全 文 ：２０１３年１月 四川大学学报（自然科学版） Ｊａｎ．２０１３
第５０卷　第１期 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｖｏｌ．５０　Ｎｏ．１
收稿日期：２０１２－０２－１４
基金项目：国家自然科学基金（３１２７０２４１，３１１００１６１，３１０７０１６６）；教育部博士点基金（２００９０１８１１１００６４）；科技部基础性研究专项重点项
目（２００９ＦＹ１１０１００）
作者简介：易欣（１９８７－），女，江苏南京人；硕士研究生，主要从事植物系统学研究．Ｅ－ｍａｉｌ：２４９１４１３４０＠ｑｑ．ｃｏｍ
通讯作者：何兴金．Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｊｈｅ＠ｓｃｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
ｄｏｉ：１０３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０４９０－６７５６．２０１３．０１．０３６
野生通江百合高频率再生植株的研究
易　欣，周颂东，何兴金
（四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室，成都６１００６５）
摘　要：本文报道了用野生通江百合的种子萌发的无菌苗，切取叶片、叶柄、茎段基部小鳞茎
为外植体进行组织培养研究．结果表明：种子在预处理去翅后，经７５％（ｖ／ｖ）酒精浸泡杀菌
３０ｓ，０．１％（ｖ／ｖ）氯化汞消毒５ｍｉｎ，灭菌效果最好；愈伤组织诱导的最适培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ
１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ；培养基 ＭＳ＋６－ＢＡ２．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ
＋蔗糖３０ｇ／Ｌ诱导不定芽及增殖效果最好，平均繁殖倍数９．３８，增殖率１００．０％；培养基 ＭＳ
＋ＩＢＡ１．００ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ最适合用于诱导通江百合不定芽生根，生根率可达９３．３％；
炼苗后移栽成活率９５％以上．
关键词：通江百合；种子；组织培养
中图分类号：Ｑ９４５．５，Ｓ６８２．２　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：０４９０－６７５６（２０１３）０１－０１９３－０６
Ｈｉｇｈ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｗｉｌｄ　ｌｉｌｙ
（Ｌｉｌｉｕｍ　ｓａｒｇｅｎｔｉａｅ　Ｗｉｌｓｏｎ）
ＹＩ　Ｘｉｎ，ＺＨＯＵ　Ｓｏｎｇ－Ｄｏｎｇ，ＨＥ　Ｘｉｎｇ－Ｊｉｎ
（Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｂｉｏ－Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ｅｃｏ－Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，
Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ　６１００６５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｌｅａｖｅｓ，ｐｅｔｉｏｌｅ　ａｎｄ　ｂｕｌｂｓ　ｏｆ　ｗｉｌｄ　ｌｉｌｙ（Ｌｉｌｉｕｍ　ｓａｒｇｅｎｔｉａｅ　Ｗｉｌｓｏｎ）ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ
ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　０．１％ ＨｇＣｌ２ｃｏｒｒｏｓｉｖｅ　ｓｕｂｌｉｍａｔｅ　ｆｏｒ
５ｍｉｎ　ｉｎ　ａｆｔｅｒ　ｒｅｍｏｖｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｅｅｄ　ｗｉｎｇｓ　ａｎｄ　ｓｏａｋｉｎｇ　ｉｎ　７５％ａｌｃｏｈｏｌ　ｆｏｒ　３０ｓｈａｄ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ
