全 文 ：收稿日期:2007-01-23
基金项目:国家重点基础研究发展计划项目(2006CB504100)
作者简介:郑俊霞(1981-),女(汉族), 山西绛县人 ,博士研究生 , E-mail:junx iazheng@163.com;姚新生(1934-), 男
(汉族), 上海人 , 教授 , 博士生导师 , 主要从事天然药物化学研究 , E-mail:yaoxinsheng@tom.com , Fax:
(0755)26711832 , Tel:(0755)26957800。
文章编号:1005-0108(2007)05-0302-04
翠云草中酚性成分的分离与鉴定
郑俊霞1 ,王乃利1 , 2 ,陈海峰2 , 3 ,姚新生1
(1.沈阳药科大学 中药学院 , 辽宁 沈阳 110016;2.深圳清华大学研究院 深圳市创新中药及天然药物研究
重点实验室 , 广东 深圳 518057;3.清华大学 医学院 , 北京 100084)
摘　要:目的 研究翠云草[ Selaginella uncinata(Desv.)Spring]的化学成分。方法 利用硅胶 、Sephadex LH-20、
ODS 柱色谱及反相制备型 HPLC 等方法进行分离纯化 , 根据化合物的理化性质及波谱数据鉴定它们的结构。
结果与结论 从体积分数为 60%的乙醇提取液中分离得到 7 个酚性成分。结构分别鉴定为:阿魏酸棕榈酸-
16-醇酯(1)、对羟基桂皮酸(2)、对羟基苯乙酮(3)、香草醛(4)、香草酸(5)、丁香酸(6)、对羟基苯甲酸(7)。化
合物 1～ 3 为首次从该属植物中分离得到 , 化合物 1 ～ 7 为首次从该种植物中分离得到。
关键词:结构鉴定;柱色谱法;翠云草;酚性成分
中图分类号:R284　　　文献标志码:A
Isolation and identification of phenolic constituents
from Selaginella uncinata(Desv.)Spring
ZHENG Jun-xia1 ,WANG Nai-li1 , 2 , CHEN Hai-feng2 , 3 ,YAO Xin-sheng1
(1.School of Tradi tional Chinese Materia Medica , Shenyang Pharmaceutical University ,
Shenyang 110016 , China ;2.Key Lab for New Drugs Research of TCM.,
Shenzhen Research Insti tute of Tsinghua University , Shenzhen 518057 , China;
3.Medical School , Tsinghua University , Beijing 100084 , China)
Abstract:Aim To study chemical constituents of Selaginel la uncinata(Desv.)Spring.Methods The com-
pounds w ere isolated by means of chromatog raphy on silica gel ,Sephadex LH-20 column ,ODS column , and
reversed-phase Pre-HPLC.Their st ructures w ere elucidated by spectroscopic analy sis and chemical methods.
Results and conclusion Seven phenolic compounds were obtained from the 60% ethanol ext ract of Se-
laginella uncinata(Desv.)Spring and their st ructures were identif ied as 16-feruloyloxypalmi tic acid(1), p-
hydroxycinnamic acid(2), 1-(4-hydroxypheny l)-ethanone(3), vanillin(4), vanillic acid(5), syringic acid
(6), p-hydroxybenzoic acid(7).Compounds 1-3 were isolated from Selaginel la genus for the f irst time ,
while compounds 1-7 were firstly obtained from Selaginel la uncinata(Desv.)Spring.
