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朱槿不同品种花粉生活力的测定



全 文 :分子植物育种,2016年,第 14卷,第 10期,第 2837-2843页
Molecular Plant Breeding, 2016, Vol.14, No.10, 2837-2843
研究报告
Research Report
朱槿不同品种花粉生活力的测定
易双双 1,2 谭春丽 3 杨光穗 1,2 尹俊梅 1,2 黄素荣 1,2 徐诗涛 4 牛俊海 1,2*
1中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所,农业部华南作物基因资源与种质创制重点实验室,儋州, 571737; 2海南省热带观赏植物种质
创新利用工程技术研究中心,儋州, 571737; 3海南大学应用科技学院,儋州, 571737; 4海南大学园艺园林学院,海口, 570228
*通讯作者, niujunhai2014@sina.com
摘 要 为比较朱槿(Hibiscus)不同品种的花粉生活力,并确定同一品种的花粉在一天中的最佳采集时间,本
文探讨了朱槿新鲜花粉的生活力测定方法、离体萌发法的最适培养基配方及培养时间,并测定了 8个朱槿品
种在一天中不同时间的花粉生活力。结果表明:(1)离体萌发法最适于朱槿花粉生活力的测定;(2)离体萌发法
的最适培养基为 20%蔗糖 +0.02%硼酸,最佳培养时间为 24~27 h;(3) 朱槿 8个品种中,‘Pink Versicolor’,
‘Columbine’,‘White Versicolor’,‘Double Psyche’,‘Formosa Red’,‘Versicolour’的花粉生活力在 14:00时
最高,适合花粉采集;而‘Prince of Orange’、‘Psyche’的花粉生活力太低不适合作为父本进行授粉。研究结果
将对朱槿杂交授粉过程中品种的选择以及花粉最佳采集时间的选择具有重要指导意义。
关键词 朱槿,花粉,生活力
Study on Different Varieties of Pollen Viability of Hibiscus
Yi Shuangshuang 1,2 Tan Chunli 3 Yang Guangsui 1,2 Yin Junmei 1,2 Huang Surong 1,2 Xu Shitao 4 Niu Jun-
hai 1,2*
1 Tropical Crops Genetic Resources Institute, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Key Laboratory of Crop Gene Resources and
Germplasm Enhancement in Southern China, Ministry of Agriculture, Danzhou, 571737; 2 Hainan Engineering Technology Research Center of Tropi-
cal Ornamental Plant Germplasm Innovation and Utilization, Danzhou, 571737; 3 Institution of Technology, Hainan University, Danzhou, 571737; 4
Hainan University, College of Horticulture and Landscape Architecture, Haikou, 570228
* Corresponding author, niujunhai2014@sina.com
DOI: 10.13271/j.mpb.014.002837
Abstract To compare the pollen viability of different varieties and determine the best pollen collection time of
the day in Hibiscus (Hibiscus) , in this paper, we studied the different viability methods on fresh pollen of Hibiscus ,
as well as screened the optimum medium and the incubation time of the in vitro germination. We also detected the
fluctuation of pollen viability for 8 varieties in a day. The results showed that: (1) in vitro germination was suitable
for the pollen viability test in Hibiscus. (2) The optimum method of in vitro germination included the medium
(20% sucrose+0.02% H3BO3) and the incubation time of 24~27 h. (3) During the 8 different varieties of Hibiscus,
‘Pink Versicolor’,‘Columbine’,‘White Versicolor’,‘Double Psyche’,‘Formosa Red’and‘Versicolour’had the
highest pollen viability at 14:00, which were suitbale for the pollen collction; while‘Prince of Orange’,‘Psyche’
had the little pollen viability, which were too low to cross breeding as male parent materials. The results will
provide scientific reference on the selection of varieties and the optimum pollen collection time of the day in
Hibiscus cross breeding .