ｅｆｆｅｃｔ．ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ　３０ｇ／Ｌ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｃａｌｕｓ．
Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｓｈｏｏｔｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋６－ＢＡ　２．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋
ｓｕｃｒｏｓｅ　３０ｇ／Ｌ．Ｉｔｓ　Ａｖｅ．ｍｕｌｔｉｐｌｅｓ　ｏｆ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｗａｓ　９．３８ｗｈｉｌｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｒｅａｃｈｅｄ　１００％．ＭＳ
＋ＩＢＡ１．００ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ　３０ｇ／Ｌ　ｗａｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｈｏｏｔｓ　ｒｏｏｔｉｎｇ．９３．３％ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ｗｉｔｈ　ｒｏｏｔｓ　ｗｅｒｅ
ｏｂｔａｉｎｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ　ｒｅａｃｈｅｄ　９５％．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌｉｌｉｕｍ　ｓａｒｇｅｎｔｉａｅ　Ｗｉｌｓｏｎ，ｓｅｅｄ，ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ
１　引　言
通江百合（Ｌｉｌｉｕｍ　ｓａｒｇｅｎｔｉａｅ　Ｗｉｌｓｏｎ）又名泸
定百合，百合科百合属多年生草本植物，原产于四
川，生山坡草丛中，灌木林旁，海拔５００～２０００
米［１］．鳞茎富含淀粉和多种生物碱，可入药［２］．野
生植株高大，花大而香，有很高的观赏价值，且适应
性强，耐热、耐贫瘠，是重要的鲜切花和抗性育种材
　 四川大学学报（自然科学版） 　 第５０卷
料［３］．但近几年，由于人为破坏和采集，野生通江百
合居群的类型和数量已出现濒危的迹象［４］．另一
方面，野生通江百合居群数量的衰退与其繁殖方式
也有关系［５］，它在自然条件下主要依靠珠芽无性繁
殖，且繁殖效率低，而种子萌发的实生苗则需要两
至三年时间才能长成成年植株，绝大多数种子萌发
率低，即使萌发实生苗存活率也很低．
组织培养是保存通江百合种质资源的重要方
式之一，前人的研究中一般选取的材料是种球或珠
芽，存在的缺点是消毒困难污染率高［５］．本文首次
选取了野生通江百合的种子作为组织培养的材料，
因为通江百合结实率高，一个朔果内有７０～２８０粒
种子［６］，材料充足易获得且易消毒，虽然自然条件
下种子的萌发率低，但通过人为控制条件，可以解
决这一问题．本试验对野生通江百合种子进行组织
培养，并对分化、增殖、炼苗、移栽系列过程进行了
针对性研究，降低了污染率、提高了繁殖效率，对野
生通江百合种质资源的研究、可持续利用和保护，
具有十分重要的意义．
２　材料与方法
２．１　材　料
通江百合种子采集于四川省阿坝藏族羌族自
治州汶川县境内，采集地海拔１５２０ｍ，年均温
１４．１℃，年降雨量１３３０ｍｍ．所采种子室温袋装保
存于四川大学植物系统与分子进化实验室．选取颗
粒饱满、种皮完好、胚清晰、成熟的种子用于试验．
２．２　方　法
２．２．１　组织培养条件　以 ＭＳ培养基为基本培养
基，蔗糖浓度为３０ｇ／Ｌ，琼脂９．０ｇ／Ｌ，ｐＨ＝５．８，
温度 （２５±２℃），光照强度１２００ｌｘ，光照时间１４
ｈ／ｄ．
２．２．２　无菌苗的获得　取成熟种子，进行预处理：
去掉种翅，加入１∶２５０稀释的洗涤剂浸泡１５
ｍｉｎ，流水冲洗３０ｍｉｎ之后，在超净工作台上，用
７５％（ｖ／ｖ）酒精浸泡杀菌３０ｓ，无菌蒸馏水冲洗３
次．然后加入０．１％（ｖ／ｖ）氯化汞消毒５、１０、１５、２０
