全 文 ：书 ［收稿日期］ ２０１４－０５－２６；２０１４－１２－０２修回
［作者简介］ 孙骏威（１９７８－），副教授，硕士生导师，从事药用植物的组织培养与快速繁殖研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｕｖｉｌｅ＠ｃｊｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１４）１２－０７２５－００１２－０３
龙芽草组织培养和快速繁殖体系的建立
孙骏威，王飞娟，江 琼，丁艳菲
（中国计量学院 生命科学学院，浙江 杭州３１００１８）
［摘 要］为克服传统繁殖方法繁殖系数低和周期长等缺点，实现龙芽草的快速繁殖，以龙芽草（Ａｇｒｉ－
ｍｏｎｉａ ｐｉｌｏｓａ）叶片为外植体和 ＭＳ为基本培养基，利用不同生长调节物质及其组合，研究建立了龙芽草组织
培养的快速繁殖体系。结果表明：细胞分裂素可直接诱导叶片产生不定芽，ＭＳ＋ＴＤＺ ０．３ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ
２．０ｍｇ／Ｌ为适宜培养基；增殖生长需添加生长素，适宜的培养基为 ＭＳ＋ＴＤＺ ０．３ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ
２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ １．０ｍｇ／Ｌ；肌醇不影响生根，适宜生根的培养基为１／４ＭＳ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ。
［关键词］龙芽草；植物生长调节物质；组织培养；快速繁殖
［中图分类号］Ｓ５６７．２３＋９ ［文献标识码］Ａ
Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｒａｐｉｄ Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ
Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｇｒｉｍｏｎｉａ ｐｉｌｏｓａ
ＳＵＮ Ｊｕｎｗｅｉ，ＷＡＮＧ Ｆｅｉｊｕａｎ，ＪＩＡＮＧ Ｑｉｏｎｇ，ＤＩＮＧ Ｙａｎｆｅｉ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎａ Ｊｉｌｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ３１００１８，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｔｈｅ ｓｈｏｒｔｃｏｍｉｎｇｓ ｏｆ ｌｏｗ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ａｎｄ ｌｏｎｇ ｃｙｃｌｉｃａｌｉｔｙ，ａｎｄ
ｒｅａｌｉｚｅ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ Ａ．ｐｉｌｏｓａ，ｌｅａｆ ａｎｄ ＭＳ ｗｅｒｅ ｕｓｅ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ ａｎｄ ｂａｓｉｃ ｍｅｄｉｕｍ ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ
ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ
ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｉｎ ｃｏｕｌｄ ｉｎｄｕｃｅ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ
ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ ｗａｓ ＭＳ＋ＴＤＺ ０．３ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ；Ａｕｘｉｎ ｗａｓ ｎｅｅｄｅｄ ｆｏｒ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅ，
ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ＭＳ＋ＴＤＺ ０．３ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ １．０ｍｇ／Ｌ；
Ｒｏｏｔｉｎｇ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｓｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｉｎｏｓｉｔｏｌ ｈａｄ ｎｏ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｒｏｏｔｉｎｇ．Ｓｏ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｒｏｏｔｉｎｇ
ｃｕｌｔｕｒｅ ｗａｓ １／４ＭＳ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ａｇｒｉｍｏｎｉａ ｐｉｌｏｓａ；ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ；ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ；ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
龙芽草（Ａｇｒｉｍｏｎｉａ ｐｉｌｏｓａ）为蔷薇科（Ｒｏｓａｃｅ－
ａｅ）龙芽草属多年生草本植物，是一种重要的药用植
物，其地上部分、带短小根茎的冬芽和根均可入药。
其中，地上部分入药称仙鹤草，异名脱力草、狼牙草、
金顶龙牙、黄龙尾、刀口药和毛脚茵等，性平，味苦、
涩，归肺、肝、脾经，具收敛止血、消炎止痢、杀虫和抗
肿瘤之功效，临床上用于治疗嗜盐菌感染性食物中
毒、滴虫性阴道炎和梅尼埃综合症效果良好；带短小
根茎的冬芽入药称鹤草芽，异名狼牙、狼齿、狼牙子、
狼牙草根芽和仙鹤草根芽等，其性凉，味苦、涩，具驱
虫和解毒消肿之功效，主治绦虫病、阴道滴虫病、疮
疡疥癣、疖肿和赤白痢疾。临床治疗绦虫病有良效；
根入药名龙芽草根，异名地冻风，其性温，味辛、涩，
具解毒和驱虫之功效，主治赤白痢疾、疮疡、肿毒、疟
疾、绦虫病和闭经等症［１］。巴晓雨等［２］认为，龙芽草
在食品、保健品及药品等开发方面具有广阔应用前
景。目前，龙芽草主要采用种子和分根方式进行繁
殖［１］，这两种方法存在繁殖系数低和周期长等缺点；
组织培养具有繁殖速度快、保留母本优良性状和根
据需要分化出根和芽，也是龙芽草转基因育种的前
提和基础。龙芽草组织培养研究仅见吴美芬和陈伟
东［３］的研究简报，组织培养过程花费时间长，且无相
关数据说明。为此，笔者以龙芽草（Ａｇｒｉｍｏｎｉａ ｐｉ－
ｌｏｓａ）叶片为外植体和 ＭＳ为基本培养基，利用不同
生长调节物质及其组合，研究建立了龙芽草组织培
养的快速繁殖体系，以期为实现龙芽草的快速繁殖
奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 材料
龙芽草，采自浙江省丽水市白云山，移栽种植于
中国计量学院网室，经浙江中医药大学鉴定为仙鹤
草的原植物（Ａｇｒｉｍｏｎｉａ ｐｉｌｏｓａ Ｌｅｄｅｂ．），即龙芽
草。
１．２ 不定芽诱导预试验
取刚发育成熟的龙芽草羽状复叶中的较大小
叶，加适量洗涤剂仔细刷洗，再用流水冲洗０．５～
１．０ｈ后，在超净台将叶片转入０．２％ ＨｇＣｌ２溶液内
消毒５～６ｍｉｎ，用无菌水冲洗４～５次，然后将叶片
切成１～３ｃｍ２的小块，以正面朝上的水平摆放方式
贵州农业科学 ２０１４，４２（１２）：１２～１４
Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
接种到添加不同植物生长调节物质的 ＭＳ培养基
上，每瓶分别接种３个外植体，植物生长调节物质的
组成：１）２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ；２）６－
ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ；３）ＴＤＺ ０．３ｍｇ／
Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ；４）ＴＤＺ ０．０５ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ
