四月藻在 种不同培养基中的生长速率
结果与分析
: !
图 !
四月藻的无菌纯培养
单种培养后 , 经稀释划线法得到的无菌纯培养
四月藻在固体 Ζ = Ζ 培养基中的生长2示无菌纯培养 3
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物见图 ! : 从 图 ! 可 以看出 , 每个品系均得到单藻
落 : 从平板上挑取单藻落 , 可以转接到液体培养基中
进行无菌培养 :
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! 培养基 Ζ Λ≅ <Ν<6 ≅ Ζ > ? <Θ 6 Δ Δ 6 ≅ <; Δ : 平均值 士标准差 Ζ 6 > Θ 土 (1 #叹Θ φ ∀ 3 : 下同 Ο Χ 6 Π> Δ 6 Κ 6=Λ Υ :
: 维生素 Γ! 对四月藻生长的影响
通常 , 维生素 Γ! 能促进海洋微藻的生长 : 我们
选择在 Ζ = Ζ 培养基中培养 Υ ∃  ! 、   、  、  ∀ 、  ϑ
和  α 号品系 , 以不加维生素 Γ! 作为对照 , 检测了加
人维生素 Γ !后对四月藻生长的影响 : 以细胞数作纵
坐标对培养时 间作生长曲线的结果 2图 3 表明 , 无
论是否加入维生素 Γ ,  , 各 品系生长趋势变化不大 ,
均在第 9 一 Π ≅ 达到最大细胞数 : 从图 可以看出 ,
Ζ <= Ζ 培养基中补加维生素 Γ!  对四月藻的生长
有一些促进作用 :
: ∀ Ε∃ 值对四月藻生长的影响
配制培养基较为关键 的因子就是 Ε∃ 值 , 为了
确定该培养基的最适 Ε∃ 值, 使之适合四月藻的最
佳生长 , 对 Ζ Δ Ζ 培养基的 Ε ∃ 值进行了梯度检测
2图 ∀3 : 结果表明 , Ε∃ 9 :  一 Φ :  均可满足四 月藻
2Ο : χ ∃ ∗% 一  α 3的正常生长需要 , 但以 Ε∃ 9 : ϑ 为
最佳 :
!  期 欧阳叶新等 8我国沿海四 月藻的室内培养 ! 9
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∃ 讨 论
∃ 6 ) 四月藻藻种的分离和无菌纯培养
水产养殖中的微藻饵料采用单种藻类无菌纯培
养物作为饵料 , 可以减少一些病原体引起水产养殖
中培养的水产动物危害Θ ’, ’Ρ , 因而采用单种藻类无
菌纯培养物作为饵料 , 己成 为发展趋势 6 四月藻在
水产养殖中已经成为一种重要的饵料资源 ,“Ρ 6 利用
毛细管分离法分离得到的四 月藻无菌纯培养物可以
满足这种需求 6 另外 , 近来研究发现 , 四月藻的细胞
骨架成分易于分离 Θ ’。〕, 在进化上位置特殊〔Χ〕, 大规
模养殖四月藻还 可以生产生物气体燃料 Ε 甲烷 ΓΘ ∃〕,
因此藻种的无菌纯培养物的成功分离 , 也将为随后
进行藻类系统演化研究及细胞生物学等基础研究提
供了较好的实验材料 , 为进一步扩大四月藻资源利
用范围奠定了基础 6
∃ 6 ( 大规模培养四月藻的培养基配制
四月藻在水产养殖中潜在 的经济价值Θ(Σ 促使
我们思考如何更好地利用这一资源 6 目前 , 微藻的高
效率生产没有引起足够的重视 , 缺乏行之有效的方
# ( ∃ < ? # ( ∃ < ?
培养时ΚΝΡ + 玉恤。 ,0 / + ΕΦ Γ
图 ∃ Τ 5 值对四月藻生长的影响
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44− .巴 / 比  Μ Φ + 4 Υ= Μ , 0Μ , =  . 80& Ν , − , ( # ℃ 6
法和手段解决这一问题 , 应主要从分离单藻种及优
化其培养基配方两方面着手考虑 6 通常 , 大规模人工
生产微藻饵料的培养费用较高 , 主要在于培养基配
制过 程 烦琐 , 所需化 学 试 剂较多 而 导致 成本 较
高【’Ρ 6 因此 , 研制一种配制方便 、价格低廉的四 月藻
培养基 , 将会大大增加四 月藻作为饵料的经济价
值 6 迄今 , 文献报道的海洋四月藻培养基通常需要加
人维生素 Η ς: 、许多化学试剂 Κ‘’一 ” , 而且还需要制
备海泥 , 规模化生产成本较高 , 过程烦琐 , 本研究利
用土壤浸出液和人或动物尿液 , 使四 月藻培养基配
制成本大大降低 、制备过程更为简化 6 这种培养基可
能适合于水产养殖 中四月藻的规模化生产 , 为在水
产养殖方面的利用提供了可行的途径 6
参考文献
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作者简介 欧阳叶新 , ) Χ < ∀ 年生 , 男 , 湖北人 , 博士 , 现从事藻类学遗传学研究 , 发表论文 ? 篇 6 ϑ 一/ − : = Ξ−Μ & ι Λ− β− ·
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