ｍｉｎ，用无菌蒸馏水冲洗５遍，依次记为处理组１～
４．另设处理组５（对照组），不经预处理，其他条件
与前四组一致，第５组的０．１％（ｖ／ｖ）氯化汞消毒
时间为１０ｍｉｎ．将处理好的种子播种于 ＭＳ培养
基，放入组培室培养．每个处理播种３０粒，重复３
次．５０ｄ后可获得无菌苗．
２．２．３　愈伤组织的诱导　将生长健壮的无菌苗横
切成０．５～１．０ｃｍ长的片段，分为叶片、叶柄、茎段
基部小鳞茎部分，接种于各种愈伤组织诱导培养基
上，每种培养基上接种１５个外植体，重复３次，
３０ｄ后统计诱导情况．愈伤组织诱导培养基以 ＭＳ
培养基为基本培养基，附加不同浓度组合的 ＮＡＡ
与６－ＢＡ，从中筛选出最佳愈伤组织诱导培养基．
２．２．４　不定芽的诱导及增殖　选取长势良好，疏
松黄绿色的愈伤组织，切成０．５ｃｍ３的小块，接种
于各不定芽诱导增殖培养基上，每种培养基上接种
１５个外植体，重复３次，３０ｄ后统计增殖分化情
况．不定芽诱导增殖培养基以 ＭＳ培养基为基本培
养基，附加不同浓度组合的ＮＡＡ与６－ＢＡ，从中筛
选出最佳不定芽诱导增殖培养基．外植体接种后放
于组培室培养．
２．２．５　试管苗生根培养　将丛生芽切成单株，除
掉周围愈伤组织，接种到以 ＭＳ为基本培养基，附
加不同浓度的ＩＢＡ、ＮＡＡ的外源激素配比的生根
培养基中，每种培养基上接种１５个外植体，重复３
次，３０ｄ后统计生根情况．从中筛选出最佳生根培
养基．
２．２．６　炼苗移栽　试管苗的根长到１～２ｃｍ时，
开瓶炼苗４８ｈ．取出用温水洗净培养基，移入高温
高压灭菌且２ｄ前浇透水的培养土（珍珠岩∶腐殖
土＝１∶１）中．晴天加盖遮阴网，每日喷４次水，保
持７０％相对湿度，每周喷营养液２次，喷杀菌剂１０
ｇ／Ｌ甲基托布津１次．
３　结果与分析
３．１　外植体的灭菌
前人的研究中常采取珠芽、鳞茎作为通江百合
组织培养的材料，但由于通江百合是多年生花卉，
其组织因环境侵蚀，即使经过严格消毒，污染率仍
可达５０％以上［５］．由表１可知，用种子作为组织培
养的材料大幅降低了污染率，提高了实验效率．
但是种子不经预处理而直接作为组织培养材
料还有一个问题：自然条件下野生通江百合种子萌
发率极低［５］．何丽萍等［６］曾通过控制光照、温度条
件及赤霉素处理，将萌发率提高到４５％，本试验中
通过去翅、洗涤剂浸泡等预处理将萌发率提高到
５１．１％，简单易行，可操作性强．表１中，在其他条
件一致的情况下，经过预处理的第２组萌发率
（４６．７％）明显高于未处理的第５组（８．９％），说明
通江百合种子的低萌发率可能与其外种皮有关，这
与周晓杰等［７］在百合远缘杂交种子中的研究结果
４９１
第１期 　　 易欣，等：野生通江百合高频率再生植株的研究 　
一致，其作用机制还有待研究．
表１　不同处理条件下种子的萌发情况
Ｔａｂ．１　Ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
处理组 预处理
氯化汞消毒
时间（ｍｉｎ）
接种数量 发芽数
萌发率
（％）
污染率
（％）
１ 有 ５　 ９０　 ４６　 ５１．１　 ０
２ 有 １０　 ９０　 ４２　 ４６．７　 ０
３ 有 １５　 ９０　 ３０　 ３３．３　 ０
４ 有 ２０　 ９０　 ２８　 ３１．１　 ０
５ 无 １０　 ９０　 ８　 ８．９　 ０
　　另外，从第１组到第４组，随着氯化汞消毒时
间的增加，种子的萌发率逐步下降．氯化汞是剧毒
的重金属盐杀菌剂，我们应该选择对种子影响最小
的灭菌时间．根据表１中的结果，在污染率相同的
情况下，应选择萌发率最高的作为最佳灭菌时间，
因此，用０．１％（ｖ／ｖ）氯化汞灭菌５ｍｉｎ效果最佳
（见图１ｄ）．
３．２　愈伤组织的诱导
愈伤组织诱导的外植体分为叶片、叶柄、茎段
基部小鳞茎三种，实验中观察到（见图１ｂ），叶片在
接种后１０ｄ切口部位明显增厚，２０ｄ后切口边缘
出现黄绿色愈伤组织，并不断增殖；而叶柄未脱分
化，两端切口处渐渐变黄，２０ｄ时变成深褐色，３０ｄ
时大部分叶柄发黑死掉；茎段基部的小鳞茎则诱导
出大量不定芽，生根长叶，长成无菌苗，其原因可能
为：鳞茎是极其缩短的茎、茎节的芽，组培条件下被
激活了．
表｀２中显示了细胞分裂素６－ＢＡ 和生长素
ＮＡＡ的不同配比对愈伤组织诱导的影响．细胞分
裂素的生理作用是促进细胞分裂扩大，诱导芽的分
化．生长素的生理作用是促进细胞伸长和分裂，诱
导受伤组织表面脱分化，形成愈伤组织．比较培养
基２与５、３与６不难发现，当 ＮＡＡ 的浓度不变
时，随着６－ＢＡ浓度的增加，分化趋势上升，细胞分
