全 文 ：文章编号:1674-6309(2009)02-0161-02
·论著·
鹅绒藤总生物碱对小鼠体液免疫功能的影响
王大军 , 　王　琦 , 　王宁萍 , 　赵建宁 , 　黄　菱 , 　徐　涛
(宁夏医科大学基础学院病原生物学与免疫学教研室 , 银川　750004)
摘要:目的　研究鹅绒藤总生物碱(Cynanchum Chinense Total Alkaloid , CCTA)对正常小鼠体液免疫的影响 。方
法　给正常小鼠腹腔注射高(12.96mg/ kg)、中(6.48mg/ kg)、低(3.24mg/kg)3 个剂量的 CCTA , 每天 1 次 , 连续 7
d ,于末次给药后 12h ,眼球取血并取脾脏 ,定量溶血分光光度试验进行小鼠脾脏抗体形成细胞检测 , 对小鼠血
清溶血素进行测定。结果　CCTA高 、中剂量组抗体形成细胞 OD值及血清溶血素HC50明显高于免疫小鼠对
照组(P<0.05 , P<0.01);与 CCTA低剂量组比较 , CCTA高 、中剂量组抗体形成细胞 OD值升高(P <0.05), 血
清溶血素HC50升高(P<0.01)。结论　CCTA有提高正常小鼠体液免疫的作用。
关键词:鹅绒藤;生物碱;抗体形成细胞;小鼠
中图分类号:R967　　　文献标识码:A
收稿日期:2008-12-03
基金项目:2006年宁夏医科大学面上项目
作者简介:王大军(1972-),男 ,讲师 ,在读硕士研究生。
通信作者:王琦 ,男 ,病原生物学与免疫学教授 ,从事抗感染免疫研
究。 E-mai l:wangqi@nxmu.edu.cn
　　鹅绒藤(Cynanchum Chinense)为萝摩科鹅绒藤属(Cy-
nanchum Chinense R.Br.)植物。野生于宁夏川区各地 , 资源
极为丰富 ,夏 、秋间随用随采。鹅绒藤味苦 、性寒 , 具祛风解
毒 、健胃止痛之功效 , 全株具白色乳汁 ,民间常用鹅绒藤乳
汁治疗寻常性疣赘 ,也有用于治疗耳乳突状瘤和甲癣的报
道[ 1-2] 。国内外现有研究表明 , 鹅绒藤水浸膏有明显的降
压作用 ,其茎干乳汁冻干粉对蛙心和豚鼠离体心房表现明
显的正性肌力(强心)作用 , 鹅绒藤全草水提物和氯仿提取
物对实验小鼠有镇静催眠作用及中枢药理作用 , 而其正丁
醇提取物可增强正常小鼠细胞免疫功能[ 3-6] 。我们从鹅绒
藤全草中提取了鹅绒藤总生物碱(Cynanchum Chinense Total
Alkaloid , CCTA),研究 CCTA 对正常小鼠体液免疫功能的影
响 ,旨在对鹅绒藤的开发利用提供科学依据。
1　材料和方法
1.1　实验动物　ICR小鼠 , 体重(20±2)g ,雌雄各半 ,由宁
夏医科大学实验动物中心提供 , 实验动物质量合格证编号
为 2007019 , 实验动物许可证号为 SCXK(宁)2005-001。
1.2　仪器和药物　低温冷冻离心机(Beckman , 美国)、
VIS-7220N可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司)、恒
温水浴箱 、100 目不锈钢网 、手术器械。 RPMI-1640 培养基
为美国 Sigma 公司产品 , CCTA 由本校化学教研室指导提取
并鉴定 ,鹅绒藤生药提取 CCTA的得率为 0.097‰。
1.3　方法
1.3.1　实验动物分组与给药　ICR 小鼠(4 ～ 6 周龄 , 体重
20±2g ,雌雄各半)50 只 , 随机分为正常小鼠对照组 ,免疫小
鼠对照组 , CCTA 高剂量(12.96mg/kg)组 、中剂量(6.48
mg/kg)组 、低剂量(3.24mg/ kg)组 5 组 , 每组 10 只。正常小
鼠对照组和免疫小鼠对照组每天 1 次腹腔注射(ip)生理盐
水 0.2mL , CCTA高 、中 、低剂量组小鼠分别 ip CCTA 12.96、
6.48 、3.24mg/ kg ,每日 1 次 , 连续 7 日。于给药的第 3 天除
正常小鼠对照组以外的其余 4 组小鼠均一次性腹腔注射
5%的绵羊红细胞(SRBC)0.2mL。 第 8 天处死各组小鼠 , 体
外测定各项指标。
1.3.2　小鼠血清和脾细胞悬液的制备　眼球取血 , 室温静
置 30min , 2000 r/min 离心 10 min , 吸取血清分装 , -20℃保
存。取血后颈椎脱臼法致死小鼠 , 剪开腹部各层 , 取出脾
脏 , 剔除脂肪和结缔组织 ,放在尼纶网上 ,将尼纶网置于盛
有 Hank s液的平皿中 , 轻轻压挤脾组织 , 使单个核细胞经
网进入平皿的 Hank s 液中 , 吸取平皿中的 Hank s 液于
15mL离心管中 , 离心 2000 r/min , 5 min , 弃上清。加入 1mL
三蒸水 50s左右裂解红细胞 ,再用等量 1.8% NS 调至等渗 ,
离心 2000 r/min , 5 min , 弃上清。 随后加 Hank s 液 , 离心
2000 r/min , 5 min , 反复 2次 , 去除血小板。最后将沉淀细胞
用 1 mL完全 RPMI-1640培养液重悬 ,进行细胞计数 ,并且
用 2%台盼蓝检测活性细胞百分比(活细胞数大于 95%),
调整脾细胞悬液浓度为 5×106个/mL。
1.4　检测指标及方法
1.4.1　定量溶血分光光度法(QHS)[ 7]测定抗体形成细胞　
在 5mL的一次性离心管中加入 1mL(5×106 个/mL)的脾细
胞悬液 , 0.2%SRBC 悬液 1mL ,及 1∶10 的补体稀释液 1mL ,
摇匀后置 37℃水浴 60min(孵育期间轻摇 2 次 ,避免细胞下
沉)。取出后 3000 r/ min 离心 3min ,取上清 , 分光光度计上
波长 413nm 读吸光度(OD)值。
1.4.2　血清溶血素测定[ 8-9] 　小鼠血清做 1∶50 稀释。 在
5mL的一次性离心管中依次加入经 1∶50 稀释的小鼠血清