２．０ｍｇ／Ｌ；５）ＴＤＺ ０．３ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ。
重复３次。所有培养基中蔗糖浓度为３％，琼脂浓
度为０．７％，ｐＨ ５．８～６．０，下同。先进行暗培养，温
度为（２５±１）℃，培养条件为１４ｈ光／１０ｈ暗，光照
强度３０～４０μｍｏｌ／（ｍ·ｓ），下同。平时观察外植体
生长情况并记录，在３０ｄ时随机抽出１０瓶进行统
计，并筛选出较佳的植物生长调节物质组合进行优
化。
１．３ 试验方法
１．３．１ 不定芽诱导的植物生长调节物质组合的优
化 根据预试验的筛选结果，ＴＤＺ和６－ＢＡ各设置
３个浓度梯度，分别为０．１ｍｇ／Ｌ、０．３ｍｇ／Ｌ、１．０
ｍｇ／Ｌ和０．５ｍｇ／Ｌ、２．０ｍｇ／Ｌ、５．０ｍｇ／Ｌ，配制 ＭＳ
培养，将外植体接种于其上，３０ｄ随机取１０瓶进行
统计。
１．３．２ 不同生长调节物质组合对增殖生长的影响
在１．３．１试验中虽然可以诱导出不定芽，但在继代
培养中发现不定芽生长缓慢，３０ｄ时很少＞２ｃｍ，
很难用于生根试验，故在增殖生长培养中添加不同
浓度ＩＡＡ／ＮＡＡ进行增殖生长试验。将１．３．１优
化得到的不定芽丛，切成２～３株，接种额外再添加
不同浓度ＩＡＡ（０，０．２ｍｇ／Ｌ，０．５ｍｇ／Ｌ，１．０ｍｇ／Ｌ，
２．０ｍｇ／Ｌ）或 ＮＡＡ（０，０．０５ｍｇ／Ｌ，０．１ｍｇ／Ｌ，０．２
ｍｇ／Ｌ，０．５ｍｇ／Ｌ）的优化培养基中。３０ｄ随机抽出
１０瓶进行统计。
１．３．３ 再生植株的生根培养和移栽 在１．３．２的
培养过程中，观察到添加 ＮＡＡ后的培养基中出现
很多的生根苗，故在生根过程中添加 ＮＡＡ的同时
设置 ＭＳ和肌醇浓度。并根据１．３．２的筛选结果，
切取叶片嫩绿、生长旺盛且２～３ｃｍ高的不定芽，插
入到生根培养基中，各设置３个浓度梯度的基本培
养基（ＭＳ、１／２ＭＳ和１／４ＭＳ）、ＮＡＡ（０、０．１ｍｇ／Ｌ
和０．５ｍｇ／Ｌ）和肌醇（０，１／２，１），３０ｄ时随机抽出
１０瓶进行统计生根率。炼苗时可微开培养瓶盖进
行炼苗，１ｄ后取出并洗净根部附着的培养基，移入
土中，土为小粉土，初期要做好保湿措施，并置于阴
凉处，待新叶长出，即可除去烧杯，同时统计移栽成
活率。
１．４ 数据处理
所有数据分析采用ＳＰＳＳ Ｖ１６．０进行，终值以
平均值±标准误差（ＳＤ）表示。
２ 结果与分析
２．１ 对龙芽草外植体不定芽诱导率的影响
从表１看出，添加２，４－Ｄ的培养基中未产生不
定芽，而其余３种培养基中均诱导出不定芽，但不定
芽出现的时间不一，以添加ＴＤＺ ０．３ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ
２．０ｍｇ／Ｌ诱导出不定芽的时间最短，诱导率最高；
而添加６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ诱导出
不定芽的时间最长，诱导率最低。故在最佳不定芽
诱导 的 筛 选 中 选 择 ＴＤＺ ０．３ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ
２．０ｍｇ／Ｌ。同时，在培养过程中观察发现，添加２，
４－Ｄ的培养基中只见较小的愈伤组织，而在产生不
定芽的培养基中发现，一定时间后其部分叶盘基部
膨大，边缘翘起，叶片切口处有类似愈伤组织的绿色
物质形成，且基部多于端部，并随着培养时间的增加
而更加明显，出现不定芽最多的部分是着生叶柄处。
表１ 不同植物生长调节物质组合龙芽草外植体不定芽的诱导率
Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ
植物生长调节剂
Ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ
组合 浓度／（ｍｇ／Ｌ）
不定芽诱导出芽时间／ｄ
Ｂｕｄｄｉｎｇ ｔｉｍｅ
不定芽诱导率／％
Ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ
２，４－Ｄ＋６－ＢＡ ２．０＋０．５ － ０
６－ＢＡ＋ＮＡＡ ２．０＋０．１ ２５ １２．２±１．９ｃ
ＴＤＺ＋ＮＡＡ ０．３＋０．１ １７ ６５．６±５．１ｂ
ＴＤＺ＋２，４－Ｄ ０．３＋２．０ － ０
