全 文 ：第３５卷 第４期
２０１６年　７月
华　中　农　业　大　学　学　报
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｕａｚｈｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｖｏｌ．３５　Ｎｏ．４
Ｊｕｌｙ　２０１６，１４～１９
收稿日期：２０１５－０７－２３
基金项目：农业部公益性行业科研专项（２０１２０３０４７）
李　晶，硕士研究生．研究方向：果树逆境生理与分子生物学．Ｅ－ｍａｉｌ：６３５３８９３１＠ｑｑ．ｃｏｍ
通信作者：刘继红，博士，教授．研究方向：果树逆境生理与分子生物学．Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｊｉｈｏｎｇ＠ｍａｉｌ．ｈｚａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
君迁子休眠芽及叶片离体培养体系优化及植株再生
李　晶　罗玉洁　张青林　罗正荣　刘继红
华中农业大学园艺林学学院／园艺植物生物学教育部重点实验室，武汉４３００７０
摘要　以君迁子（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ　ｌｏｔｕｓ　Ｌｉｎｎ．）休眠芽和叶片为外植体，研究基础培养基种类和外植体基因型对休
眠芽初代培养的影响，比较叶片放置方式、ＴＤＺ浓度、ＺＴ与ＴＤＺ不同浓度组合及暗培养时间对叶片愈伤组织形
成和不定芽再生的影响；然后对再生芽进行生根。结果表明：君迁子休眠芽初代培养中，ＤＫＷ 培养基最适合其
生长发育，休眠芽生长势最佳；初代培养中，不同基因型的外植体在ＤＫＷ 培养基中生长势基本相同，说明外植
体基因型对其初代培养没有影响，但对继代培养影响较大。叶片下表面朝上放置在 ＭＳ＋ＺＴ　０．１ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ
２．０ｍｇ／Ｌ中暗培养２０ｄ，愈伤组织形成率达１００％，在（１／２Ｎ）ＭＳ＋２．２００ｍｇ／Ｌ　ＴＤＺ上愈伤组织形成率为
８１．４％；叶片下表面朝上放置在 ＭＳ＋ＺＴ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ　２．０ｍｇ／Ｌ中暗培养０ｄ，不定芽再生率和外植体平均
不定芽数最高，分别为３４．４％和２．１±０．３。组培苗在１／２ＭＳ（１／２Ｎ）＋ＩＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ中培养５ｄ后，转入１／２ＭＳ
（１／２Ｎ）＋１ｇ／Ｌ活性炭培养２０ｄ，生根率为５８．１４％，平均根数为４条。
关键词　君迁子；叶片；愈伤组织；不定芽；生根；植株再生
中图分类号　Ｓ　６６５．３　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－２４２１（２０１６）０４－００１４－０６
　　君迁子（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ　ｌｏｔｕｓ　Ｌｉｎｎ．）是柿科（Ｅｂｅｎ－
ａｃｅａｅ）柿属（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ　Ｌｉｎｎ．）植物，又名黑枣、牛奶
枣、软枣等。目前，山东、河北、河南、山西、陕西分布
较多，现在南方也有引种。君迁子喜光，耐寒，耐瘠
薄，不耐水湿，浅根系，但根系发达，生长较快，寿命
较长。由于其抗逆性强，君迁子在生产上最广泛的
用途是做柿树砧木［１］。作为柿树的主要砧木，君迁
子苗木的需求量也在增加，并且对抗性的要求也在
增强。
君迁子与柿是同属植物，亲缘关系很近，而且是
柿的主要砧木。然而，君迁子也存在一些问题，如抗
旱性较差［２］。开展抗性遗传改良是君迁子得以更广
泛应用的前提，其关键是有较好的再生体系。进行
转基因技术研究的前提是建立高效稳定的遗传转化
受体系统。此前对于君迁子组织培养的研究甚少，
尚未见关于君迁子最适培养条件的介绍［３］。但有一
些学者进行过甜柿组织培养的研究，马俊莲等［４］发
现甜柿上西早生叶片适合在低矿物质元素，尤其是
较低氮素含量的培养基中增殖与生长。目前，国内
还未见关于君迁子遗传转化的研究报道，在一定程
度上限制了使用基因工程技术对君迁子进行抗逆性
改良的研究。基于此，本研究参考甜柿组培条件，以
