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磨盘草提取物的抗氧化活性研究



全 文 :第 35 卷第 6 期
2016 年 12 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Resources
Vol. 35 No. 6
Dec. 2016
doi:10. 3969 / j. issn. 1006 - 9690. 2016. 06. 009
收 稿 日 期:2016 - 03 - 28
基 金 项 目:2015 年自治区级大学生创新创业训练计划立项项目(201510599042) ;国家中医药管理局“十二五”中医药重点
学科中药化学建设项目(国中医药人教发{[2012]32 号) ;广西重点学科药物化学建设项目(桂教科研[2013]16
号) ;广西高校科技创新能力提升工程建设项目(桂教科研〔2015〕5 号) ;广西高校右江流域特色民族药研究重
点实验室开放课题(kfkt2016035)。
作 者 简 介:郑鸿娟(1993—) ,女,壮族,右江民族医学院学生。E - mail:zhenghongjuangx@ 163. com
* 通讯作者:黄锁义(1964—) ,男,教授,硕士生导师,主要从事医用化学的教学和科研工作,研究方向:食品卫生、天然产物化
学、药物化学。E - mail:huangsuoyi@ 163. com
磨盘草提取物的抗氧化活性研究
郑鸿娟1,黄春阳1,齐梁煜1,张 航1,李兆叠1,黄月维1,钟兆银2,黄锁义2,3*
(1.右江民族医学院 临床医学院,广西 百色 533000;2.右江民族医学院 药学院,广西 百色 533000;
3.右江流域特色民族药研究广西高校重点实验室,广西 百色 533000)
摘 要 目的:探究磨盘草乙醇提取物和甲醇提取物的抗氧化活性。方法:检测磨盘草乙醇提取物和甲醇提取物
清除 DPPH 自由基能力和还原 Fe3 +能力,评价并对比不同提取方法所得物质的抗氧化活性。结果:磨盘草乙醇提
取物和甲醇提取物对 DPPH自由基均具有较强的清除作用和较显著的还原 Fe3 +能力,且随着提取液质量浓度的增
加而增强。结论:磨盘草乙醇提取物和甲醇提取物均具有较强的抗氧化活性且与浓度呈现良好的量效关系。在一
定质量浓度下乙醇提取物清除 DPPH·能力比甲醇提取物强,甲醇提取物的还原 Fe3 +能力比乙醇提取物强。
关键词 磨盘草;提取物;抗氧化活性
中图分类号:Q946 文献标识码:A 文章编号 1006 - 9690(2016)06 - 0035 - 04
Study on Antioxidant Effect of the Extracts from
Abutilon indicum (L.)Sweet
Zheng Hongjuan1,Huang Chunyang1,Qi Liangyu1,Zhang Hang1,Li Zhaodie1,
Huang Yuewei1,Zhong Zhaoyin2,Huang Suoyi2,3*
(1. College of Clinical Medicine,Youjiang Medicine University for Nationalities,Baise 533000,China;
2. College of Pharmacy,Youjiang Medicine University for Nationalities,Baise 533000,China;
3. Key Laboratory of Guangxi Universities on National Medicine in Youjiang River Basin,Baise 533000,China)
Abstract Objective:Study on antioxidant effect of the extracts of ethanol and methanol from Abutilon in-
dicum (L.)Sweet. Method:Clearance ability of the extracts of ethanol and methanol from Abutilon indi-
cum (L.)Sweet on DPPH· and the reduction of Fe3 + ability were measured with the spectrophotome-
try. To evaluate and compare the antioxidant activity of the extracts from different methods. Results:Ex-
periments showed that the extracts of ethanol and methanol from Abutilon indicum (L.)Sweet had great
effect on clearance of DPPH· and Reduction Fe3 +,and its effect increases with increasing concentration.
Conclusion:Ethanol extract and methanol extract of Abutilon indicum (L.)Sweet have strong antioxidant
activity ,and the concentration showed good dose effect relationship. In a certain mass concentration,eth-
anol extract is stronger than methanol extract about clearance ability on DPPH·. Methanol extract is bet-
ter than ethanol extract on the reduction of Fe3 + ability.