ＴＤＺ＋６－ＢＡ ０．３＋２．０ １３ ８３．３±３．３ａ
注：１）同列中不同小写字母表示Ｐ＜０．０５的显著差异水平（下同）；２）“－”表示未出芽。
Ｎｏｔｅ：１）Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ５％ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｌｅｖｅｌ；２）“－”ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｎｏ ｂｕｄｄｉｎｇ．
从表２可知，随着ＴＤＺ和６－ＢＡ浓度的升高，
不定芽诱导率和诱导数呈快速上升的趋势，但在高
浓度时有所下降。２个植物生长调节物质的叠加效
应也非常明显，尤其是低浓度时效果更好；但高浓度
的ＴＤＺ和６－ＢＡ会产生玻璃化问题，两者也有叠加
效应，最高浓度的 ＴＤＺ和６－ＢＡ组合，其玻璃化最
严重。适中的ＴＤＺ和６－ＢＡ的玻璃化程度较低，且
不 定 芽 诱 导 率 和 诱 导 数 较 高，尤 以 ＴＤＺ
０．３ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ组合效果较好。
２．２ 对龙芽草外植体不定芽生长的影响
从表３看出，随着ＩＡＡ浓度的升高，不定芽的
增殖率提高，生长加快，并在浓度为１ｍｇ／Ｌ基本到
达稳定，但 ＮＡＡ对增殖率和不定芽生长势的影响
均不大。同时，在试验过程中还观察发现，随着
·３１·
孙骏威 等 龙芽草组织培养和快速繁殖体系的建立
ＳＵＮ Ｊｕｎｗｅｉ ｅｔ ａｌ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｒａｐｉｄ Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｇｒｉｍｏｎｉａ ｐｉｌｏｓａ
表２ ＴＤＺ与６－ＢＡ组合龙芽草外植体不定芽的诱导率
Ｔａｂｌｅ ２ Ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＴＤＺ ａｎｄ ６－ＢＡ
植物生长调节剂组合
Ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ
ＴＤＺ／（ｍｇ／Ｌ） ６－ＢＡ／（ｍｇ／Ｌ）
不定芽诱导率／％
Ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ
不定芽诱导数／个
Ｉｎｄｕｃｅｄ ｑｕａｎｔｉｔｙ
玻璃化程度
Ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｄｅｇｒｅｅ
０．１ ０．５ ４１．１±１．９ｅ ３．３±０．２ｇ －
０．１ ２．０ ５２．２±１．９ｄ ４．０±０．２ｆ －
０．１ ５．０ ５７．８±３．８ｄ ４．８±０．１ｅ ＋
０．３ ０．５ ７０．０±３．３ｃ ５．６±０．１ｄ －
０．３ ２．０ ８５．６±１．９ａｂ ７．４±０．２ａ －
０．３ ５．０ ８８．９±１．９ａ ７．７±０．２ａ ＋＋
１．０ ０．５ ８７．８±１．９ａ ６．２±０．１ｃ ＋＋
１．０ ２．０ ８２．２±１．９ｂ ６．８±０．１ｂ ＋＋＋
１．０ ５．０ ８０．０±３．３ｂ ６．８±０．２ｂ ＋＋＋＋
注：“－”、“＋”、“＋＋”、“＋＋＋”、“＋＋＋＋”表示玻璃化程度不断严重。
Ｎｏｔｅ：“－”，“＋”，“＋＋”，“＋＋＋”ａｎｄ“＋＋＋＋”ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈｅ ａｇｇｒａｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｄｅｇｒｅｅ．
表３ 添加不同浓度ＩＡＡ／ＮＡＡ龙芽草外植体不定芽的增殖率
Ｔａｂｌｅ ３ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ＩＡＡ／ＮＡＡ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
ＩＡＡ浓度／（ｍｇ／Ｌ）
ＩＡＡ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ＮＡＡ浓度／（ｍｇ／Ｌ）