裂素起主导作用．而观察培养基１～３，当６－ＢＡ浓
度恒定时，随着 ＮＡＡ浓度的增加，愈伤组织诱导
率也随之上升，体现了生长素的作用．培养基４～６
不完全符合这一规律，可能是因为愈伤组织诱导还
受两种激素浓度比值影响有关［８］．
综合诱导率和愈伤生长状况，３号培养基 ＭＳ
＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／
Ｌ为最佳愈伤组织诱导培养基．
表２　不同激素组合对愈伤组织诱导的影响
Ｔａｂ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
培养基
编号
激素（ｍｇ／Ｌ）
６－ＢＡ　 ＮＡＡ
愈伤组织
诱导率（％）
愈伤生长状况
颜色状态 褐化 分化趋势
１　 １．０　 ０．２　 １３．３ 绿色、致密、小 严重 无
２　 １．０　 ０．５　 １５．５ 黄绿色、疏松、大 有 无
３　 １．０　 １．０　 ４０．０ 黄绿色、疏松、大 有 有
４　 ２．０　 ０．２　 ２２．２ 黄绿色、疏松、大 严重 无
５　 ２．０　 ０．５　 ２４．４ 绿色、疏松、大 有 有
６　 ２．０　 １．０　 １７．７ 黄绿色、疏松、大 有 明显
３．３　不定芽的诱导及增殖
表３结果显示，５种培养基都能诱导通江百合
不定芽增殖，增殖率相差不大．观察培养基９～１１
的结果可以发现，在ＮＡＡ浓度一定时，随着６－ＢＡ
浓度的上升，诱导出的不定芽增多，平均繁殖倍数
升高，细胞分裂素起主导作用．再看培养基７～８的
结果却不符合这一规律，但这也不是特例，王月
等［９］在对东方百合Ｔｉｂｅｒ的研究中就曾发现，适宜
５９１
　 四川大学学报（自然科学版） 　 第５０卷
表３　不同激素组合对不定芽诱导及增殖的影响
Ｔａｂ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ｏｎ　ｓｈｏｏｔｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
培养基
编号
激素（ｍｇ／Ｌ）
６－ＢＡ　 ＮＡＡ
接种
数
增殖
数
增殖率
（％）
出芽数
平均繁
殖倍数
褐化数
褐化率
（％）
７　 ０．５　 ０．１　 ４５　 ４２　 ９３．３　 ４１６　 ９．２４　 １７　 ３７．８
８　 １．０　 ０．１　 ４５　 ４０　 ８８．９　 ３１３　 ６．９６　 ２０　 ４４．４
９　 １．５　 ０．１　 ４５　 ４１　 ９１．１　 ２９１　 ６．４７　 １８　 ４０．０
１０　 ２．０　 ０．１　 ４５　 ４５　 １００　 ３９３　 ８．７３　 １３　 ２８．９
１１　 ２．５　 ０．１　 ４５　 ４５　 １００　 ４２２　 ９．３８　 １６　 ３５．６
的低浓度６－ＢＡ有利于不定芽的繁殖．可见生长素
与细胞分裂素对不定芽诱导和增殖的作用是复杂
的，既与其绝对浓度有关，也与其相对浓度有关，只
有按照合适的配比，才能起到促进作用．
由于组织褐化同激素水平的关系尚不明确，综
合考虑其他因素，最适宜于用作通江百合不定芽诱
导及增殖的培养基是１１号培养基 ＭＳ＋６－ＢＡ　２．５
ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ（见图１ｃ）．
３．４　试管苗生根培养
一般认为矿质元素浓度较低时有利于生根，所
以试管苗生根培养多采用１／２ＭＳ培养基，加入适
量的生长素（ＩＢＡ、ＩＡＡ、ＮＡＡ等），一般不加细胞
分裂素．借鉴前人的研究成果，在预实验中采用了
１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．１０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ，１／２ＭＳ
＋ＮＡＡ　０．２０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ，１／２ＭＳ＋ＮＡＡ
０．５０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ，ＭＳ＋ＮＡＡ　０．１０ｍｇ／Ｌ
＋蔗糖３０ｇ／Ｌ，ＭＳ＋ＮＡＡ　０．２０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０
ｇ／Ｌ，ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ培养
