全 文 ：3. 78 (1H，brs， rha-2-H) ，3. 54 (1H，dd，J =
9. 6，1. 8 Hz， rha-3-H) ，3. 15 (1H， t，J = 9. 3
Hz，rha-4-H) ，3. 99 (1H，brs， rha-5-H) ，0. 84
(3H，d， J = 6. 0 Hz， rha-6-H)。13 C-NMR (150
MHz，DMSO-d6)δ:177. 8 (C-4) ，164. 2 (C-7) ，
161. 7 (C-7 ) ，157. 6 (C-9 ) ，156. 5 (C-2 ) ，
145. 8 (C-2，6) ，136. 5 (C-4) ，134. 3 (C-3) ，
119. 6 (C-1) ，107. 9 (C-3， 5) ，104. 1 (C-
10) ，102. 0 (C-1″) ，98. 7 (C-6) ，93. 6 (C-8) ，
71. 3 (C-4″) ，70. 6 (C-3″) ，70. 1 (C-5″) ，16. 6
(C-6″)。以上数据与文献 ［6-7］报道杨梅素-3-O-
α-L-鼠李糖苷一致，故化合物 5 确定为杨梅素-3-O-
α-L-鼠李糖苷。
参考文献:
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翠云草中酸酯类成分研究
郑俊霞， 郑 扬， 张 磊， 赵肃清， 方岩雄， 张 焜*
(广东工业大学轻工化工学院，广东 广州 510006)
收稿日期:2012-07-02
基金项目:国家重点基础研究发展计划 (973 计划) (2006CB504100) ;广东工业大学校级博士科研启动项目 (093002)
作者简介:郑俊霞 (1981—) ，女，博士，讲师，主要从事天然产物活性成分研究工作。Tel:13418001695，E-mail:junxiazheng
@ 163. com
* 通信作者:张 焜，教授，博士生导师。Tel: (020)39322231，E-mail:Kzhang@ gdut. edu. cn
摘要:目的 研究翠云草全草的 60%乙醇提取物中酸酯类化学成分。方法 分别使用乙酸乙酯、正丁醇对翠云草全
草的 60%乙醇提取物进行萃取，借助硅胶、sephadex LH-20、ODS柱色谱以及反相制备型高效液相色谱法等现代分离
方法对其乙酸乙酯萃取部位进行了分离纯化，利用理化分析以及现代波谱学方法对分离得到的化合物结构进行了鉴
定。结果 从翠云草中分离鉴定了 5 个化合物，分别为 (10E，12Z，14E)-9，16-二羰基-10，12，14-三烯-十八碳酸
(1)、金色酰胺醇乙酸酯 (2)、(2E)-2-壬烯二酸 (3)、软脂酸单甘油酯 (4)及 β-谷甾醇 (5)。结论 化合物 1 ～ 5
为首次从本属植物分离得到，并首次报道了 (2E)-2-壬烯二酸 (3)的核磁数据。
关键词:翠云草;酸酯类成分;结构鉴定; (2E)-2-壬烯二酸
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)04-0750-04
doi:10． 3969 / j． issn． 1001-1528． 2013． 04． 027
Isolation and identification of the acids and esters from Selaginella uncinata
(Desv．)Spring
ZHENG Jun-xia， ZHENG Yang， ZHANG Lei， ZHAO Su-qing， FANG Yan-xiong， ZHANG Kun*
(School of Chemical Engineering and Light Industry，Guangdong University of Industry，Guangzhou 510006，China)
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Chinese Traditional Patent Medicine
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KEY WORDS:Selaginella uncinata (Desv．)Spring;acids and esters;structural identification; (2E)-2-non-
enedioic acid
