全 文 :基金项目:福建省自然科学基金项目(B0510012)
作者简介:李清禄 ,男 ,博士生导师 Tel:(0591)83789367 E-mail:lql3388@ 126.com
楮头红提取物的生物活性研究
李清禄 1 ,陈强 2 ,何海斌 1 ,王秀林 3 ,林茹 1 ,朱庆银3(1.福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室 ,福州 350002;2.
福建农林大学动物科技研究所 ,福州 350002;3.福建农林大学生命科学学院 ,福州 350002)
摘要:目的 研究楮头红的生物活性 , 寻找活性成分。方法 对楮头红的石油醚 、乙醚 、乙酸乙酯 、乙醇和水的粗提取物分别
进行抗小鼠肝损伤试验和体外抗氧化 、抑菌试验。结果 水提物具有抗小鼠肝脂质过氧化作用和抗肝损伤作用;乙醚 、乙酸
乙酯 、乙醇等 3个部位各具有不同程度的清除羟自由基和超氧离子自由基的作用及抑菌作用。结论 楮头红提取物具有清除
羟自由基 、清除超氧离子自由基 、抗小鼠肝脂质过氧化和抗小鼠肝损伤及抑菌作用。
关键词:楮头红;提取物;生物活性
中图分类号:R931 文献标识码:A 文章编号:1001-2494(2007)17-1292-04
StudyonBiologicalActivityofCrudePlantExtractsfromSarcopyramisnepalensisWal
LIQing-lu1 , CHENQiang2 , HEHai-bin1 , WANGXiu-lin3 , LINRu1 , ZHUQing-yin3(1.KeyLaboratoryofBiopesticide
andChemicalBiologyofMinistryofEducation, FujianAgricultureandForestryUniversity, Fuzhou350002, China;2.InstituteofAnimal
ScienceandTechnology, FujianAgricultureandForestryUniversity, Fuzhou350002, China;3.ColegeofLifeScience, FujianAgriculture
andForestryUniversity, Fuzhou350002, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE TostudythebiologicalactivityandactiveconstituentsofSarcopyramisnepalensisWal.METHODS
Theextractsofpetroleumether, ether, ethylacetate, ethanolandwaterfromtheS.nepalensisWalwholeplantwereusedtodetermine
theinvitroanti-oxidant, antibacterialandresistmiceliverinjury.RESULTS Theresultsshowedthatthewaterextractofthe
S.nepalensisWalwholeplantexhibitedmoderateantioxidationandliverprotectionactivitiesinmice;andtheether, ethylacetate, etha-
nolextractshavediferentgradeeffectofremovinghydroxylfreeradicalorexceedoxygenionfreeradicalactivitiesandmoderateanti-
bacterialactivity.CONCLUSION BiologicalassaysofS.nepalensisWallextractshaveshownmoderateactivitiesonremovinghy-
droxylfreeradicalorexceedoxygenionfreeradicalandbacteriostasis, andcouldresistmiceliveroxidationandliverinjury.
KEYWORDS:S.nepalensisWal;extract;biologicalactivity
楮 头 红 (Sarcopyramisnepalensis Wal,
S.nepalensisWal),又名肉穗草 、风鼓斗草(风柜斗
草),属于野牡丹科(Melastomaceae)中的肉穗草属