基，前三组以１／２ＭＳ为基本培养基中的无菌苗完
全不生根，后三组的生根率也不理想，分别如下：
ＭＳ＋ＮＡＡ　０．１０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ 生根率
１１．１％，ＭＳ＋ＮＡＡ　０．２０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ生
根率４４．４％，ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／
Ｌ生根率１７．８％，生根率并不随ＮＡＡ浓度的增加
持续上升，说明 ＮＡＡ在一定浓度范围适合生根，
过高过低都不理想．预实验结果与前人研究不符的
原因可能有两方面：一方面是不同种类的百合体内
所含内源激素水平不同；二是不同植物对激素的选
择不同或者实验对激素选择不适合．前者是客观因
素，只能从后者着手改善．
除ＮＡＡ外，ＩＢＡ也是百合试管苗生根培养中
最常用到且效果较好的生长素，因此，采用１／２ＭＳ
＋ＩＢＡ　０．２５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ，１／２ＭＳ＋ＩＢＡ
０．５０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ，ＭＳ＋ＩＢＡ　０．２５ｍｇ／Ｌ
＋蔗糖３０ｇ／Ｌ，ＭＳ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／
Ｌ进行了新一轮预实验，最终选取了 ＭＳ为基本培
养基，附加ＩＢＡ、ＮＡＡ，定期观察、记录试管苗生根
情况，３０ｄ后统计实验结果如表４．
由表４可以看出，无论是生根率、根的数量质
量还是生根时间，ＩＢＡ 诱导生根的效果都优于
ＮＡＡ．而在添加ＩＢＡ的１２～１５号培养基中，生根
率并不随着ＩＢＡ浓度的增加一直上升，当ＩＢＡ达
到０．７５ｍｇ／Ｌ时，其生根率反而下降到６２．２％，根
的数量质量也不如ＩＢＡ浓度较低的１２、１３组，但
当ＩＢＡ浓度继续上升到１．００ｍｇ／Ｌ时，生根情况
又得到改善，说明同 ＮＡＡ一样，ＩＢＡ也是在某一
特定浓度范围适合生根．在１２～１５组中，平均苗根
数最多的是１３组，其次是１５组，１３组的生根时间
也更短，但是比较两者根的形态可以发现，虽然１３
组的根也很粗壮，但１５组产生的不定根更多，更有
利于炼苗移栽时试管苗的成活，且１５组的生根率
也略高于１３组，因此选择 ＭＳ＋ＩＢＡ１．００ｍｇ／Ｌ＋
蔗糖３０ｇ／Ｌ为诱导通江百合生根的最适培养基
（见图１ｄ）．
３．５　炼苗移栽
组培获得的试管苗，长期生长在三角瓶中，适
应力差，移栽前需要开瓶炼苗４８ｈ（见图１ｅ），由人
工条件逐步过渡到自然环境，让试管苗适应从异养
到自养的过程，从而提高移栽成活率．移栽的试管
苗前期需遮阴，然后逐步增强光照，促进光合作用，
提高自养能力．３０ｄ后统计成活率达９５％以上（见
图１ｆ）．
６９１
第１期 　　 易欣，等：野生通江百合高频率再生植株的研究 　
表４　不同激素组合对试管苗生根的影响
Ｔａｂ．４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ
培养基
编号
激素（ｍｇ／Ｌ）
ＩＢＡ　 ＮＡＡ
接种数
（个）
生根数
（个）
生根率
（％）
平均苗
根数
最早生根
时间（ｄ）
试管苗长势
１２　 ０．２５ － ４５　 ３８　 ８４．４　 ５．６　 ５ 根中等粗，苗较弱
１３　 ０．５０ － ４５　 ３９　 ８６．７　 ８．２　 ６ 根粗，不定根少，苗壮
１４　 ０．７５ － ４５　 ２８　 ６２．２　 ２．８　 ５ 根细，苗弱
１５　 １．００ － ４５　 ４２　 ９３．３　 ７．２　 ７ 根粗，不定根多，苗壮
１６ － ０．１０　 ４５　 ５　 １１．１　 １．５　 １０ 根细且少，苗弱
１７ － ０．２０　 ４５　 ２０　 ４４．４　 ２．２　 ８ 根细且少，苗弱
１８ － ０．５０　 ４５　 ８　 １７．８　 １．８　 ９ 根细且少，苗弱
图１　（ａ）种子萌发情况；（ｂ）不同外植体愈伤组织诱导的情况；（ｃ）不定芽诱导及增殖情况；（ｄ）生根情况；（ｅ）
炼苗情况；（ｆ）移栽后的再生植株
Ｆｉｇ．１　（ａ）Ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，（ｂ）Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｐｌａｎｔｓ，（ｃ）Ｓｈｏｏｔｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，