君迁子休眠芽为外植体，比较组培过程中的各种因
素（如基础培养基、外植体基因型等），拟筛选出最适
君迁子生长发育与再生的培养条件，建立君迁子组
织培养体系，为后续遗传转化研究提供试验材料，以
期为君迁子基因转化和砧木性状改良奠定基础。
１　材料与方法
１．１　材料来源
在华中农业大学柿基因库基因型为Ｌ２和Ｌ３的
君迁子成年树上采集无病虫害、生长健壮、冬芽饱满
的休眠芽。
１．２　休眠芽初代培养基的筛选
配制３种培养基：（１／２Ｎ）ＭＳ和１／２ＭＳ＋蔗糖
３０ｇ／Ｌ＋琼脂７．５ｇ／Ｌ＋ ＰＶＰ　０．６ｇ／Ｌ ＋ＺＴ　０．５
ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ　０．０１ｍｇ／Ｌ（ｐＨ　５．８），ＤＫＷ＋蔗糖３０
ｇ／Ｌ＋琼脂６．０ｇ／Ｌ＋ ＰＶＰ　０．５ｇ／Ｌ＋ＺＴ　０．５
ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ　０．０１ｍｇ／Ｌ（ｐＨ　５．８）。取君迁子Ｌ２和
Ｌ３成年树上当年生无病虫害、生长健壮、冬芽饱满
DOI:10.13300/j.cnki.hnlkxb.2016.04.003
　第４期 李　晶 等：君迁子休眠芽及叶片离体培养体系优化及植株再生 　
的枝条，用自来水冲洗３～４遍，剪下顶芽、腋芽为外
植体；双蒸水洗３遍，浸入７５％乙醇３０ｓ后转入２％
ＮａＣｌＯ　１０ｍｉｎ，无菌水清洗５～６遍（带有振荡）；剥
去芽外鳞片，留茎尖约１．５ｍｍ（保留２～３片叶原
基），接种到培养基上，每种培养基上接种２５个休眠
芽，２０ｄ后观察结果，重复２次；培养室温度２５±
２℃，光照时间１６ｈ／ｄ，光强１　５００～２　０００ｌｘ的培养
条件下进行无菌培养。
１．３　叶片培养
继代４次的君迁子Ｌ３组培苗，在无菌条件下，
留顶端３～４片叶，取下面所有叶片，均横切为
４ｍｍ×４ｍｍ左右。分别接种于（１／２Ｎ）ＭＳ＋蔗糖
２０ｇ／Ｌ＋ 琼脂 ７．５ｇ／Ｌ＋ＰＶＰ　０．６ｇ／Ｌ＋ＴＤＺ
（０．０２２、０．２２０、２．２００ｍｇ／Ｌ）（ｐＨ　５．８）。每种质量浓
度接种约４８片叶，分２组，分别为上表面和下表面
接触培养基。暗培养２０ｄ，分析叶片愈伤组织形成
比例。
同样 大 小 的 叶 片 切 片 培 养 在 ＭＳ＋ 蔗 糖
３０ｇ／Ｌ＋琼脂７．５ｇ／Ｌ＋ ＰＶＰ　０．５ｇ／Ｌ（ｐＨ　５．８）的
培养基上，培养基中添加的激素质量浓度按正交设
计Ｌ９（３３）设置（表１）。每处理接种３２片，重复
２次。培养条件同本文“１．２”（除暗处理时间外）。
３０ｄ后更换同样质量浓度激素的培养基。４０ｄ后进
行数据统计，确定影响因素及处理水平。
表１　Ｌ９（３３）正交设计分析激素组合的作用
Ｔａｂｌｅ　１　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｏｒｍｏｎａｌ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｕｓｉｎｇ
Ｌ９（３３）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ
组合
Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ
ＺＴ／
（ｍｇ／Ｌ）
ＴＤＺ／
（ｍｇ／Ｌ）
暗培养时间／ｄ
Ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅ
ｉｎ　ｄａｒｋ
１　 ０．１　 ０．１　 ０
２　 ０．１　 １．０　 １０
３　 ０．１　 ２．０　 ２０
４　 １．０　 ０．１　 １０
５　 １．０　 １．０　 ２０
６　 １．０　 ２．０　 ０
７　 ２．０　 ０．１　 ２０
８　 ２．０　 １．０　 ０
９　 ２．０　 ２．０　 １０
１．４　生根培养
以再生芽为试材，在含蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂７．５
ｇ／Ｌ＋ＰＶＰ　０．５ｇ／Ｌ ＋ＺＴ　０．５ｍｇ／Ｌ ＋ＩＡＡ　０．０１
ｍｇ／Ｌ（ｐＨ　５．８）的（１／２Ｎ）ＭＳ培养基中继代培养，选
取４８株培养了３０ｄ长于２ｃｍ的君迁子有效新梢
试验。采用两步生根法，首先在含蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼
脂７．５ｇ／Ｌ＋ ＰＶＰ　０．５ｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ 的
１／２ＭＳ（１／２Ｎ）培养基中光照培养５ｄ，然后转入含
蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂７．５ｇ／Ｌ＋ＰＶＰ　０．５ｇ／Ｌ＋活性
炭１．０ｇ／Ｌ的１／２ＭＳ（１／２Ｎ）培养基中光照培养２０ｄ
后进行数据统计。
１．５　数据分析
愈伤组织形成率＝形成愈伤组织的叶片数／接
种叶片数×１００％；白色愈伤组织形成率＝形成白
色愈伤组织的叶片数／接种叶片数×１００％。不定
芽再生率＝产生再生芽的叶片数／接种叶片数×
１００％，叶片平均不定芽数＝再生芽总数／产生再
生芽的叶片数。采用ＳＰＳＳ统计分析软件进行方
差分析。
２　结果与分析
２．１　基础培养基种类对初代培养的影响
由图１可见，君迁子Ｌ２和Ｌ３休眠芽在ＤＫＷ、
（１／２Ｎ）ＭＳ、１／２ＭＳ　３种培养基中初代培养２０ｄ时，
ＤＫＷ 培养基的培养效果最好，（１／２Ｎ）ＭＳ次之，
１／２ＭＳ培养基中生长情况最差。休眠芽在 ＤＫＷ
培养基中长势好，生长快，叶展开幅度大，但叶片偏
黄。在（１／２Ｎ）ＭＳ培养基中叶抱紧，叶片较绿。用
１／２ＭＳ培养的休眠芽生长较慢，芽体变大，但未展
叶（图１Ａ、Ｂ）。
２．２　不同基因型对初代培养的影响
在同一种培养基中，君迁子Ｌ２和Ｌ３休眠芽初代
培养 ２０ｄ 时生长状况相似，无明显快慢区别
（图１Ｃ、Ｄ）。说明君迁子基因型不同，对其初代组
织培养没有影响。Ｌ２和Ｌ３组培苗在（１／２Ｎ）ＭＳ培
养基中继代培养 ３ 次时，Ｌ３生长情况优于 Ｌ２
（图１Ｅ、Ｆ），说明基因型对继代培养影响很大。
２．３　叶片放置方式对愈伤组织形成的影响
由表２可见，在（１／２Ｎ）ＭＳ培养基中将叶片下
表面朝上接种后，愈伤组织形成率９１．７％，明显高于
将其上表面朝上接种的７０．８％。说明叶片下表面朝
上培养效果明显优于上表面朝上放置。
表２　叶片放置方式对愈伤组织形成的影响
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｌｅａｆ　ｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄ．ｌｏｔｕｓ　Ｌ．
放置方式
Ｐｌａｃｅｍａｎｔ
愈伤组织形成率／％
Ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
上表面朝上
Ａｄａｘｉａｌ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｕｐｗａｒｄｓ
７０．８
下表面朝上
Ａｂａｘｉａｌ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｕｐｗａｒｄｓ
９１．７
５１
　　 华 中 农 业 大 学 学 报 第３５卷　
　Ａ－Ｂ：君迁子Ｌ２和Ｌ３的休眠芽分别在ＤＫＷ、（１／２Ｎ）ＭＳ、１／２ＭＳ培养基中初代培养２０ｄ，休眠芽生长势对比；Ｃ－Ｄ：君迁子Ｌ２和Ｌ３休
眠芽在（１／２Ｎ）ＭＳ培养基中初代培养２０ｄ，休眠芽生长势对比；Ｅ－Ｆ：君迁子Ｌ２与Ｌ３组培苗继代培养３次时，生长势对比；标尺＝０．５
ｃｍ。Ａ－Ｂ：Ｔｈｅ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｄａｔｅ　ｐｌｕｍ　Ｌ２ａｎｄ　Ｌ３ｄｏｒｍａｎｔ　ｂｕｄ　ｇｒｅｗ　２０ｄｉｎ　ＤＫＷ，（１／２Ｎ）ＭＳ，１／２ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍｓ；Ｃ－Ｄ：Ｔｈｅ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ
ｏｆ　ｄａｔｅ　ｐｌｕｍ　Ｌ２ａｎｄ　Ｌ３ｄｏｒｍａｎｔ　ｂｕｄ　ｇｒｅｗ　２０ｄｉｎ（１／２Ｎ）ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ；Ｅ－Ｆ：Ｔｈｅ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｄａｔｅ　ｐｌｕｍ　Ｌ２ａｎｄ　Ｌ３ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｏｒ
ｔｈｒｅｅ　ｔｉｍｅｓ　ｏｎ（１／２Ｎ）ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ．Ｂａｒｓ＝０．５ｃｍ．
图１　君迁子Ｌ２ 和Ｌ３ 休眠芽培养
Ｆｉｇ．１　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｄｏｒｍａｎｔ　ｂｕｄｓ　ｏｆ　Ｄ．ｌｏｔｕｓ　Ｌ．Ｌ２ａｎｄ　Ｌ３
２．４　不同质量浓度ＴＤＺ对愈伤组织形成的影响
由表３可见，ＴＤＺ对诱导愈伤组织形成效果良
好，但是绝大部分都褐化了。ＴＤＺ 质量浓度为
２．２００ｍｇ／Ｌ时，诱导愈伤形成率最高（８１．４％），同
时白色愈伤形成率也最高（３８．１％）。０．０２２ｍｇ／Ｌ
ＴＤＺ处理时，部分叶片已褐化死亡，其他２种质量
表３　不同质量浓度的ＴＤＺ对愈伤组织形成的影响
Ｔａｂｌｅ　３　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＴＤＺ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄ．ｌｏｔｕｓ　Ｌ．
组合
Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ
ＴＤＺ／（ｍｇ／Ｌ）
愈伤组织形成率／％
Ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
白色愈伤组织形成率／％
Ｗｈｉｔｅ　ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
１　 ０．０２２　 ６６．７　 ８．３
２　 ０．２２０　 ８１．３　 ２５．０
３　 ２．２００　 ８１．４　 ３８．１
浓度处理较少出现这一现象。
２．５　ＺＴ和ＴＤＺ组合和暗培养时间对不定芽再生的
影响
　　由表４可见，愈伤组织形成率都很高，但是大部
分愈伤都是褐色至黑色，最适合君迁子愈伤组织形
成的植物生长调节剂组合为ＺＴ　０．１ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ
２．０ｍｇ／Ｌ，暗培养２０ｄ，愈伤组织形成率达１００％，
且形成的愈伤组织均为白色（图２Ａ）。暗培养时间
的延长有助于愈伤组织的形成，据观察，暗培养２０ｄ
的叶片愈伤组织体积明显大于其他组合。最先长出
不定芽的组合是第６组ＺＴ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ　２．０
ｍｇ／Ｌ暗培养，在第２０天时就已长出２个不定芽（图
６１
　第４期 李　晶 等：君迁子休眠芽及叶片离体培养体系优化及植株再生 　
２Ｂ、Ｃ），说明光照对不定芽再生有促进作用。由表４
还可以看出，在第４０天时，形成不定芽数最多，不定
芽再生率和平均不定芽数分别达到３４．３８％和２．１±
０．３。ＴＤＺ质量浓度很低时不定芽再生率很低，甚
至完全不能再生，随着ＴＤＺ质量浓度的增加，愈伤
组织形成率和不定芽再生率有明显增高，说明
ＴＤＺ在诱导君迁子不定芽再生中起主要作用，辅
助使用１．０ｍｇ／Ｌ　ＺＴ即可。若要获取愈伤组织则
采取长时间暗培养，若要获取不定芽，直接光下培
养即可。
表４　不同质量浓度的ＺＴ和ＴＤＺ组合结合暗处理对不定芽再生的影响
Ｔａｂｌｅ　４　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＺＴ　ａｎｄ　ＴＤＺ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｄａｒｋｎｅｓｓ　ｏｎ　ｓｈｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄ．ｌｏｔｕｓ　Ｌ．
组合
Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ
ＺＴ／
（ｍｇ／Ｌ）
ＴＤＺ／
（ｍｇ／Ｌ）
暗培养时间／ｄ
Ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅ
ｉｎ　ｄａｒｋ
愈伤组织形成率／％
Ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
不定芽再生率／％
Ｓｈｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
平均不定芽数
Ｎｏ．ｏｆ　ｓｈｏｏｔｓ
ｐｅｒ　ｅｘｐｌａｎｔ