ＮＡＡ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
增殖率／％
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ
不定芽生长势
Ｇｒｏｗｔｈ ｖｉｇｏｒ
０ － ４．０３±０．１０ｄ ＋
０．２ － ４．０９±０．０５ｃｄ ＋
０．５ － ４．２１±０．１０ｂｃ ＋＋
１．０ － ４．３４±０．０７ａｂ ＋＋＋
２．０ － ４．３９±０．０８ａ ＋＋＋
－ ０．０５ ４．０９±０．０５ｃｄ ＋
－ ０．１ ４．０４±０．０７ｄ ＋
－ ０．２ ４．０８±０．０８ｃｄ ＋
－ ０．５ ４．１４±０．０８ｃｄ ＋
注：“－”表示未添加；“＋”、“＋＋”、“＋＋＋”表示不定芽生长势不断增强。
Ｎｏｔｅ：“－”ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｎｏ ａｄｄｉｎｇ；“＋”，“＋＋”ａｎｄ“＋＋＋”ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｇｒｏｗｉｎｇ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｖｉｇｏｒ．
表４ 不同处理龙芽草外植体不定芽的生根培养与移栽成活率
Ｔａｂｌｅ ４ Ｒｏｏｔｉｎｇ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ
序号
Ｎｏ．
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ＭＳ ＮＡＡ／（ｍｇ／Ｌ） 肌醇
生根率／％
Ｒｏｏｔｉｎｇ
ｒａｔｅ
根数／条
Ｒｏｏｔ
ｑｕａｎｔｉｔｙ
根长
Ｒｏｏｔ
ｌｅｎｇｔｈ
根粗
Ｒｏｏｔ
ｄｉａｍｅｔｅｒ
移栽成活率／％
Ｓｕｒｖｉｖａｌ
ｒａｔｅ
１ １ ０ ０ ８８±２ｄ １．９±０．６ｄ ＋ ＋ ９４±２ａ
２ １ ０．１ １／２ ９４±２ａｂｃ ３．７±０．４ｃ ＋＋ ＋＋ ９６±２ａ
３ １ ０．５ １ ９０±３ｃｄ ５．２±０．５ｂ － ＋＋＋＋＋ ８２±５ｂ
４ １／２ ０ １／２ ９０±３ｃｄ ２．１±０．２ｄ ＋＋ ＋ ９４±２ａ
５ １／２ ０．１ １ ９６±２ａｂ ４．０±０．４ｃ ＋＋＋ ＋＋ ９７±３ａ
６ １／２ ０．５ ０ ９３±３ａｂｃ ５．８±０．３ａｂ ＋ ＋＋＋＋ ８０±７ｂ
７ １／４ ０ １ ９３±３ａｂｃ ２．２±０．１ｄ ＋＋＋＋ － ９４±２ａ
８ １／４ ０．１ ０ ９８±２ａ ４．７±０．３ｂ ＋＋＋ ＋ ９６±４ａ
９ １／４ ０．５ １／２ ９１±４ｂｃｄ ６．１±０．２ａ ＋ ＋＋＋ ８１±５ｂ
ＩＡＡ或ＮＡＡ浓度的增加，不定芽底部出现少量的
愈伤组织。
２．３ 对龙芽草外植体不定芽生根与移栽成活率的
影响
从表４可知，龙芽草生根容易，各处理的生根率
均超过８８％。随着 ＭＳ浓度降低，生根率提高，根
数量增加，变长，变细；而随着ＮＡＡ浓度的增加，生
根率呈先上升再下降的趋势，根的数量呈先增加再
减少的趋势，根的长度也呈先增加后减少的趋势，但
根的粗度则呈增加的趋势。但肌醇的浓度对于生根
培养 影 响 不 大。各 处 理 的 生 根 时 间 相 近，以
１／４ＭＳ＋ＮＡＡｍｇ／Ｌ最短（６ｄ），以 ＭＳ最长（８ｄ）；
但移栽成活率存在一定的差异，高浓度（０．５ｍｇ／Ｌ）
ＮＡＡ培养时，虽然根的数量增加，但木质化明显，
变得粗而硬，移栽成活率反而降低，并显著低于其他
的处理；ＭＳ和肌醇不同浓度对再生苗的移栽成活
率之间无明显差异，均达９５％左右。故综合生根
率、根数、根长、根粗和移栽成活率，适宜的生根培养
基为１／４ＭＳ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ，如果考虑成本因
素，可不添加肌醇。
３ 小结与讨论
１）本研究结果表明，诱导不定芽的适宜培养基
为 ＭＳ＋ＴＤＺ ０．３ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ；增殖生
长适宜的培养基为 ＭＳ＋ＴＤＺ ０．３ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ２．０
ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ １．０ｍｇ／Ｌ；组培苗生根的适宜培养基