Keywords Hibiscus, Pollen, Viability
基金项目:本研究由海南省重大科技项目(ZDZX2013012)和海南省应用技术研发与示范推广专项(ZDZX20130100)共同资助
朱槿(Hibiscus)又名扶桑、大红花,为锦葵科木槿
属常绿灌木或小乔木,原产中国南部、印度、非洲等
地(余树勋等, 1993,花卉词典, pp.605)。朱槿花朵大;
花色丰富艳丽,有红色、粉色、柠檬黄、米黄、纯白及
多种复色;花型优美,有单瓣和重瓣;花期长,可四季
开放。朱槿可作为盆栽植物,也可用于花坛、花境、绿
表 1不同浓度 TTC对朱槿花粉生活力的影响
Table 1 The variation of pollen viability in Hibiscus from differ-
ent TTC concentrations
TTC浓度(%)
Concentration of TTC (%)
0.1
0.5
1.0
花粉生活力(%)
Pollen viability (%)
29.79±6.63 b
40.15±1.71 a
41.39±3.86 a
图 1不同时间的朱槿花粉萌发率
Figure 1 The germination rates ofHibiscus pollen at different times
篱等。因其观赏价值高,被选为苏丹、斐济、马来西亚
等国的国花,夏威夷的州花,同时也是中国玉溪、茂
名、南宁等市的市花(温跃戈, 2013)。朱槿还具有较高
的药用价值,其根、茎、叶、花均可入药,具解毒、利
尿、调经等功效(史佑海等, 2011)。朱槿作为一种优良
的园林观赏植物和药用植物,现于中国南方地区广
泛栽培与应用。
朱槿在美国佛罗里达、夏威夷、澳大利亚、台湾
等地已有相当长的育种研究史,如美国夏威夷培育
的朱槿现代新品种,其花大色艳、色系叠加多变,备
受世界各国欢迎(陈裕等, 2005, 中国市花培育与欣
赏, pp.127-132,152-157),虽然我国朱槿栽培的历史
悠久,但育种研究基础薄弱,园艺上仍以传统的单色
系品种为主。目前对开展本土化朱槿杂交育种研究、
培育新品种的需求愈加迫切。
花粉生活力是杂交育种成功与否的关键因素之
一,进行花粉生活力的测定,掌握不同品种的花粉生
活力,是合理进行杂交育种的重要依据,对杂交育种
工作具有重要指导意义。朱槿虽然花期长,但单朵花
生命周期极短、朝开暮落,从花朵开放至衰败仅 24 h
(Trivellini et al., 2011)。因此测定朱槿品种在一天中
不同时间的花粉生活力,从而确定同一品种的花粉
在一天中的最佳采集时间,同时比较不同品种的花
粉生活力,将对朱槿杂交授粉过程中品种的选择以
及花粉最佳采集时间的选择具有重要指导意义。
1结果与分析
1.1不同浓度的 TTC对朱槿花粉染色的影响
分别用 0.1%、0.5%、1.0%浓度的 TTC对朱槿的
花粉进行染色(表 1)。结果表明,花粉生活力随着TTC
浓度的增加逐渐升高,0.1%浓度的 TTC花粉生活力
为 29.79%,而 0.5%和 1.0%浓度的 TTC花粉生活力
分别为 40.15%、41.39%,两者之间差异不显著,但均
显著高于 0.1%浓度 TTC的花粉生活力。因此 0.5%
和 1.0%浓度的 TTC均适宜朱槿花粉生活力的测定,
本试验选用 1.0%的 TTC进行染色,统计花粉生活力。
1.2不同培养基对朱槿花粉萌发的影响
1.2.1不同培养时间对朱槿花粉萌发的影响
随机选用两种不同浓度组合的培养基 (15%蔗
糖+0.01%硼酸, 20%蔗糖+0.01%硼酸)进行花粉萌发
最适时间研究,每隔 3 h统计一次花粉萌发情况。在第
3~6 h,花粉萌发率极低,在第 3 h,萌发率仅为0.67%,
到第 6 h,萌发率稍有上升,15%蔗糖+0.01%硼酸的萌
发率为 1.11%,20%蔗糖+0.01%硼酸的萌发率为 0.96%,
上升趋势极为缓慢(图 1)。在第 21 h,两种不同培养
基的萌发率分别上升为 11.93%,9.98%,在随后的第
24 h、第 27 h变化趋势缓慢,进入平台期。分别对其进
行方差分析和多重比较,发现第 21 h、第 24 h、第 27 h
差异不显著(p<0.05),但第 21 h花粉萌发率平均值略
低于第 24 h、第 27 h。由于两种不同培养基的花粉萌
发率在不同时间的变化趋势几近一致,因此朱槿花
粉萌发的最佳观察时间确定为第 24~27 h。
1.2.2不同培养基对朱槿花粉萌发的影响
不同培养基对花粉萌发的结果(图 2),当蔗糖浓