１　 ０．１　 ０．１　 ０　 ９０．６ａｂ　 ０．０ｂ
２　 ０．１　 １．０　 １０　 ９６．９ａ ２３．４ａｂ　 １．６±０．１ａｂ
３　 ０．１　 ２．０　 ２０　 １００．０ａ １７．２ａｂ　 １．８±０．４ａｂ
４　 １．０　 ０．１　 １０　 ９５．３ａ ０．０ｂ
５　 １．０　 １．０　 ２０　 ９０．６ａｂ　 １２．５ａｂ　 １．３±１．８ａｂ
６　 １．０　 ２．０　 ０　 ９６．９ａ ３４．４ａ ２．１±０．３ａ
７　 ２．０　 ０．１　 ２０　 ８１．３ｂ ４．７ｂ ０．５±０．７ａｂ
８　 ２．０　 １．０　 ０　 ９６．９ａ ７．８ｂ ２．１±０．２ａ
９　 ２．０　 ２．０　 １０　 ９５．３ａ １４．１ａｂ　 １．８±１．１ａｂ
　注：同列内相同字母表示用邓肯氏新复极差法在０．０５水平上检测差异不显著。Ｎｏｔｅ：Ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ａ　ｃｏｌｕｍｎ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ
ｔｈｅｙ　ａｒｅ　ｎｏｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ，ａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　Ｄｕｎｃａｎ’ｓ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｒａｎｇｅ　ｔｅｓｔ　ａｔ　Ｐ＝０．０５．
２．６　不同处理对君迁子组培苗生根的影响
生根处理２５ｄ后进行数据统计，发现５８．１４％
的不定芽生根成功，长出３～５条约３ｃｍ长的黑色
新根（图２Ｄ），平均根数为４条。
　Ａ：叶片切口形成愈伤组织（培养２０ｄ）；Ｂ：愈伤组织上形成不定芽（培养４０ｄ）；Ｃ：切下不定芽；Ｄ：组培苗生根。标尺＝０．５ｃｍ。
Ａ：Ｃａｌｕｓ　ｗａｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｆｒｏｍ　ｓｅｇｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ｌｅａｆ（ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｏｒ　２０ｄ）；Ｂ：Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｆｒｏｍ　ｃａｌｕｓ（ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｏｒ　４０ｄ）；
Ｃ：Ｃｕｔｔｈｅ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃａｌｕｓ；Ｄ：Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｐｌａｎｔ．Ｂａｒｓ＝０．５ｃｍ．
图２　君迁子叶片培养再生植株
Ｆｉｇ．２　Ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｆ　ｓｅｇｍｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｄ．ｌｏｔｕｓ　Ｌ．
３　讨　论
３．１　培养基的选择
ＭＳ培养基在木本植物组织培养中使用得最为
广泛，还有 ＷＰＭ、ＣＭ、ＳＨ、改良的Ｎｉｔｓｃｈ等基本培
养基，大多数使用改良过的 ＭＳ培养基［５］。刘晓娜
等［６］通过试验证实上西早生柿继代培养时在ＤＫＷ
培养基中丛生苗的生成量较多，组培苗的生长状态
好于（１／２Ｎ）ＭＳ培养基，是因为ＤＫＷ培养基中Ｎ、
Ｐ、Ｋ含量均高于（１／２Ｎ）ＭＳ；而 ＭＳ培养基中的 Ｎ
含量高于ＤＫＷ，所以在 ＭＳ培养基中的组培苗最
高。Ｋｏｃｈａｎｏｖá等［７］得出的结果也相似。刘恺［８］发
现富有柿和次郎柿在ＤＫＷ 培养基中增殖倍数和有
效新梢率均高于 ＭＳ和 ＷＰＭ培养基。有研究表明
培养阶段因培养目的不同，合适的培养基也不同［９］。
本研究中君迁子初代培养时，ＤＫＷ 培养基效果最
好，休眠芽展叶快，且生长较健壮；但是后续继代培
养中，使用ＤＫＷ培养基的组培苗茎段较长，叶茂盛
但呈黄绿色，叶畸形不平展；使用（１／２Ｎ）ＭＳ培养基
继代的组培苗生长矮壮，茎与叶的比例适中，分生出