翠云草为卷柏属植物翠云草 Selaginella uncina-
ta (Desv．)Spring 的全草，主要分布于我国广西、
广东、福建、浙江、安徽及西南各地。《中药大辞
典》记载其味微苦，性寒，具有清热利湿、解毒、
消瘀、止血的功效，主要用于治疗水肿，黄疸，关
节风湿痛等疾病［1］。现代药理学研究表明，翠云
草具有抗缺氧、抗病毒等活性;文献报道其主要成
分为黄酮类化合物，并以双黄酮类化合物为
主［2-6］。本实验通过对翠云草提取物进一步分离得
到 5 个化合物，分别为 (10E，12Z，14E)-9，
16-二羰基-10，12，14-三烯-十八碳酸 (1)、金色
酰胺醇乙酸酯 (2)、(2E)-2-壬烯二酸 (3)、软脂
酸单甘油酯 (4)及 β-谷甾醇 (5) ，为进一步系统
地研究与开发翠云草奠定化学基础。化合物 1 ～ 5
为首次从本属植物分离得到，并首次报道了
(2E)-2-壬烯二酸 (3)的核磁数据。
1 仪器与材料
翠云草干燥全草，2010 年 4 月购于广西南宁
市，经广西中医药研究所赖茂祥教授鉴定为翠云草
Selaginella uncinata (Desv．) Spring 的全草。N—
1100 型旋转蒸发仪 (EYELA) ;A—1000S 循环水
真空泵 (EYELA) ;FA2004 型电子天平 (上海舜
宇恒平科学仪器有限公司) ;FA2004 型电子天平
(上海舜宇恒平科学仪器有限公司) ;熔点测定仪
为 Yanaco型 (温度未校正) ;紫外光谱仪为岛津
UV2401PC型;红外光谱仪为 FTIR8900 型;质谱
仪为 Bruker Esquire 2000;Bruker AV—400 型核磁
共振仪 (TMS为内标) ;高效液相色谱仪 (日本岛
津株式会社) ，检测器为 Shimadzu SPD-M10Avp
UV-VIS二极管阵列检测器，分析型色谱柱为 Shim-
pack VP-ODS (250 mm × 4. 6 mm，5 μm) (SHI-
MADZU) ，制备型色谱柱为 Shim-pack PREP-ODS
(250 mm × 20 mm，5 μm) (SHIMADZU) ;反相
ODS 填料 (Merck 公司) ;Sephadex LH-20 填料
(Amersham Biosciences公司) ;薄层色谱用硅胶 G、
H、GF254 和柱色谱硅胶 (青岛海洋化工) ;液相
色谱用甲醇为色谱纯;水为双蒸水，其他试剂为分
析纯。
2 提取与分离
取 4. 2 kg翠云草干燥全草，用 60%乙醇回流
提取 3 次，每次 2 h，料液比为 1 ∶ 30。提取液浓缩
成浸膏 (856 g) ，使浸膏分散水中，依次用乙酸乙
酯、正丁醇萃取，浓缩后，得乙酸乙酯层部分
(160 g)、正丁醇层部分 (90. 4 g)及水层部分
(600 g)。借助硅胶柱色谱 (三氯甲烷-甲醇体系)
对乙酸乙酯萃取部分进行梯度洗脱，得 15 个流份
(Fr. A ～ Fr. O) ;Fr. C (17 g)经硅胶柱色谱 (环
己烷-乙酸乙酯体系)梯度洗脱得 11 个流份，
Fr. C-8 经 Sephadex LH-20 柱色谱，三氯甲烷-甲醇
(体积比9 ∶ 1)洗脱，得到 2 个流份。Fr. C-8-2 经
反相 ODS柱色谱 (甲醇-水体系)以及反相制备型
HPLC分离 (甲醇∶ 水∶ 乙酸 = 60 ∶ 40 ∶ 0. 1) ，得到
化合物 1 (13 mg)和 2 (15 mg)。Fr. C-3 经硅胶柱
色谱 (环己烷-乙酸乙酯体系)梯度洗脱得化合物
5 (30 mg)。Fr. F (8 g)经硅胶柱色谱 (环己烷-乙
酸乙酯体系)梯度洗脱得 9 个流份，Fr. F-8 经
Sephadex LH-20 柱色谱，三氯甲烷-甲醇 (体积比 9
∶ 1)洗脱，得到 2 个流份。Fr. C-8-2 经反相 ODS
柱色谱 (甲醇-水体系)以及反相制备型 HPLC 分
离 (甲醇∶ 水∶ 乙酸 = 30 ∶ 70 ∶ 0. 1) ，得到化合物 3
(15 mg)。Fr. F-5 经反相 ODS 柱色谱 (甲醇-水 =
70 ∶ 30)洗脱得化合物 4 (15 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1:白色无定形粉末，FeCl3试剂反应结
果呈阳性。ESI-MS (positive and negative)谱给出
m/z 329 ［M + Na］+和 m/z 305 ［M-H］－，确定其