Key words Abutilon indicum (L.)Sweet;extracts ;antioxidant activity
磨盘草为锦葵科苘麻属植物磨盘草[Abutilon
indicum (L.)Sweet],异名为金花草、唐挡草、耳响
草、帽笼子、磨笼子、磨盆草、印度苘麻、牛响草、白
麻、米兰草、研仔盾草等。全草或根入药,甘淡平,
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 35 卷
疏风清热、化痰止咳、消肿解毒,用于感冒、发热、咳
嗽、中耳炎、腮腺炎、耳聋、咽痛炎、尿路感染、疮痈肿
痛、跌打损伤。生于砂地、旷野或路旁,分布于广西、
广东、贵州、云南、福建、台湾等地[1]。经研究全草
含有萜类、甾类、酚类、黄酮苷、氨基酸、有机酸和糖
等[2 - 3]。磨盘草适应性广,生长条件要求不高,药用
价值高,有一定的开发利用前景。经文献调研,目前
国内外对于磨盘草的研究主要集中于其成分的分
析[3 - 5],对其提取物体外抗氧化活性的相关研究很
少见,限制了磨盘草的深度开发和利用。为此,本文
采用 DPPH 自由基和 Fe3 +还原力的不同体外抗氧
化模型,以其还原力和清除自由基能力为指标,评价
并对比磨盘草乙醇提取物和甲醇提取物的抗氧化活
性,以期进一步优化与扩展磨盘草的研究和综合利
用价值,为完善磨盘草的临床应用和开发新型功能
提供实验依据。
随着抗氧化剂的蓬勃发展,对抗氧化剂的要求
也越来越高,天然产物作为重要的抗氧化剂,可以低
毒、高效的清除体内过量的自由基,以预防衰老并治
疗自由基引发的相关疾病,对维持人民群众的健康
生活起到重要保障作用[6],从天然植物中寻找体内
自由基消除剂将是现代医药和保健行业的发展趋
势。因此,本研究对磨盘草采取不同的提取方法并
探索其提取物的对自由基的清除,通过比较抗氧化
活性的强弱得出较佳的提取方法,这不仅开拓磨盘
草在现代医药、保健行业的应用还可扩大天然抗氧
化剂来源的范围,为获取天然植物抗氧化剂的相关
研究提供实验依据。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 仪器
高速万能粉碎机(FW100) (天津泰斯特仪器
有限公司) ,FA1204B 电子天平(上海天美天平仪
器有限公司) ,电热式恒温水浴锅(箱) (江苏金坛
宏凯仪器厂) ,回流装置,循环水真空抽气泵(上海
嘉鹏科技有限公司) ,RE - 5299 旋转蒸发器(上海
振捷实验设备有限公司) ,电热恒温鼓风干燥箱(上
海精宏实验设备有限公司) ,752N 紫外可见分光光
度计(上海精科实业有限公司)。
1. 1. 2 试药
磨盘草(购自百色市右江区,由右江民族医学
院民族医学教研室覃道光副教授鉴定) ;无水乙醇,
甲醇,1,1 -二苯基 - 2 -三硝基苦肼(DPPH,南京
建成生物工程研究所) ,十二水合磷酸氢二钠、磷酸
二氢钠、三氯乙酸(TCA)、三氯化铁、铁氰化钾等
均为分析纯,试验用水为蒸馏水。
1. 2 实验方法
1. 2. 1 提取物的制备
称取磨盘草干燥粉末 100 g 置于圆底烧瓶,以
料液比 1∶ 10 量取 95%乙醇 1 000 mL 加入浸泡 1h
后水浴加热回流提取 2h,冷却抽滤,回收滤液,用旋
转蒸发仪减压浓缩至 20 ~ 40 mL后水浴制成浸膏备
用。称定质量,用 95%乙醇稀释成不同浓度的磨盘
草乙醇提取液,根据以上方法制备不同浓度的磨盘
草甲醇提取液。
1. 2. 2 清除 DPPH 自由基能力的测定[7]
取 5 支 10 mL 具塞比色管,各加入新配置的 6
× 10 -4mol /L DPPH溶液 0. 5 mL,分别加入质量浓
度 0. 5、0. 6、0. 7、0. 8、0. 9、1. 0 mg /mL的样品液 1. 0
mL,加无水乙醇定容至 5 mL,暗光反应 30 min,以无
水乙醇调零,在517 nm处测定吸光度值A(n = 3) ,
根据计算公式计算其清除率:
清除率 =[(A1 - A2)/A1]× 100%
其中 A1 为空白吸光度(t = 0 min) ,A2 为反应
30 min 后的吸光度。
1. 2. 3 还原力的测定[8]
采普鲁士兰法[8]测定。取 5 支大试管,分别移
取 1 mL不同浓度的磨盘草多糖样品溶液,加 2. 5
mL pH =6. 6 磷酸盐缓冲溶液和 2. 5 mL 1%铁氰化
钾溶液,混合后,于 50 ℃恒温水浴锅内放置 20 min
后,继续加入 2. 5 mL 质量分数为 10%的三氯乙酸
溶液,若有沉淀物则需离心(4. 0 × 103 r /min,10
min) ,取上清液 2. 5 mL,加入 2. 5 mL 蒸馏水和 2. 5