(SarcopyramisWal.)。主要分布于东南亚和我国的
四川 、云南 、湖北 、广西 、广东 、江西 、台湾 、福建等地 。
据 《中药大词典 》记载:楮头红全草可药用 ,具有清
热解毒 、清肝泻火之效 ,是治疗急性肝炎 、肺热咳嗽 、
蛇头疔 、无名肿毒 、胃肠炎等疾病的珍稀名贵中草
药 [ 1] 。对急性肝炎(甲肝 、乙肝急性期)疗效最佳 ,
对慢性肝炎及乙肝病毒携带者有效 ,在福建 、湖北等
民间广为使用 ,是一种极有价值的天然药用植物和
中草药资源 。对该植物的化学成分 、药理活性 、药效
关系等的研究目前尚未见报道 。开展对楮头红提取
物的生物活性研究 ,了解其含有的主要化学成分 、主
要活性物质 ,对指导临床用药提供科学依据 。
1 仪器与材料
1.1 仪器
国产 BS210S型电子天平 (北京塞多利斯);
UV/VIS7501紫外分光光度计 ,波长范围 200 ~ 800
nm(上海天美);粉碎机(上海淀久中药机械);HH-
2数显恒温水浴锅(江苏国华);离心机 TDL-4(上
海安亭);电热恒温培养箱(上海跃进);电热手提式
低水控压力蒸汽灭菌器(上海医用核子仪器厂);旋
转蒸发器 RE-52A(上海亚荣)。
1.2 材料与试剂
楮头红(购自三明和漳州的天然药用植物 ,经
福建中医研究院王振登教授鉴定);小白鼠:昆明
种 ,体重 18 ~ 20 g,雌雄各半 ,福建医科大学实验动
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物中心);普通琼脂培养基;肉汤培养基;无菌棉签;
谷丙氨酸胺基转移酶(ALT)、谷草氨酸胺基转移酶
(AST)试剂盒(南京建成生物工程公司);联苯双酯
(Bifendate);金黄色葡萄球菌(菌号:GIM1.55);黄
色八叠球菌(菌号:GIM1.59);大肠杆菌(8099,福建
卫生防疫站 ,菌号:GIM1.115);枯草杆菌 (菌号:
GD107);酵母菌(菌号:GIM2.37);硫酸铁 ,邻二氮
菲 ,过氧化氢 ,氢氧化钠 ,邻苯三酚 ,三(羟甲基)胺
基甲烷 ,硫代巴比妥酸(TBA),石油醚 ,乙醚 ,乙酸乙
酯 , 95%乙醇 、苦味酸 、三氯乙酸 、CCl4等均为分析
纯 ,卡那霉素(810 u· mg-1 , 中国药品生物制品检
定所)、青霉素钾(注射用)。
2 方 法
2.1 楮头红活性成分提取和初步分析
取 50g楮头红干药末 ,加石油醚 150 mL回流
提取 3次 ,每次 1.5 h,过滤 ,合并 3次滤液 ,浓缩得
石油醚提取部位样品 105 mL;滤渣加乙醚 150 mL
回流提取 3次 ,每次 1.5 h,过滤 ,合并 3次滤液 ,浓
缩得乙醚提取部位样品 110 mL;所得滤渣按上述同
样方法继续分别依次加乙酸乙酯 、乙醇和水各回流
提取 3次 ,每次 1.5h,过滤 ,合并滤液浓缩分别得乙
酸乙酯 、乙醇和水提取部位样品 116, 110, 168 mL。
临用时根据需要将各部位提取物样品稀释或浓缩 。
各提取部位的化学成分采用化学特征反应系统预试
验和纸层色谱定性试验[ 2]方法进行初步分色谱 。
2.2 抗氧化活性
2.2.1 清除羟自由基 羟自由基的生成及清除率
的测定采用邻二氮菲 -Fe2+氧化法[ 3-5] 。
2.2.2 清除超氧阴离子自由基 超氧阴离子自由
基清除率采用邻苯三酚自氧化法[ 3-5]测定。
2.2.3 抑制小鼠肝自发性脂质过氧化作用 小白
鼠禁食 18h,用引颈法处死后迅速取出肝脏 ,用 4℃
下预冷 0.01mol· mL-1 , pH=7.4的 PBS洗涤并配
成 3%的匀浆 [ 2] 。取该匀浆 1 mL,加 600 μL样液
(100或 50g· L-1)或生理盐水 ,于 37 ℃温育 2 h,
加入 20%三氯乙酸 1 mL终止反应 , 3 500 r· min-1
离心 10 min,取上清液 2 mL加入 0.67% TBA1
mL, 90 ℃水浴 15min,取出后流水冷却 。于 532 nm
处测 Ai值 ,以不加肝匀浆和样品为比色空白样 ,以
加肝匀浆不加样品为对照样(A0)。计算脂质过氧
化物(LPO)的清除率 [ 3] :
LPO的清除率(%)=(A0 -Ai)/A0 ×100%
2.2.4 H2O2诱导的小鼠肝脂质过氧化作用 按
“ 2.2.3”项下同法制备的肝匀浆 ,取该匀浆 1.5mL,
加 800 μL样液(100或 50 g· L-1)或生理盐水 ,其
余按 “ 2.2.3”项下同法处理和测定脂质过氧化物
(LPO)的清除率。
2.3 抗小鼠肝损伤实验 [ 6-7 ]
取 50只小鼠 ,随机分为 5组 ,每组 10只 。 1 ~ 2