度一定时,花粉生活力随硼酸浓度的增加均呈现先
上升后下降的趋势,当硼酸浓度为 0.02%时花粉生活
力最高,与 0.01%、0.03%的硼酸浓度的花粉生活力
有显著差异,说明 0.02%的硼酸能够促进花粉的萌
发。而当硼酸浓度一定时,花粉萌发率随蔗糖浓度的
增加也呈现先上升后下降的趋势,当硼酸浓度分别
为 0.01%、0.03%时,花粉生活力在蔗糖浓度为 15%
时达到最高,而当硼酸浓度为 0.02%,花粉生活力则
在蔗糖浓度为 20%时最高。对其进一步进行方差分
析和多重比较,发现不同浓度的硼酸、蔗糖对朱槿花
粉的萌发均具有极显著作用(F 硼酸=131.67, F 蔗糖=27.65,
p<0.05),其中硼酸浓度为 0.02%时花粉生活力显著
高于 0.01%和 0.03%,蔗糖浓度分别为 15%和 20%时
朱槿不同品种花粉生活力的测定
Study on Different Varieties of Pollen Viability of Hibiscus 2838
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
图 2不同培养基对朱槿花粉萌发的影响
Figure 2 The influence of different medium on Hibiscus pollen
germination
图 3朱槿花粉生活力不同测定方法的比较
注: A: 1.0% TTC; B: 1.0% I2-IK; C:过氧化物酶; D:离体萌发
Figure 3 Comparison of different test methods on Hibiscus pollen
viability
Note: A: 1.0%TTC; B: 1.0% I2-IK; C: Peroxidase; D: in vitro pollen
germination
图 4朱槿花粉生活力不同测定方法
注: A: I2-KI染色法; B:过氧化物酶法; C: TTC染色法; D:离
体萌发法;箭头所指均代表花粉有活力
Figure 4 Different test methods on Hibiscus pollen viability
Note: A: I2-KI staining; B: Peroxidase method; C: TTC staining;
D: in vitropollengermination;Arrowrepresents the pollenviability
花粉生活力无显著差异,但均显著高于 10%、25%、
30%。说明朱槿花粉的萌发其硼酸浓度可选用
0.02%,而蔗糖浓度以 15%和 20%较好。同时,方差分
析结果显示硼酸与蔗糖具有极显著交互作用(F 硼酸×蔗糖=
6.27, p<0.05)。因此朱槿花粉萌发的最适培养基为
20%蔗糖+0.02%硼酸。
1.3朱槿花粉生活力测定方法的比较
朱槿花粉生活力测定的 4种方法比较结果(图3)。
1.0% I2-IK染色的花粉生活力最高,达到 73.09%,而
1.0% TTC 染色和过氧化物酶法的花粉生活力均达
到 40.0%以上,分别为 41.39%和 44.56%,离体萌发
法的花粉生活力仅为 29.56%。进行方差分析和多重
比较发现,1.0% I2-IK染色法其花粉生活力显著高于
其他 3种方法,而 1.0% TTC染色法、过氧化物酶法、
离体萌发法的花粉生活力三者之间差异不显著,但
离体萌发法花粉生活力平均值低于 1.0% TTC染色
法和过氧化物酶法。试验过程中观察到朱槿花粉本
身颜色较深,特别是 I2-IK染色后,与其花粉本身颜
色难于区分(图 4A),导致测定的花粉生活力偏高,因
此结果不可靠。而过氧化物酶法、TTC染色法由于染
色深浅不一致,也存在一定的判断误差(图 4B;图4C)。
可见朱槿花粉生活力的测定方法虽然 TTC染色法、
过氧化物酶法、离体萌发法三者均可适用,但以离体
萌发法最可靠。
1.4 不同品种不同时间的花粉生活力测定
采用离体萌发测定朱槿的 8个品种在一天中不
同时间的花粉生活力,测定结果 (表 2)。对于‘Pink
Versicolor’、‘Columbine’、‘White Versicolor’、‘Prince
of Orange’、‘Formosa Red’,在 14:00时,花粉生活力
均显著高于其他时间。尤其是‘Columbine’,在 14:00
时花粉生活力为 26.39%,而在其他 3个时间的花粉
生活力仅为 8~10%,在 14:00时的花粉生活力约是