相对分子质量为 306，结合1H-NMR，13C-NMR谱数
据推测其分子式为 C18H26O4。
1H-NMR (400 MHz，in
CD3OD)δ:7. 30 (1H，m，H-11) ，7. 25 (1H，m，
H-14) ，6. 90 (1H，d，J = 4. 0 Hz，H-12) ，6. 89
(1H，d，J = 4. 0 Hz，H-13) ，6. 38 (1H，d，J =
15. 6 Hz，H-10) ，6. 35 (1H，d，J = 15. 5 Hz，H-
15) ，2. 65 (2H，q，J = 7. 24 Hz，H-17) ，2. 60
(2H，t，J = 7. 28 Hz，H-8) ，2. 18 (2H，t，J = 7. 18
Hz，H-2) ，1. 49 (2H，m，H-3) ，1. 24 (8H，m，H-
4 ～7) ，0. 98 (3H，t，J = 7. 24 Hz，H-18)。13C-NMR
(100 MHz，in CD3 OD)δ:200. 5 (C-16) ，200. 2
(C-9) ，174. 5 (C-1) ，140. 7 (C-11) ，140. 5 (C-
14) ，138. 6 (C-13) ，138. 5 (C-12) ，132. 3 (C-
10) ，132. 1 (C-15) ，39. 8 (C-8) ，33. 7 (C-2) ，
33. 1 (C-17) ，28. 5 (2 × C，C-5，6) ，28. 4 (C-
4) ，24. 5 (C-3) ，23. 6 (C-7) ，8. 0 (C-18)。综合
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上述分析，并与文献［7］的核磁数据基本一致，故
将化合物 1 鉴定为 (10E，12Z，14E)-9，16-二
羰基-10，12，14-三烯-十八碳酸。
化合物 2:棕黄色油状，茚三酮反应阳性。
UV 图谱 (CH3 OH)显示 λmax nm:202 (log ε
4. 50)。IR图谱中，νKBrmax 3 313 cm
－1为 N-H 伸缩振
动峰;2 965，2 915和2 862 cm －1为甲基和亚甲基
的伸缩震动峰;1 726和1 660 cm －1为羰基伸缩振动
峰;1 632，1 533和1 261 cm －1为烯键的伸缩振动
峰，说明化合物结构中含有羰基、双键以及甲基或
者亚甲基。ESI-MS (positive and negative)给出 m/z
467 ［M + Na］+，443 ［M-H］－推出化合物的相对
分子质量为 444。结合1 H-NMR，13 C-NMR 图谱，确
定其分子式为 C27 H28 N2 O4，计算其不饱和度为
15。1 H-NMR (400 MHz， in DMSO-d6) δ:8. 53
(1H，d，J = 8. 4 Hz，H-e) ，8. 15 (1H，d，J = 8. 3
Hz，H-d) ，7. 79 (2H，d，J = 7. 2 Hz，H-2a) ，7. 51
(1H，t，J = 7. 3 Hz，H-4a) ，7. 44 (2H，t，J = 7. 2
Hz，H-3a) ，7. 30 (2H，d，J = 7. 2 Hz，H-2c) ，
7. 23 (6H，m，H-2b，3b，4b，4c) ，7. 16 (2H，d，
J = 6. 8 Hz，H-3c) ，4. 68 (1H，m，H-3) ，4. 19
(1H，m，H-1) ，4. 01 (1H，dd，J = 10. 9，4. 8 Hz，
H-2A) ，3. 86 (1H，dd，J = 10. 9，6. 7 Hz，H-2B) ，
2. 99 (2H，m，H-8) ，2. 78 (2H，m，H-9) ，1. 97
(1H，s，H-7)。13C-NMR (100 MHz，in DMSO-d6)
δ:171. 2 (C-4) ，170. 2 (C-6) ，166. 1 (C-5) ，
138. 3 (C-1c) ，138. 0 (C-1b) ，134. 0 (C-1a) ，
131. 2 (C-4a) ，129. 1 (2C，C-2b，2c) ，128. 2
(2C，C-4b，4c) ，128. 1 (C-3a) ，128. 0 (C-3b) ，
127. 4 (C-2a) ，126. 2 (C-3c) ，64. 6 (C-2) ，54. 9