Key words:st ructural identification;column chromatog raphy ;Selaginella uncinata(Desv.)Spring;phenolic
consti tuents
　　翠云草为卷柏属植物翠云草 [ Selaginel la
uncinata(Desv.)Spring]的全草 。味微苦 ,性寒。
有清热利湿 、解毒 、消瘀 、止血的功效[ 1] 。文献
[ 2-3]报道该植物中含有双黄酮和色原酮类化合
物 ,其中色原酮类化合物具有显著的抗呼吸道融
合瘤病毒(RSV)的作用 ,以及中等强度的抗 3型
第　17 卷　第 5 期
2007 年10月　总79 期
中 国 药 物 化 学 杂 志
Chinese Journal o f Medicinal Chemistry
Vol.17　No.5　p.302
Oct.2007 Sum 79
DOI :10.14142/j.cnki.cn21-1313/r.2007.05.004
副流感病毒(PIV 3)的作用。本文作者通过反复
柱色谱(硅胶 、Sephadex LH-20 、ODS色谱柱)及制
备型 HPLC 等分离手段 ,从翠云草全草的 60%
(体积分数)乙醇提取物中分离得到 7个酚类化合
物。分别鉴定为阿魏酸棕榈酸-16-醇酯(1)、对羟
基桂皮酸(2)、对羟基苯乙酮(3)、香草醛(4)、香草
酸(5)、丁香酸(6)、对羟基苯甲酸(7)。化合物 1
～ 3为首次从本属植物中分离得到 ,化合物 1 ～ 7
为首次从本种植物中分离得到 。
1　仪器与试药
熔点测定仪为 Yanaco 型 ,温度未校正 。红外
光谱仪为 FTIR8900 型。核磁共振仪为 Bruker
AV-400 型(TMS 为内标)。质谱仪为 Bruker
Esquire 2000型 。薄层色谱用硅胶 G 、H 、GF 254和
柱色谱用硅胶均为青岛海洋化工厂生产。反相
ODS填料为 Merck公司产品;Sephadex LH-20柱
为Amersham Biosciences公司产品 。分析型高效
液相色谱柱为 Shim -pack VP-ODS(250 mm×
4.6 mm , 5 μm), 检测器为 Shimadzu SPD -
M10Avp UV -Vis二极管阵列检测器 。液相色
谱用甲醇为色谱纯 ,水为双重蒸馏水 ,其他试剂均
为分析纯 。
翠云草药材于 2004 年 8 月采自中国广西南
宁 ,由沈阳药科大学中药学院孙启时教授鉴定为
Selaginel la uncinata(Desv.)Spring 全草 。凭证
标本保存在沈阳药科大学中药学院 。
2　提取分离
翠云草干燥全草(4.2 kg)用体积分数为 60%
的乙醇回流提取 3次 ,减压浓缩提取液至无醇味 ,
加入适量水 ,用等体积的乙酸乙酯 、正丁醇分别萃
取3次 。取乙酸乙酯萃取部分 160 g ,经硅胶柱色
谱分离 , 氯仿-甲醇梯度洗脱 , 得到 15 个流份。
Fr.C(17g)经硅胶柱色谱分离 ,环己烷-丙酮梯度
洗脱 , 得到 11 个流份。 Fr.C-6 与 Fr.C-8 经
Sephadex LH-20柱色谱 ,氯仿-甲醇(体积比 9∶1)
洗脱 ,得到 2个流份。Fr.C-6-2及 Fr.C-8-2经反
相ODS柱色谱以及反相制备型 HPLC 分离 ,得到
化合物 1(15 mg)、3(10 mg)、4(8 mg)、5(40 mg)、
6(30 mg)。Fr.F(17 g)经硅胶柱色谱分离 ,环己
烷-丙酮梯度洗脱 , 得到 9 个流份。 Fr.F-7 与
Fr.F-8经 Sephadex LH-20柱色谱 ,氯仿-甲醇(体
积比 9∶1)洗脱 , 得到 2 个流份 。Fr.F-7-2 及
Fr.F-8-2 经反相 ODS 柱色谱以及反相制备型
HPLC 分离 ,得到化合物 2(50 mg)和 7(15 mg)。
3　结构鉴定
化合物 1:白色无定形粉末。与 FeCl3试剂反应
显蓝黑色 ,提示为酚酸类化合物。ESI-MS 谱给出
m/z :471[M+Na] +、447[ M-H] -峰 ,确定其相对分
子质量为 448 ,结合1H-NMR , 13C-NMR谱数据推测
其分子式为 C26H40O6 。1H-NMR(400 MHz ,DMSO-
d6)谱在低场区的δ6.44(1H ,d , J =15.9 Hz)、δ7.52
(1H ,d , J=15.9 Hz)为反式烯氢的特征信号 ,而且两
个烯氢的化学位移值相差较大 ,说明烯键的一端连
有吸电子基团;δ6.80(1H ,d , J =8.1Hz)、δ7.12(1H ,
dd , J=8.1 ,1.3 Hz)、δ7.30(1H ,d , J =1.3 Hz)为典型
的苯环上ABX系统质子信号。高场区给出的δ3.81
(3H ,s)为甲氧基信号;由δ4.10(2H , t , J =6.5 Hz)、
δ2.15(2H , t , J =6.8 Hz)、δ1.30(2H , m)、δ1.22