为１／４ＭＳ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ。
（下转第１９页）
·４１·
贵 州 农 业 科 学
Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
个玉米自交系的遗传多样性［Ｊ］．玉米科学，２００７，１５
（６）：１９－２６．
［５］ Ｈａｌ Ｌａｕｅｒ Ａ Ｒ，Ｓｐｒａｇｕｅ Ｇ Ｆ，Ｄｕｄｌｅｙ Ｊ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｒｎ
ｂｒｅｅｄｉｎｇ ａｎｄ ｃｏｍ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ［Ｍ］．３ｒｄ ｅｄｕ．Ａｇｒｏｎ－
ｏｍｙ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ １８，Ａｍｅｒｙ－ｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｇｒｏｎｏｍｙ
Ｍａｄｉｓｏｎ，１９８８．
［６］ 吴渝生，郑用琏，孙 荣，等．基于ＳＳＲ标记的云南糯
玉米、爆裂玉米地方种质遗传多样性研究［Ｊ］．作物学
报，２００４，３０（１）：３６－４２．
［７］ 彭泽斌，刘新芝．我国玉米杂种的现状评价［Ｊ］．安徽
农业科学，１９９４，２２（３）：９７－９９．
［８］ 袁力行，傅骏骅，张世煌，等．利用ＲＦＬＰ和ＳＳＲ划分
玉米自交系杂种优势群的研究［Ｊ］．作物学报，２００１，
２７（２）：１４９－１５６．
［９］ 刘志斋，吴 讯，刘海利，等．基于４０个核心ＳＳＲ标
记揭示的８２０份中国玉米重要自交系的遗传多样性
与群体结构［Ｊ］．中国农业科学，２０１２，４５（１１）：２１０７－
２１３８．
［１０］ 王兵伟，覃嘉明，黄安霞，等．ＳＳＲ分子标记分析６０份
玉米自交系的遗传多样性［Ｊ］．西南农业学报，２０１４，
２７（４）：１３５８－１３６２．
［１１］ 王凤格，田红丽，赵久然，等．中国３２８个玉米品种（组
合）ＳＳＲ标记遗传多样性分析［Ｊ］．中国农业科学，
２０１４，４７（５）：８５６－８６４．
［１２］ 辛景树．杂交玉米品种ＤＮＡ指纹图谱［Ｍ］．北京：中
国农业科学技术出版社，２００４：１９５－１９６．
［１３］ Ｓｍｉｔｈ Ｊ Ｓ Ｃ．Ａｎ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｕｔｉｌｉｔｙ ｏｆ ＳＳＲ ｌｏｃｉ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｍａｉｚｅ（Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ．）ｃｏｍｐａｒｉ－
ｓｏｎｓ ｗｉｔｈ ｄａｔａ ｆｒｏｍ ＲＦＬＰＳ ａｎｄ ｐｅｄｉｇｒｅｅ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒ．
Ａｐｐ１．Ｇｅｎｅｔ．１９９７，９５：１６３－１７４．
［１４］ Ｌｉｕ Ｋ．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｍｏｎｇ ｍａｉｚｅ
ｉｎｂｒｅｄ ｌｉｎｅｓ ｉｎｆｅｒｒｅｄ ｆｒｏｍ ＤＮＡ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅｓ［Ｊ］．
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００３，１６５：２１１７－２１２８．
［１５］ Ｍａｒｏｏｆ Ｍ Ａ Ｓ，Ｂｉｙａｓｈｅｖ Ｒ Ｍ，Ａｌａｒｄ Ｒ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｅｘ－
ｔｒａ－ｏｒｄｉｎａｒｉｌｙ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ ＤＮＡ ｉｎ ｂａｒ－