(C-3) ，49. 1 (C-1) ，37. 2 (C-8) ，36. 6 (C-9) ，
20. 6 (C-7)。综合上述分析，并与文献［8］中的金
色酰胺醇乙酸酯的核磁数据对照，基本一致，故将
化合物 2 鉴定为金色酰胺醇乙酸酯，该成分为首次
从本属植物中分离得到。
化合物 3:白色无定形粉末，FeCl3试剂反应结
果呈阳性。ESI-MS (negative)给出 m/z 185 ［M-
H］－，确定其相对分子质量为 186。结合 1H-
NMR、13C-NMR 谱数据推测其分子式为 C9 H14 O3，
计算其不饱和度为 3。1 H-NMR (400 MHz，in CD3
OD)δ:6. 92 (1H，dt，J = 15. 6，7. 45 Hz，H-3) ，
5. 79 (1H，d，J = 15. 9 Hz，H-2) ，2. 32 (2H，t，
J = 7. 37 Hz，H-8) ，2. 22 (2H，qd，J = 7. 45，1. 3
Hz，H-4) ，1. 62 (2H，m，J = 7. 37 Hz，H-7) ，1. 48
(2H，m，J = 7. 45 Hz，H-5) ，1. 35 (2H，m，H-
6)。13C-NMR (100 MHz，in CD3OD)δ:175. 8 (C-
9) ，170. 1 (C-1) ，150. 8 (C-3) ，122. 7 (C-2) ，
34. 6 (C-8) ，32. 9 (C-4) ，29. 6 (C-6) ，28. 8 (C-
5) ，25. 7 (C-7)。与 (2E)-2-壬烯二酸对照品共
薄层 Rf值一致;与 (2E)-2-壬烯二酸对照品混和
熔点不下降。将化合物 3 鉴定为 (2E)-2-壬烯二
酸 (3)。该成分为首次从本属植物中分离得到。查
找国内外文献，发现尚无该化合物核磁数据的报
道，因此本实验首次提供了该化合物的核磁数据。
化合物 4:白色针状结晶 (CH3 OH) ，熔点
62 ～63 ℃。ESI-MS (positive)给出 m/z 353 ［M +
Na］+，确定化合物的相对分子质量为 330。结合
1H-NMR、13 C-NMR 图 谱，确 定 其 分 子 式 为
C19H38O4，计算其不饱和度为 1。
1 H-NMR (400
MHz，in CDCl3)δ:4. 21 (1H，dd，J = 11. 6，4. 6
Hz，H-1A) ，4. 15 (1H，dd，J = 11. 6，6. 1 Hz，H-
1B) ，3. 93 (1H，m，H-2) ，3. 70 (1H，dd，J =
11. 5，4. 0 Hz，H-2A) ，3. 60 (1H，dd，J = 11. 5，
5. 8 Hz，H-2B) ，2. 35 (2H，t，J = 7. 5 Hz，H-2) ，
1. 62 (2H，m，J = 7. 1 Hz，H-15) ，1. 26 (24H，m，
H-3 ～14) ，0. 88 (3H，t，J = 7. 1 Hz，H-16)。13 C-
NMR (100 MHz，in CDCl3)δ:174. 3 (C-1) ，70. 3
(C-2) ，65. 2 (C-1) ，63. 3 (C-3) ，34. 2 (C-2) ，
31. 9 (C-14) ，29. 7 (6 × C，C-7 ～ 12) ，29. 4 (C-
6) ，29. 3 (C-4) ，29. 2 (C-13) ，29. 1 (C-5) ，24. 9
(C-3) ，22. 7 (C-15) ，14. 0 (C-16)。综合上述分
析，并与文献［9］中的 α-软脂酸单甘油酯的核磁数
据对照，基本一致，故将化合物鉴定为 α-软脂酸
单甘油酯。该成分为首次从本属植物中分离得到。
化合物 5:白色针状结晶 (CH3 OH) ，熔点
166 ～ 168 ℃。10%硫酸乙醇溶液显紫红色，Liber-
man-Burchard反应呈阳性，提示化合物可能为三萜
或甾类化合物。与 β-谷甾醇对照品共薄层 Rf值一
致;与 β-谷甾醇对照品混和熔点不下降。故鉴定
该化合物为 β-谷甾醇 (β-sitosterol)。
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水解酪蛋白和水杨酸对百里香生理代谢及精油提取率的影响
李晓东1， 徐世千2， 张建国2
(1． 深圳职业技术学院化生学院，广东 深圳 518055;2． 华南农业大学农学院，广东 广州 510641)
收稿日期:2012-07-25
基金项目:深圳市科技项目 (2109K3070009)