组为给药(水提部位)高 、低剂量组(分别为 600 , 800
mg· kg-1体重), 3组为联苯双酯阳性组(200 mg·
kg-1体重), 4组为 0.5%-CCl4模型(10 mL· kg-1体
重 ,颈部皮下注射), 5组为空白组 (生理盐水 30
mL· kg-1体重)。实验前 ,所有动物禁食不禁水 12
h。第 2天开始 , qd,连续灌胃给药 4d,空白组和模
型组灌 0.6mL的生理盐水 ,给药组灌同等体积的药
液 ,在最后一次灌药后 1h,除正常组外 ,其余 4组皮
下注射 0.5%的四氯化碳 -花生油溶液每 1 kg体重
10mL, 禁食 12 ~ 16 h后立即摘除眼球采血。
12 000 r· min-1离心 ,取上清液 ,测定血清 AST活
力。
2.4 抑菌实验
2.4.1 样品液的制备 将 5种提取部位(石油醚 、
乙醚 、乙酸乙酯 、乙醇和水)样品液高压灭菌后 ,用
无菌的溶剂(95%乙醇)配制成 1 g·mL-1的溶液。
2.4.2 菌液制备 将金黄色葡萄球菌 ,黄色八叠球
菌 ,大肠杆菌 ,枯草杆菌接种于肉汤培养基;将酵母
菌接种于普通琼脂培养基;于 32 ℃恒温生化培养箱
内培养 48h,备用。用时 ,将各菌种配制成等浓度的
菌液 。
2.4.3 敏感菌筛选 用无菌棉签浸透菌液 ,将过量
的菌液均匀密集涂布于普通琼脂平板表面 ,待菌液
干后 ,在琼脂平板上放 3张圆形小滤纸 (d≤0.5
cm),同时滴灭过菌的楮头红提取液 ,用 95%乙醇溶
液作空白对照 ,卡那霉素和青霉素钾为阳性对照 ,然
后将培养皿于 37℃的恒温培养箱中倒置培养 48 h。
观察在滴过药物的培养皿中小滤纸周围的菌生长情
况 ,形成抑菌圈的为药物敏感菌(+),未形成抑菌
圈的为药物不敏感菌(-)[ 8] 。
2.4.4 最低抑菌浓度(MIC)的测定 用有抑菌作
用的提取样品测定 MIC[ 8] ,并用各提取部位样品液
加入到培养基中使之配制成梯度浓度:5, 10, 15, 25,
50, 75, 100 g·L-1 ,同时设空白对照组 ,并立即制备
培养基 ,待琼脂培养基凝固后 ,用接种环将药物敏感
菌的菌液划线培养于琼脂平板上 ,在 37℃恒温培养
箱培养 24 h后观察有无细菌生长。以无细菌生长
的为阴性皿(-),凡有细菌生长或只生长 5个菌落
以下的药物最低浓度为样液对该菌种的最低抑菌浓
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度(MIC)。
2.4.5 最低杀菌浓度(MBC)的测定 将上述无菌
落生长的各培养皿继续培养 24 h,取出观察结果 ,原
培养平板上无细菌生长的阴性皿(-)可能出现长
菌现象 ,找出无菌生长的最低浓度的培养皿 ,即为最
低杀菌浓度(MBC)[ 8-9] 。最低抑菌浓度(MIC)与最
低杀菌浓度(MBC)可能相同 ,也可能不同 。
3 结果与分析
3.1 楮头红主要化学成分
按 “2.1”项下得到的楮头红石油醚 、乙醚 、乙酸
乙酯 、乙醇和水提取部位样品液 ,其每 1 mL分别相
当于 0.476 , 0.455, 0.431, 0.455和 0.298 g楮头红
的提取物 ,用时根据需要稀释或浓缩 。经化学成分
系统预试和纸层色谱验证结果表明 ,石油醚部位可
能含挥发油 ,植物甾醇 ,植物色素等;乙醚部位可能
含有某些游离苷类物质 ,乙酸乙酯提部位含有黄酮
及其苷类 ,鞣质等;乙醇部位含糅质 、酚性物质以及
少量还原多糖类物质;水提部位含较高浓度的还原
多糖及部分糅质 、皂苷等。
3.2 各部位提取液抗氧化作用
3.2.1 清除羟自由基 各部位提取物对羟自由基
(· OH)的清除作用不同 ,清除率大小顺序为水 >
乙醇 >乙醚 >乙酸乙酯 。乙醇 、乙醚和乙酸乙酯 3
部位提取物随浓度增大清除率增大。水提组分含高
浓度的还原多糖及部分糅质 、酚酸性物质等 ,乙醇组
分含较高浓度的糅质 、酚性物质等 ,所以它们具有较
强的清除羟自由基的能力 。这与系统预试实验结果
分析基本一致。
3.2.2 清除超氧阴离子自由基 各部位提取物对
超氧阴离子自由基(O2· )的抑制活性见表 1。乙醚
部位对超氧阴离子自由基的清除作用最强 ,水提部
位作用最弱 。
表 1 各提取部位对超氧阴离子自由基的清除 .n=5
Tab1 Rusultsofscavengingexceedoxygenionfreeradicalof
extractsfromS.nepalensisWall.n=5
Group Dose/g· L-1
LPO
/%
RSD
/%
Petroleumetherextract 1×10-4 0
Waterextract 1×10-4 2.64 1.1