７１
　　 华 中 农 业 大 学 学 报 第３５卷　
很多腋芽，苗底部常形成２～３个腋芽，腋芽增殖系
数高，叶片绿色较不平展；１／２ＭＳ培养效果则不佳，
休眠芽生长缓慢。本研究认为君迁子与大部分甜柿
相同，适合在低氮培养基中生长，但其他培养基成分
不可减少；ＤＫＷ 培养基适合君迁子茎段的增长，
（１／２Ｎ）ＭＳ培养基适合君迁子腋芽的增殖。
３．２基因型差异
不同基因型的柿树植物再生能力存在较大的差
异［１０－１２］。在本试验中，虽然初代培养君迁子 Ｌ２和
Ｌ３在生长势上没有很大的区别，但在后续继代中，
Ｌ３生长和繁殖能力明显高于Ｌ２：培养条件相同的君
迁子Ｌ２和Ｌ３，前者生长紧凑，茎干较少，腋芽不发
育，底部叶片将组培苗包裹，生长缓慢；后者则生长
势强，形成了许多腋芽，并且腋芽生长发育快，增殖
系数高。组培过程中还发现，Ｌ２休眠芽中内生菌较
多，在培养基表面形成粉色菌落。
３．３　叶片放置方式的影响
本研究观察到，近轴面朝上放置的叶片卷起，每
片叶仅２～３个支撑点与培养基接触；而远轴面朝上
放置的叶片虽四周切口卷起，但叶面大部分仍与培
养基接触。笔者认为由于气孔多存在于叶片下表
面，置于上面能更好地进行呼吸作用，对愈伤组织的
形成有促进作用；并且君迁子叶片培养一段时间后，
其卷曲方向为向下表面方向，下表面朝上放置与培
养基接触的面积更大，有利于其吸收营养。刘月英
等［１３］以磨盘柿为材料，对于接种方式的结论与本研
究截然相反。
３．４　植物生长调节剂的作用
ＴＤＺ是脲类细胞分裂素，并且是其中活性最强
的一种。已经有报道ＴＤＺ在木本植物的不定芽生
长中非常有效［１４］。在本研究中，ＴＤＺ处理能有效促
进君迁子不定芽再生，所以推荐使用，但由于其售价
较高，应配合适量ＺＴ使用。而且富有柿的不定芽
在添加 ＴＤＺ的培养基上生长不佳，但是转入添加
ＺＴ的培养基后就恢复生长并长出茎段［１５］。ＺＴ是
从玉米嫩籽中分离出的，是一种存在于高等植物中
的天然细胞分裂素，与ＴＤＺ配合使用，在组织培养
中有很好地促进愈伤组织生芽的作用［１６］。在几乎
所有的细胞分裂素中，玉米素在促进植物生长方面
比激动素更有效。
３．５　再生芽生根
２０世纪９０年代研究柿组织培养的多为国外学
者，他们的研究均表明柿存在生根难的问题。Ｆｕｋｕｉ
等［１７］对多种甜柿进行了生根试验，发现大多数都存
在生根困难的现象。Ｔｅｔｓｕｍｕｒａ等［１８］对富有、花御
进行生根培养时，发现这２个甜柿品种在培养初期
生根很困难；但继代多次之后再生根，生根率有明显
提升，即便如此，在培养７４代以后生根率也只能达
到６３％。但是，后来很多国内学者在多种柿生根试
验上都得到了较高的生根率。刘聪娟等［１９］对上西
早生、富有和次郎组培苗进行了生根试验，在
１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ　１．０ｍｇ／Ｌ 上培养
４０ｄ，生根率达到９０％以上。马俊莲等［２０］认为ＩＢＡ
的生根效果好于ＩＡＡ，在１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ
的培养基上，次郎和富有的生根率近７５％，平均不
定根数达３条以上。本研究中君迁子的生根率比较
高，延长培养时间，生根率会达到更高。君迁子适宜
在低氮的培养基中生根，并且激素处理时间不宜
过长。
参 考 文 献
［１］　宗亦臣，何燕，郑勇奇，等．君迁子天然群体表型变异研究［Ｊ］．
湖南林业科技，２０１３，４０（４）：１－６．
［２］　史胜青，孙晓光，王颖，等，水分胁迫对４树种幼苗叶水势和持
水力的影响［Ｊ］．河北农业大学学报，２００９，３２（６）：２４－２８．
［３］　谢启鑫，庄东红．油柿叶片离体再生体系的建立［Ｊ］．农业生物
技术科学，２００８，２４（８）：１３６－１３９．
［４］　马俊莲，刘晓娜，张子德．甜柿上西早生叶片不定芽再生的研究
［Ｊ］．中国农业科学，２００４，３７（１２）：２０１６－２０１８．
［５］　李青林，邹永田，刘广林，等．木本观赏植物组织培养技术［Ｊ］．
河北农业科学，２０１０，１４（６）：３８－４１．
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８１
　第４期 李　晶 等：君迁子休眠芽及叶片离体培养体系优化及植株再生 　
ｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅ　ｔｈｉｎ　ｃｅｌ　ｌａｙｅｒｓ　ｏｆ　ａｐｐｌｅ　ｌｅａｖｅｓ　ｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ
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ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｎｏｄｕｌｅ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｔｈｉｄｉａｚｕｒｏｎ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ｌｅａｆ　ｓｅｇｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｊａｐａｎｅｓｅ　ｐｅｒｓｉｍｍｏｎ （Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ　ｋａｋｉ
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ｅｎｃｅｓ　ｉｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｄ　Ｊａｐａｎｅｓｅ　ｐｅｒ－
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Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄａｔｅ　ｐｌｕｍ
（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ　ｌｏｔｕｓ　Ｌｉｎｎ．）ｄｏｒｍａｎｔ　ｂｕｄｓ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ
ＬＩ　Ｊｉｎｇ　ＬＵＯ　Ｙｕｊｉｅ　ＺＨＡＮＧ　Ｑｉｎｇｌｉｎ　ＬＵＯ　Ｚｈｅｎｇｒｏｎｇ　ＬＩＵ　Ｊｉｈｏｎｇ
Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，
Ｈｕａｚｈｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ　４３００７０，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｂａｓａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ａｎｄ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｄｏｒｍａｎｔ　ｂｕｄｓ　ｏｆ　ｄａｔｅ
ｐｌｕｍ （Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ　ｌｏｔｕｓ　Ｌｉｎｎ．）ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ＴＤＺ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，
ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｐｅｒｉｏｄ　ｕｎｄｅｒ　ｄａｒｋ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，
ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ＤＫＷ　ｗａｓ
ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｂａｓａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｄｏｒｍａｎｔ　ｂｕｄｓ，ａｓ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｂｙ　ｂｅｔｔｅｒ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｕｄｓ．
Ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ　ｈａｄ　ｎｏ　ｉｍｐａｃｔｓ　ｏｎ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｃｕｌｔｕｒｅ，ｂｕｔ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ　ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ．Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｓｅｇｍｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ａｄａｘｉａｌ　ｓｕｒｆａｃｅｓ　ｃｏｎｔａｃｔｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｎ　ＭＳ＋ＺＴ　０．１ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ　２．０ｍｇ／Ｌ　ｕｎｄｅｒ
ｄａｒｋｎｅｓｓ　ｆｏｒ　２０ｄｌｅｄ　ｔｏ　１００％ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｗａｓ　ｏｎｌｙ　８１．４％ｏｎ（１／２Ｎ）ＭＳ＋
２．２００ｍｇ／Ｌ　ＴＤＺ．Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｅａｆ　ｓｅｇｍｅｎｔｓ，ａｄａｘｉａｌ　ｓｕｒｆａｃｅｓ　ｃｏｎｔａｃｔｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍ，ｏｎ　ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎ－
ｔａｉｎｉｎｇ　ＺＴ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ　２．０ｍｇ／Ｌ，ｄａｒｋ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｆｏｒ　０ｄ，ｒｅｓｕｌｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　３４．４％ｏｆ　ｓｈｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａ－
ｔｉｏｎ，ｗｈｉｌｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｓｈｏｏｔｓ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｐｅｒ　ｅｘｐｌａｎｔ　ｗｅｒｅ　２．１±０．３．Ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ｏｎ　１／２ＭＳ
（１／２Ｎ）＋ＩＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ　ｆｏｒ　５ｄ，ｔｈｅｎ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｔｈｅｍ　ｏｎ　１／２ＭＳ（１／２Ｎ）＋１ｇ／Ｌ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃａｒｂｏｎ　ｆｏｒ
２０ｄ．Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｏｆ　ｄａｔｅ　ｐｌｕｍ　ｒｅａｃｈｅｄ　５８．１４％ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｒｏｏｔｓ　ｗａｓ　４．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ｄａｔｅ　ｐｌｕｍ （Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ　ｌｏｔｕｓ　Ｌｉｎｎ．）；ｌｅａｆ　ｓｅｇｍｅｎｔ；ｃａｌｕｓ；ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ；ｒｏｏｔｉｎｇ；
ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
（责任编辑：张志钰）
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