(24H ,m)可推断化合物的结构中含有一个长链脂肪
酸片段。13C-NMR、DEPT-135(100 MHz ,DMSO-d6)
谱给出δ174.8 、δ166.7两个羰基碳信号;δ149.5、δ
148.0两个苯环上连氧碳信号;δ144.9 、δ114.5烯键
303第 5期 郑俊霞等:翠云草中酚性成分的分离与鉴定
碳信号;δ115.5、δ111.2两个苯环上连氧碳的邻位碳
信号;δ63.7连氧亚甲基碳信号;δ55.7甲氧基碳信
号 ,以及δ:34.5 、29.0 ～ 28.3、25.4亚甲基碳信号等。
结合HSQC谱可将氢与其直接相连的碳进行确认。
在HMBC谱(图 1)中 ,δ7.52(H-7)与δ166.7(C-9)、δ
123.1(C-6)、δ111.2(C-2)有远程相关;δ6.44(H-8)与δ
166.7(C-9)、125.5(C-1)有远程相关 ,提示反式烯烃的
一端连有羰基 ,另一端与苯环直接相连;δ7.30(H-2)
与δ149.5(C-4)、δ144.9(C-7)、δ123.1(C-6)有远程相
关;δ7.12(H-6)与δ149.5(C-4)、δ144.9(C-7)、δ111.2
(C-2)相关;δ6.80(H-5)与δ148.0(C-3)、δ125.5(C-1)
相关;δ3.81(3-OCH3)与δ148.0(C-3)相关 ,提示与反
式烯烃直接相连的苯环的3位为甲氧基 ,4位为羟基 ,
即分子中含有一个阿魏酸片段;δ2.15(H-1′)与δ166.7
(C-9)、δ29.0 ～ 28.3(C-3′～ 14′)、δ25.4(C-2′)相关;δ
2.15(H-15′)与δ174.8(C-16′)、δ29.0 ～ 28.3(C-3′～ 14′)
相关 ,提示一个含有末端羟基的棕榈酸片段与阿魏酸
成酯 ,具体信号归属见表1。综合化合物的 ESI-MS 、
1H-NMR、13C-NMR谱数据并与文献[ 4]对照 ,确定化
合物1为阿魏酸棕榈酸-16-醇酯。
Figure 1　The key HMBC correlations of compound 1
　　化合物2:白色无定形粉末。与 FeCl3 试剂反
应显蓝黑色 ,提示为酚酸类化合物。ESI-MS 谱给
出 m/z 163 [ M -H] - ,确定其相对分子质量为
164 ,结合1H-NMR、13C-NMR谱数据推测其分子式
为 C9H8O3。 1H-NMR(400 MHz , CD3OD)谱中 δ
6.27(1H , d , J =15.9 Hz ,H-8)、δ7.59(1H , d , J =
15.9 Hz ,H-7)为反式烯氢的特征信号 ,且两个烯氢
的化学位移值相差较大 ,说明烯键的一端连有吸电
子基团;δ6.80(2H , m , J =8.6 , 2.0 Hz , H-3 , 5)、δ
7.44(2H ,m , J =8.6 ,2.0 Hz ,H-2 ,6)为典型的对位
取代苯环上的 AA′BB′质子信号 ,且两个质子的化
学位移值相差较大 ,说明对位取代苯环的两端所连
的基团吸电性差别较大。 13C-NMR(100 MHz ,
CD3OD)谱中δ171.1(COOH)为末端羧基上的碳信
号;δ161.1(C-4)为苯环上直接连氧的碳信号;δ
146.5(C-7)、115.7(C-8)为一端连有羧基的反式烯
键的碳信号;δ131.0(C-2 ,6)为苯环上连氧碳的间
位碳信号;δ127.3(C-1)为苯环上直接连接烯键的
碳信号;δ116.8(C-3 ,5)为苯环上连氧碳的邻位碳
信号。具体信号归属见表 1。综合化合物的 ESI-
MS 、1H-NMR、13C-NMR谱数据并与文献[ 5-6] 对
照 ,鉴定化合物2为对羟基桂皮酸。
Table 1　The 13C-NMR and 1H-NMR data of compounds 1 and 2
Position
Compound 1①
δH δC Position
Compound 2②
δH δC
1 125.5 1 127.3
2 7.30(1H , d , J=1.3 Hz) 111.2 2 , 6 7.44(2H , m , J=8.6 , 2.0 Hz) 131.0
3 148.0 3 , 5 6.80(2H , m , J=8.6 , 2.0 Hz) 116.8
4 149.5 4 161.1
5 6.80(1H , d , J=8.1 Hz) 115.5 7 7.59(1H , d , J=15.9 Hz) 146.5
6 7.12(1H , dd , J=8.1 , 1.3 Hz) 123.1 8 6.27(1H , d , J=15.9 Hz) 115.7
7 7.52(1H , d , J=15.9 Hz) 144.9 9 171.1
8 6.44(1H , d , J=15.9 Hz) 114.5
9 166.7
1′ 4.10(2H , t , J=6.5 Hz) 63.7
2′ 1.30(2H ,m) 25.4