作者简介:李晓东 (1969—) ，男，博士 (博士后) ，教授，从事园林植物基因工程与植物组织培养研究。Tel: (0755)26019170，E-
mail:lixiaodong@ szpt． edu． cn
摘要:目的 研究水解酪蛋白和水杨酸对离体培养的百里香不定芽增殖以及不定芽中生理代谢和精油含有量的影响。
方法 添加不同质量浓度的水解酪蛋白或水杨酸后，测定百里香不定芽可溶性糖、可溶性蛋白含有量、相关酶活性以
及百里香精油含有量。结果 水解酪蛋白和水杨酸都能不同程度促进不定芽的增殖，其中以添加 300 mg /L 水解酪蛋
白和 0. 5 mg /L水杨酸的增殖效果最佳，增殖系数分别比对照显著增加 51. 05%、20. 71%。与对照处理相比，可溶性
糖含有量降低，可溶性蛋白则增加，超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化物酶 (POD)、苯丙氨酸解氨酶 (PAL)活性上
升，多酚氧化酶 (PPO)活性下降。从增殖的不定芽中水蒸气蒸馏出精油，百里香不定芽的精油提取率分别达到
0. 38%，0. 41%，对照组为 0. 31%。结论 水解酪蛋白和水杨酸不仅提高了百里香不定芽的增殖，而且还促进了百里
香次生代谢产物的积累和合成。
关键词:水解酪蛋白;水杨酸;百里香;生理代谢;精油提取率
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)04-0753-08
doi:10． 3969 / j． issn． 1001-1528． 2013． 04． 028
Effects of casein hydrolysate and salicylic acid on physiology metabolism and ex-
traction ratio of essential oil of Thymus vulgaris L．
LI Xiao-dong1， XU Shi-qian2， ZHANG Jian-guo2
(1． School of Applied Biological Engineering，Shenzhen Polytechnic College，Shenzhen 518055，China;2． College of Agriculture，South China Agricul-
ture University，Guangzhou 510642，China)
ABSTRACT: AIM To study the effects of casein hydrolysate and salicylic acid on propagation，physiology
metabolism and essential oil yield of adventitious buds of Thymus vulgaris in vitro． METHODS The contents of
soluble sugar，soluble protein and enzymatic activity were measured adding casein hydrolysate and salicylic acid in-
to the culture medium of adventitious buds of Thymus vulgaris． RESULTS The results showed that casein hydrol-
ysate and salicylic acid could help adventitious buds proliferation，and the best concentrations were 300 mg /L of
casein hydrolysate and 0. 5 mg /L of salicylic acid． Proliferation coefficient significantly increased 51. 05% and
21. 71%，respectively． Casein hydrolysate and salicylic acid increased the contents of soluble protein and the activ-
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