1mL、5%SRBC 0.5mL、10%补体 1mL ,置 37℃恒温水浴中孵
·161·
第 31卷　2期　
2009年 4月
宁夏医科大学学报
Journal of Ningxia Medical University
育30min , 然后移至冰浴中终止反应 , 1500rpm 离心 5min , 取
上清 1mL ,加都氏试剂 3mL, 摇匀放置 10min ,分光光度计于
540nm 波长比色读取 OD 值。另取 5%SRBC 0.25mL , 加入
都氏试剂 4mL, 比色读取 OD 值 , 即为实验中所用 SRBC 半
数溶血时的OD值。
　　血清溶血素含量以半数溶血值 CH50 表示 , 样品管中
半数溶血值 CH50按下式计算:
　　每只小鼠的血清 CH50=(样品的 OD值/ SRBC 半数溶
血时的OD值)×稀释倍数
1.5　统计学方法　运用 SPSS 11.5 软件进行实验数据分
析 , 各组间采用方差分析进行两两比较。
2　结果
　　与免疫小鼠对照组比较 , CCTA高 、中剂量组抗体形成
细胞 OD值增高(P <0.05 , P<0.01),血清溶血素 HC50 也
升高(P <0.01);与 CCTA 低剂量组比较 , CCTA 高 、中剂量
组抗体形成细胞 OD值升高(P <0.05), 血清溶血素 HC50
升高(P <0.01), 见表 1。
表 1　CCTA 对小鼠抗体形成细胞和血清溶血素产生的影响(n=10 , x±s)
组别 药物剂量(mg/ kg)
抗体形成
细胞 OD值
血清溶血
素 HC50
正常对照组 — 0.160±0.033 4.938±2.046
免疫对照组 — 0.509±0.073＊＊ 19.033±8.543＊＊
CCTA 低剂量组 3.24 0.529±0.090＊＊ 20.988±6.138＊＊
CCTA 中剂量组 6.48 0.607±0.100＊＊# 32.613±9.139＊＊##△
CCTA 高剂量组 12.96 0.624±0.130＊＊## 33.951±10.356＊＊##△
　与正常对照组比较＊＊P<0.01;与免疫对照组比较 , #P<0.05 , ##P<0.01;与低剂量组比较 , P<0.05, △P<0.01
3　讨论
　　鹅绒藤主含甾体皂甙和生物碱 ,可能是其具有祛风解
毒 、健骨止痛功效以及外用治疗寻常性疣赘的主要成分。
生物碱(alkaloid)是存在于植物中的碱性含氮化合物 ,往往
是许多药用植物的有效成份 ,多具有明显的生物学活性 ,如
免疫调节作用 、抗肿瘤作用及抗菌抗病毒作用等[ 10] 。
　　本研究发现 CCTA 高剂量组(12.96mg/ kg)和中剂量组
(6.48mg/kg)小鼠的抗体形成细胞 OD 值明显高于对照组
(P<0.01或 P<0.05), 同时高 、中剂量组小鼠的血清溶血
素半数溶血值 CH50 也明显高于对照组(P <0.01), 提示
高 、中剂量的 CCTA 可促进正常小鼠脾脏抗体形成细胞的
形成和血清溶血素的合成 、分泌 , 且其促进脾脏抗体形成细
胞形成与提高血清溶血素合成分泌的效果是一致的。抗体
形成细胞和血清溶血素是代表机体体液免疫功能的可靠指
标 ,因此 , 本研究提示 ,高 、中剂量的 CCTA可提高正常小鼠
体液免疫水平。
　　现有研究发现许多中药或其活性成分对机体免疫功能
呈双向调节作用 ,表现为小剂量(或低浓度)促进机体免疫
功能 ,大剂量(或高浓度)抑制机体免疫功能 。本实验结果
可以看出 , CCTA 高 、中剂量组之间的上述免疫学指标未见
统计学意义(P >0.05), 提示随着 CCTA剂量的增加 ,其正
向调节小鼠体液免疫功能的生物学活性不再增强 , 但是否
会出现抑制作用 , 还要进一步实验以证实。 曾有研究表
明[ 6] ,鹅绒藤全植株正丁醇提取物可增强正常小鼠细胞免
疫功能 ,但其增强机体细胞免疫的活性成份与本实验中的
增强体液免疫的活性成份是否相同 ,调节机制如何 ,还须进
一步研究。
参考文献:
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(责任编辑:任义芳)
(下转第170页)
·162· 宁夏医科大学学报 31 卷
Effect of Fukehuoxuezhitong Granule on Hemorheology in Acute
Blood-stasis Model Rats
HUANG Qing
1 ,MA Ying-chun 2
(1.Ningxia Med.Univ.,Yinchuan 750004;2.Gansu Institute for Drug Control ,Lanzhou 730000)
Abstract:Objective　To observation the effect of Fukehuoxuezhitong granule on hemorheology in acute blood stasis
model rats.Methods　50 female SD rats were randomly divided into five groups:normal control group , acute blood
stasis model group , Fukehuoxuezhitong granule of low-dose group(0.23g/kg), middle-dose group(0.46g/kg)and
high-dose group(0.92g/kg), all animals fed a standard diet , 3 times/d , the control group and blood stasis model
rats fed to 10ml/kg intragastric administrated saline 1 h after the last day.low-, middle- and high-dose group fed