3′-14′ 1.22(24H ,m) 29.0-28.3
15′ 2.15(2H , t , J=6.8 Hz) 34.5
16′ 174.8
3-OCH3 3.81(3H , s) 55.7
　　① measured in DMSO-d 6;② measured in CD3OD
304 中 国 药 物 化 学 杂 志 第 17 卷
　　化合物 3:白色无定形粉末。与 FeCl3 试剂反
应显蓝黑色 , 提示为酚酸类化合物 。 1H-NMR
(400 MHz , DMSO-d6)δ:7.82(2H ,d , J =8.6 Hz ,
2 ,6-H)、6.83(2H , d , J =8.6 Hz , 3 , 5-H)、2.46
(3H , s ,8-CH3)。 13C-NMR(100 MHz , DMSO-d6)
δ:196.1(C-7)、162.2(C-4)、130.7(C-2 ,6)、128.5
(C-1)、115.2(C-3 , 5)、26.3(C-8)。上述数据与文
献[ 7]数据基本一致 ,故鉴定化合物 3为对羟基苯
乙酮 。
化合物 4:白色无定形粉末。与 FeCl3 试剂反
应显蓝黑色 , 提示为酚酸类化合物 。 1H-NMR
(400 MHz , DMSO-d 6)δ:9.73(1H , s , 7-CHO)、
7.39(1H ,br d , J =7.6 Hz ,6-H)、7.35(1H ,br s ,
2-H)、6.92(1H , d , J =7.6 Hz ,5-H)、3.61(3H , s ,
OCH3)。 13 C-NMR(100 MHz , DMSO-d6)δ:
190.7(C-7)、154.0(C-4)、148.4(C-3)、128.1(C-
1)、126.3(C-6)、115.1(C-5)、110.6(C-2)、55.5
(C-8)。上述数据与文献[ 8]数据基本一致 ,故鉴
定化合物 4 为香草醛 ,即 3-甲氧基-4-羟基-苯甲
醛。
化合物 5:无色针晶 , mp 210.0 ～ 211.0 ℃
(甲醇)。与 FeCl3 试剂反应显蓝黑色 ,提示为酚
酸类化合物。ESI-MS 谱给出 m/ z 167[ M -
H] -峰 , 确定其相对分子质量为 168 , 结合 1H-
NMR 、13C-NMR谱数据推测其分子式为 C8H8O4 。
1H-NMR(400 MHz , DMSO-d 6)δ:7.45(1H , br
d , J =8.3 Hz ,6-H)、7.43(1H , d , J =1.9 Hz ,2-H)、
6.84(1H , d , J =8.3 Hz , 5-H)、3.80(3H , s , OCH3)。
13C-NMR(100 MHz ,DMSO-d6)δ:167.5(COOH)、
151.1(C-4)、147.2(C-3)、123.6(C-6)、122.0(C-
1)、115.1(C-5)、112.8(C-2)、55.6(C-8)。上述数
据与文献[ 9]数据基本一致 ,故鉴定化合物 5为香
草酸 ,即 3-甲氧基-4-羟基-苯甲酸。
化合物 6:无色针晶 , mp 213.0 ～ 214.0 ℃
(甲醇)。与 FeCl3 试剂反应显蓝黑色 ,提示为酚
酸类化合物。ESI-MS 谱给出 m/ z 197[ M -
H] -峰 , 确定其相对分子质量为 198 , 结合 1H-
NMR 、13C-NMR谱数据推测其分子式为 C9H10
O5 。1H-NMR(400 MHz ,DMSO-d 6)δ:7.20(2H ,
s , 2 , 6-H)、3.80(6H , s , 3 , 5-OCH3)。 13C-NMR
(100 MHz , DMSO-d6)δ:167.4(COOH)、147.4
(C-3 ,5)、140.1(C-4)、120.9(C-1)、106.9(C-2 ,
6)、55.6(C-3 ,5)。上述数据与文献[ 10]数据基本
一致 ,故鉴定化合物 6 为丁香酸 ,即 3 , 5-二甲氧
基-4-羟基-苯甲酸。
化合物 7:无色针晶 , mp 214.0 ～ 215.0 ℃
(甲醇)。与 FeCl3 试剂反应显蓝黑色 ,提示为酚
酸类化合物。 1H-NMR(400 MHz , CD3OD)谱中
δ:7.87(2H , m , J =8.8 , 2.0 Hz , 2 , 6-H)、6.81
(2H , m , J =8.8 , 2.0 Hz , 3 , 5-H)为典型的苯环
AA′BB′系统质子信号 。 13 C-NMR(100 MHz ,
CD3OD)δ:170.2(COOH)、163.3(C-4)、133.0(C-
2 ,6)、122.8(C-1)、116.0(C-3 ,5)。以上数据与文
献[ 11]对照基本一致 ,确定化合物 7 为对羟基苯
甲酸 。
致谢:深圳中药及天然药物研究中心黄敬辉
对化合物进行核磁共振谱测试 ,王新峦对化合物
进行质谱测试 。
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