Etherextract 1×10-4 49.30 1.2
Ethylacetateextract 1×10-4 35.39 1.8
Ethanolextract 1×10-4 28.87 0.9
3.2.3 抑制小鼠肝自发性脂质过氧化 实验了不
同部位的不同浓度提取液对小鼠肝自发性脂质过氧
化的抑制作用 ,结果表明 ,只有水提部位有活性 ,浓
度为 50 g·L-1时其 LPO为 6.4%。
3.2.4 抑制 H2O2诱导的小鼠肝脂质过氧化 实验
了不同部位不同浓度提取液对 H2O2诱导的小鼠肝
脂质过氧化的抑制作用 ,结果表明 ,只有水提部位有
活性 ,质量浓度为 50 g·L-1时其 LPO为 6.0%。
3.3 保护肝损伤效果
实验初步结果见表 2。除水提部位具有较好的
抗肝损伤作用外 ,其他部位效果不很明显。
表 2 提取物对小鼠肝损伤的作用 .n=10, x±s
Tab2 EffectofwaterextractfromS.nepalensisWallonmice
liverinjury.n=10, x±s
Group Dose/mg· kg-1 AST/ μ· L-1
Normalcontrolgroup 150±33
CCl4group 10mL 893±2141)
Bifendategroup 200 319±692)
S.nepalensisWalⅠ group 600 379±172)
S.nepalensisWalⅡgroup 800 322±1182)
注:正常对照组与损伤对照组比较 , 1)P<0.001;保护组与损伤对照组比较 ,
2)P<0.001
Note:Normalcontrolgroupvsinjurycontrolgroup, 1)P<0.001;Defendgroupvs
injurycontrolgroup, 2)P<0.001
3.4 抑菌效果
3.4.1 敏感菌的筛选 按 “ 2.4.3”项下方法筛选
敏感菌 ,结果见表 3。结果表明 ,各提取样液对酵母
菌无抑制作用 ,石油醚和水提部位对各种菌均无抑
制作用;乙醚和乙酸乙酯部位对金黄色葡萄球菌 、枯
草杆菌 、大肠杆菌均有一定抑制作用 ,乙醇部位对枯
草杆菌 、大肠杆菌有抑制作用 。
表 3 不同部位提取物对不同菌株的抑制活性
Tab3 AntibacterialactivityofextractsfromS.nepalensisWall
againstdiferentfungus
Group Staphyaureus
Bacilus
subtilis Colibacilus Microzyme
Petroleumether - - - -
Diethylether + ++ + -
Ethylacetate + ++ + -
Ethanol - + + -
Water - - - -
95%Ethanol - - - ++
Kanamycin - ++ ++ -
Benzypenicilinpotassium ++ - - -
3.4.2 最低抑菌浓度(MIC) MIC测定结果表明 ,
乙醚部位提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的
MIC分别为 100和 140 g·L-1 ,乙酸乙酯部位提取
物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的 MIC分别为 75
和 50g· L-1 ,乙醇部位提取物对金黄色葡萄球菌和
大肠杆菌的 MIC分别为 60和 30g· L-1。
3.4.3 最低杀菌浓度 (MBC) MBC测定结果表
明 ,乙醚部位提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌
的 MBC都高于 140g· L-1 ,乙酸乙酯部位提取物对
·1294· ChinPharmJ, 2007September, Vol.42No.17 中国药学杂志 2007年 9月第 42卷第 17期
作者简介:余振喜 ,男 ,博士研究生 *通讯作者:林瑞超 ,男 ,教授 ,博士生导师 Tel:(010)67095307 E-mail:Linrch307@sina.com
萝卜秦艽化学成分的研究Ⅱ
余振喜 1, 2 ,王钢力 2 ,戴忠 2 ,边巴次仁 3 ,林瑞超 2*(1.北京中医药大学中药学院 ,北京 100102;2.中国药品生物制品检定所 ,北京
100050;3.西藏自治区药品检验所 ,拉萨 850000)
摘要:目的 对萝卜秦艽的化学成分进行研究。方法 采用大孔树脂 、薄层色谱和硅胶柱色谱等方法进行分离纯化 , 通过理