mL 0. 1%三氯化铁溶液,混匀,静置 10 min,于波长
为 700 nm处测定吸光度 A。
2 结果与分析
2. 1 清除 DPPH 自由基能力
DPPH·是一种稳定的自由基,与氧化剂发生反
应,提供 H 被还原,颜色发生变化,由深紫色变为淡
黄色,可用紫外分光光度法测定,吸光度值越小其清
除率越大。以高浓度逐渐稀释的方式检测不同样品
溶液对自由基的清除率,以自由基清除率为 50%时
样品的浓度(IC50)来衡量样品对自由基的清除能
力。IC50越小,表明样品清除自由基的能力越强。
实验结果如图 1,随着提取液浓度的增加,对 DPPH·
的清除率呈上升趋势,存在一定的量效关系,表明磨
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第 6 期 郑鸿娟,等:磨盘草提取物的抗氧化活性研究
盘草提取物具有较显著的抗氧化活性。经比较可知
当 DPPH·清除率接近 50% 时乙醇样品液的浓度(
IC50)为 0. 6 mg /mL,甲醇样品液的浓度为 0. 7 mg /
mL,表明磨盘草乙醇提取物清除 DPPH·的能力比
甲醇提取物强。
图 1 磨盘草提取液对 DPPH 自由基的清除能力
2. 2 还原 Fe3 +能力
还原力的测定是检验样品是否是良好的电子供
体的方法,还原力强的样品应该是良好的电子供体
者,它供应的电子能使 Fe3 +还原为 Fe2 +。还原力
的测定是用来评价抗氧化剂活性的常用方法,吸光
度越高则说明该物质的抗氧化能力越强。采用普鲁
士兰法测定不同提取方法所得样品液还原 Fe3 +能
力,结果如图 2。随着磨盘草提取物浓度的增加,其
吸光度值呈逐渐递增趋势,还原 Fe3 + 能力逐渐增
强,在相同质量浓度下甲醇提取物所测的吸光度值
均大于乙醇提取物所测得数据。磨盘草 95%乙醇
提取物、甲醇提取物还原 Fe3 +能力的回归方程分别
为 A = 0. 204 5C + 0. 086 9(R2 = 0. 996 8) ,A = 0. 191
5C + 0. 159 5 (R2 = 0. 989 9) ,因此可说明磨盘草不
同提取液均具有较强还原 Fe3 +的能力,且甲醇提取
物的能力优于乙醇提取物。
图 2 磨盘草提取液还原 Fe3 +能力
3 讨 论
通过对 DPPH 自由基的清除和还原 Fe3 +能力
的探究,比较以 95%乙醇与甲醇为溶剂所得磨盘草
提取物体外抗氧化活性,实验结果表明两种不同的
提取物均具有较好的抗氧化活性,其能力与提取物
浓度呈正相关。乙醇提取物清除 DPPH自由基的能
力优于甲醇提取物,甲醇提取物还原 Fe3 +能力比乙
醇提取物显著。
目前研究发现中草药具有抗氧化功能,有效成
分有:黄酮类、多酚类、皂苷类、鞣质类、维生素类、褪
黑素等,其中黄酮类化合物具有抗癌、抗菌、抗病毒、
抗过敏等多种生理活性及药理作用。对人类肿瘤、
衰老、心血管疾病的预防和治疗有着重要意义;皂苷
大多有明显的抗氧化作用。已知氧化损伤与许多病
理生理现象如衰老、动脉粥样硬化、缺血再灌注损伤
等有关。皂苷类的抗氧化作用则可能是其延缓衰
老,抗动脉粥样硬化。抗缺血再灌注损伤等药理作
用的共同作用机制;鞣质的抗氧化性还表现在抑制
肝脏线粒体、微粒体的脂质过氧化作用;抑制由肾上
腺索引起的脂肪细胞的脂质分解作用;降低多种诱
变剂的诱变性并有抗病毒活性;降低血液中尿素氨
浓度;有抗肿瘤、抗癌变作用等[9]。磨盘草具有较
强抗氧化活性与其含酚类、黄酮苷和糖等有效成分
密切相关。对磨盘草抗氧化活性的探究以期优化磨
盘草的综合利用价值,加快与完善磨盘草的临床应
用,为进一步研究与开发磨盘草的新型功能提供实
验依据。
植物作为人体外源性抗氧化物质的最重要来
源,其提取物的抗氧化研究开发日益受到人们的重
视并取得了许多成果。不同天然植物提取成分的性
质及抗氧化机制不尽相同,目前研究报道的抗氧化
机理主要包括直接清除或抑制自由基,提供质子、电
子,作用于与自由基有关的酶,抑制氧化酶的活
性[10]。自由基生物学和自由基医学的飞速发展表
明,自由基与癌症、衰老、各种心血管疾病、帕金森综
合症等各种急性和慢性疾病密切相关[11]。磨盘草
不仅具有较强的清除自由基能力,提供电子还原
Fe3 +能力,还具有易种植、生产与采集等优点,若能
充分发挥磨盘草在医疗与保健等领域的作用,将可
扩展植物天然抗氧化剂在食品、饲料、医疗保健中的
应用,充分体现我国地大物博的优势。因此天然中
草药中筛选和开发抗氧化作用确切、安全无毒的新
品种或分离提取其有效抗氧化成分,已是当务之急。
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