（ｄ）Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｓｉｔｕａｔｉｏｎ，（ｅ）Ｈａｒｄｅｎｉｎｇ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ，（ｆ）Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｐｌａｎｔ　ａｆｔｅｒ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ
４　结　论
通过本研究得到以下结论：
１）本研究首次以野生通江百合种子萌发的无
菌苗为外植体建立了一套较为完善的组织培养再
生体系，对于进一步开展野生通江百合的转基因育
种、抗病及抗逆性育种、保存物种资源等工作奠定
了基础．在莫明雅等［１０］对黄蜀葵的研究中，也证实
了由植物种子获得无菌苗，选取无菌苗的一部分
（如茎段）为外植体建立再生体系，并研究不同激素
配比对愈伤组织诱导分化的影响，对于植物种质资
源的保护是有科研价值和实际意义的．同时，根据
前人研究的结果，大多数植物的种子不带病毒，因
此，利用种子为外植体材料进行再生培养，也为通
江百合的脱毒苗的繁育和种质资源的长期保存奠
定良好的基础．
２）通过对野生通江百合种子萌发的无菌苗的
组织培养，筛选出了最佳灭菌条件为预处理（去掉
种翅 ，１∶２５０稀释的洗涤剂浸泡１５ｍｉｎ，流水冲
洗３０ｍｉｎ）后，７５％（ｖ／ｖ）酒精浸泡杀菌３０ｓ，无菌
蒸馏水冲洗３次，然后加入０．１％（ｖ／ｖ）氯化汞消
毒５ｍｉｎ，用无菌蒸馏水冲洗５遍．愈伤组织诱导
阶段的最适培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋
ＮＡＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ，不定芽诱导及增殖
的最适培养基 ＭＳ＋６－ＢＡ２．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１
ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ，而 ＭＳ＋ＩＢＡ１．００ｍｇ／Ｌ＋
蔗糖３０ｇ／Ｌ为诱导通江百合再生苗生根的最适培
养基．炼苗后移栽时应注意遮阴，定时喷水，防止试
７９１
　 四川大学学报（自然科学版） 　 第５０卷
管苗萎蔫，浇水不可太勤，防止小鳞茎腐烂等．
３）本研究用种子萌发的无菌苗替代了通江百
合组培的传统外植体珠芽和鳞茎，有效降低了污染
率，并通过预处理，解决了种子在自然条件下萌发
率低的问题．虽然本研究中愈伤组织诱导率比传统
外植体的略低，但试验材料充足且易获得，试验成
功率高，所以对于通江百合的规模化、标准化生产，
本研究的组培再生体系相对更有优势．
４）在组织培养过程中，植物生长调节物质起
着重要的作用，一直是研究中深受关注的一个方
面．不同外植体对激素的需要量取决于它自身的内
源激素水平，这一水平又随植物种类、组织部位及
生长期等条件变动．在不定芽诱导增殖培养中，一
般用高浓度的细胞分裂素和低浓度的生长素搭配，
这样既能保证不定芽健康生长，又能保证增殖速
度［１１］．在刘红美等［１２］对广义百合科种子为外植体
组培技术研究的基础上，本试验通过不同６－ＢＡ和
ＮＡＡ的配比，筛选出了最适培养基 ＭＳ＋６－ＢＡ２．５
ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ，符合上述
规律．
５）在试验过程中外植体、愈伤组织等发生了
褐化现象，影响了试验的顺利进行．目前普遍认为
植物组织的褐变主要与外植体中酚类物质的含量
及多酚氧化酶的活性有关．影响褐变的因素有：外
植体的取材部位、取材时期、大小、受伤害程度以及
其他一些培养条件等［１３］．在本研究后期的试验中
通过加入抗氧化剂ＰＶＰ（聚乙烯吡咯烷酮）或吸附
剂活性炭等抑制褐变方法［１４，１５］，提高试验效率和
成功率．
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［责任编辑：白林含］
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