化方法和波谱数据进行结构鉴定。结果 从体积分数 95%乙醇提取物大孔树脂体积分数 95%乙醇洗脱物中分离并鉴定了
10个化合物 , 分别为 phlomisoicacid(Ⅰ )、phlomisosideⅤ(Ⅱ)、phlomisosideⅢ(Ⅲ )、三十烷酸(Ⅳ)、三十烷酸对羟基苯乙酯
(Ⅴ)、邻苯二甲酸正丁异丁酯(Ⅵ )、棕榈酸(Ⅶ )、油酸(Ⅷ )、β-谷甾醇(Ⅸ )和胡萝卜苷(Ⅹ )。结论 除Ⅲ外 ,其余化合物均为
首次从该植物中分得 ,其中Ⅳ、Ⅴ 、Ⅵ 为首次从该属植物中分得 , Ⅱ为一新化合物。
关键词:萝卜秦艽;化学成分;phlomisosideⅤ
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1001-2494(2007)17-1295-04
StudiesonChemicalConstituentsofPhlomismedicinalisⅡ
YUZhen-xi1, 2 , WANGGang-li2 , DAIZhong2 , BIANBACi-ren3 , LINRui-chao2*(1.ColegeofChineseMateriaMedica,
BeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine, Beijing100102, China;2.NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticaland
BiologicalProducts, Beijing100050, China;3.TibetInstituteforDrugControl, Lhasa850000, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE TostudythechemicalconstituentsofPhlomismedicinalis.METHODS Thecompoundswereisolated
andrepeatedlypurifiedonmacroporousresin, silicagelcolumnchromatographandTLCandthestructureswereelucidatedbyphysico-
chemicalpropertiesandspectralanalysis.RESULTS Tencompoundswereobtainedandelucidatedasphlomisoicacid(Ⅰ ), phlomi-
sosideⅤ(Ⅱ), phlomisosideⅢ(Ⅲ), triacontanoicacid(Ⅳ), triacontanoicacid, 2-(4-hydroxyphenyl)ethylester(Ⅴ ), phthalicacid,
butylisobutylester(Ⅵ ), palmiticacid(Ⅶ ), oleicacid(Ⅷ ), β-sitosterol(Ⅸ )anddaucosterol(Ⅹ ).CONCLUSION Theyhave
beenisolatedfromthisplantforthefirsttimebesidescompoundⅢ , andcompoundⅣ, Ⅴ andⅥ wereobtainedfromtheplantsofPhlo-
misforthefirsttime, andphlomisosideⅤ wasanewcompound.
KEYWORDS:Phlomismedicinalis;chemicalconstituents;phlomisosideⅤ
金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的 MBC均为 75 g·
L-1 ,乙醇部位提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌
的 MBC分别为 60和 30 g·L-1。
4 结 论
通过楮头红提取物的生物活性实验表明 ,楮头
红具有较强的抗氧化 、抗肝脂质过氧化 、抗肝损伤和
一定的抑菌作用 ,可为楮头红的临床用药提供科学
依据。上述这些活性作用可能与其所含活性成分如
还原多糖 ,游离苷类物质 、黄酮类物质 、酚类 、鞣质等
物质有关。关于楮头红化学成分 、药效与成分关系
正在进一步研究中。
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(收稿日期:2006-03-08)
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