ｌｅｙ．ｓｐｅｃｉｓ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｌｏｃａｔｉｏｎｓ，ａｍｉｄ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｄｙｎａｍｏｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔａｌ Ａｃｅｄ Ｓｃｉ，１９９４，
９１：５４６６－５４７０．
（责任编辑：姜 萍
櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁
）
（上接第１４页）
２）ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ可
直接诱导叶片产生不定芽，而添加２，４－Ｄ不能直接
诱导产生不定芽，但６－ＢＡ的诱导效率远不如ＴＤＺ。
吴美芬和陈伟东［３］研究发现，龙芽草实生苗的各种
外植体，叶片／下胚轴需经２，４－Ｄ、子叶可经 ＭＳ＋
６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ诱导愈伤组织后
才能分化出不定芽。有研究报道，ＴＤＺ作为细胞分
裂素的活性是６－ＢＡ的５０倍、异戊烯腺嘌呤（Ｚｉｐ）的
１ ０００倍［４］。本研究还发现，ＴＤＺ和６－ＢＡ对龙芽草
诱导不定芽有叠加效应，但高浓度时发生玻璃化现
象上。组培苗玻璃化在组织培养中普遍存在，６－ＢＡ
或ＮＡＡ浓度的增加均可加重玻璃化，且程度会因
植物和品种不同而存在差异［５］。在本研究中发现，
高浓度ＴＤＺ（１ｍｇ／Ｌ）培养玻璃化现象明显。故在
诱导龙芽草不定芽时避免使用高浓度的ＴＤＺ或６－
ＢＡ。
３）本研究结果表明，ＴＤＺ＋６－ＢＡ虽然诱导不
定芽效率较高，但产生速度缓慢，故增殖生长中添加
生长素ＩＡＡ／ＮＡＡ，其对增殖率的影响极小，２．０
ｍｇ／Ｌ ＩＡＡ比不添加ＩＡＡ／ＮＡＡ只提高１０％以下，
而０．５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ仅提高２．５％；但生长素ＩＡＡ／
ＮＡＡ可促进不定芽的生长，ＩＡＡ效果优于 ＮＡＡ。
这与黄秋葵的组织培养研究结果相一致［６］。同时，
与很多植物［７］一样，低浓度的生长素有利于不定芽
的生长，高浓度的生长有利于愈伤组织的生长。
４）试管苗生根是一个从异养状态进入自养状
态的过程，常通过降低培养基的营养元素质量浓度
来提高生根率。随着 ＭＳ浓度的下降，生根率有所
提高，根的数量和长度也随之增加，更有利于根的吸
收。徐涌等［８］研究表明，吴茱萸组织培养中添加肌
醇对生根具有促进作用，本研究中肌醇对龙芽草组
培苗生根影响并不大与之不同。使用ＮＡＡ有助于
龙芽草组培苗生根，但过高和过低的浓度均不利于
生根和移栽。
［参 考 文 献］
［１］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草
［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９９９．
［２］ 巴晓雨，何永志，路 芳，等．仙鹤草研究进展［Ｊ］．辽
宁中医药大学学报，２０１１，１３（５）：２５８－２６１．
［３］ 吴美芬，陈伟东．龙芽草的组织培养［Ｊ］．植物生理学
通讯，１９８６（４）：５６．
［４］ 徐晓峰，黄学林．ＴＤＺ：一种有效的植物生长调节剂
［Ｊ］．植物学通报，２００３，２０（２）：２２７－２３７．
［５］ 龚明霞，陈小凤，方锋学，等．洋桔梗组培苗玻璃化原
因及恢复的研究［Ｊ］．西南农业学报，２００９，２２（６）：
１７１８－１７２１．
［６］ 孙骏威，方晓峰，陈 珍．不同植物生长调节剂对黄秋
葵组织培养的影响［Ｊ］．北方园艺，２０１２（７）：１３９－１４１．
［７］ 王婧宇，张雪平，杨 如，等．生长素在芦笋组培扩繁
体系中的影响［Ｊ］．华东师范大学学报：自然科学版，
２０１０（６）：１０１－１０８．
［８］ 徐 涌，孙骏威，陈 珍．不同植物生长调节物质处理
对吴茱萸组织培养的影响［Ｊ］．浙江农林大学学报，
２０１１，２８（３）：５００－５０４．
（责任编辑：杨 林）
·９１·
邸仕忠 等 基于ＳＳＲ标记的玉米自交系遗传多样性
ＤＩ Ｓｈｉｚｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍａｉｚｅ Ｉｎｂｒｅｄ Ｌｉｎｅｓ ｉｎ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