0.23 ,0.46 ,0.91g/kg doses of Fukehuoxuezhitong granule 1h after , by gavage capacity 10mL/kg , a total of 10 d.
1 h after the last day , with the exception of the control group , other group of animals were made by soaked ice water
after injected adrenaline hydrochloride in a major dose.The blood viscosity(high , middle , low shears), blood re-
duce viscosity , plasma viscosity , hematocrit and erythrocyte aggregation index were measured with Auto-Viscometer.
Results　Compared with control group , blood stasis model group showed middle、low shear viscosity increased sig-
nificantly (P <0.05 or P <0.01), middle- and low-dose groups had a decline in the enhancement of whole blood
viscosity in rats with blood stasis(P<0.05 or P <0.01).the hematocrit and the erythrocyte aggregation index of
the blood stasis model group significantly increased as compared with control group(P<0.05 or P<0.01), In the
low-, middle- and high-dose groups , the hematocrit and the erythrocyte aggregation index decreased(P <0.05 or
P <0.01).Conclusion　Fukehuoxuezhitong granule has the fine effect to improving rat on hemorheology.
Key words:fukehuoxuezhitong granule;hemorheology;chronic pelvic inflammation disease
(上接第 162 页)
Effect of Cynanchum Chinense Total Alkaloid on Humoral
Immunity Function in Mice
WANG Da-jun ,WANG Qi ,WANG Ning-ping ,ZHAO Jian-ning ,HUANG Ling , XU Tao
(Dept.of Pathogenic Biology and Immunology ,Ningxia Med.Univ., Yinchuan 750004)
Abstract:Objective　To explore the effect of Cynanchum Chinense Total Alkaloid(CCTA)on humoral immunity
function in normal mice.Methods　CCTA which was divided into high(12.96mg/kg),medium(6.48mg/kg), low
(3.24mg/kg)was injected into abdominal cavity of mice once a day for seven days.At the time of 12 hours after
last injection , blood was taken from the eyes and spleen was taken.Spleenocytic plaque forming cell(PFC)was ob-
served by quantitative hemolytic spectrophotometry(QHS).Serum hemolysin was measured.Results　Compared
with the group of immunized mice , optical density difference(OD)of plaque forming cell(PFC)and serum
hemolysin were significantly increased in CCTA high and medium group(P<0.05 , P<0.01 respectively);Com-
pared with the CCTA low group , OD of plaque forming cell(PFC)was significantly increased (P <0.05), and
serum hemolysin was significantly increased as well(P <0.01)in CCTA high and medium group.Conclusion　
CCTA has an improving effect on humoral immunity function in normal mice.
Key words:cynanchum chinense;alkaloid;plaque forming cell;mice
·170· 宁夏医科大学学报 31 卷