其他 3个时间的 3倍。‘Double Psyche’在 14:00和
16:00的花粉生活力差异不显著,但 14:00的花粉生
活力为 21.37%,高于 16:00的 16.94%,可见‘Double
Psyche’在下午 14:00~16:00均可采集花粉,但以 14:00
时采集最佳。‘Versicolour’在 4个时间的花粉生活力
差异不显著,但 14:00 的花粉生活力最高,达到
26.94%,可见‘Versicolour’在一天中均可采集花粉,
但以 14:00最佳。‘Psyche’在 12:00时花粉生活力最
高为 4.44%,显著高于其他 3个时间。因此,品种
‘Pink Versicolor’,‘Columbine’,‘White Versicolor’,
‘Double Psyche’,‘Prince of Orange’,‘Formosa
Red’,‘Versicolour’的花粉生活力均在 14:00 时最
2839
表 2 8个朱槿品种在一天中不同时间的花粉生活力
Table 2 Pollen viability of 8 varieties of Hibiscus at different times of the day
序号
Number
1
2
3
4
5
6
7
8
品种
Variety
‘Pink Versicolor’
‘Columbine’
‘White Versicolor’
‘Double Psyche’
‘Prince of Orange’
‘Formosa Red’
‘Versicolour
‘Psyche’
10:00
27.50±2.10 b
8.06±6.18 b
16.39±4.29 b
10.83±1.06 b
0±0 b
18.06±1.9 c
22.78±6.05 a
0.83±1.06 b
12:00
26.11±1.43 b
8.96±5.08 b
20.28±2.92 b
10.83±4.83 b
0±0 b
24.72±2.78 b
21.39±4.19 a
4.44±2.4 a
14:00
33.61±3.19 a
26.39±4.29 a
29.72±4.75 a
21.67±5.48 a
0.83±0.56 a
41.39±6.18 a
26.94±7.82 a
0±0 b
16:00
27.78±4.54 b
9.72±5.16 b
17.78±3.74 b
16.94±3.32 ab
0±0 b
20.83±3.67 bc
20.83±7.39 a
0±0 b
时间
Time
高,而‘Psyche’的花粉生活力在 12:00时最高。
同时,由表 2可见,‘Formosa Red’花粉生活力最
高,为 41.39%,其次‘Pink Versicolor’为 33.61%,
‘White Versicolor’ 为 29.72% ,‘Versicolour’为
26.94%、‘Columbine’为 26.39%、‘Double Psyche’为
21.67%,而‘Prince of Orange’、‘Psyche’的花粉生活
力最高仅为 0.83%和 4.44%。试验过程中还观察到
‘Prince of Orange’、‘Psyche’其花粉粒小、干瘪,绝大
多数败育(图 5E;图 5H),而其它品种的花粉粒大、圆
润 (图 5A~ 图 5G),因此品种‘Prince of Orange’、
‘Psyche’花粉生活力太低不适合作为父本授粉。
2讨论
I2-KI染色法、TTC染色法、过氧化物酶法及离
体萌发法是测定植物花粉生活力的主要方法,但不
同物种之间适用的方法不同。本研究发现,I2-KI染色
法测定的朱槿花粉生活力显著高于 TTC染色法、过
氧化物酶法及离体萌发法。孙爱芹等(2010)对枣花粉
生活力测定的研究也表明,采用 I2-KI法测定枣花粉
生活力的数值较离体培养法高,与本研究结果类似。
原因可能是虽然有花粉败育,但败育的花粉中仍有
部分淀粉积累,无活力的花粉也能被染色,且朱槿花
粉本身颜色较深,染色后难于区分,导致测定结果偏
高,因此 I2-KI染色法不适宜朱槿花粉生活力的测
定。TTC染色法和过氧化物酶法适用于较多物种的
花粉生活力测定,本试验中 TTC染色法、过氧化物
酶法与离体萌发法差异不显著。在滇龙胆花粉生活
力测定的研究中发现 TTC染色法、过氧化物酶法与
离体萌发法测定值基本一致(李娅琼等, 2009,云南中
医学院学报, 32(2): 42-44);在金银花花粉生活力研
究中亦发现 TTC染色法与培养基萌发法的试验结
果接近(刘会超等, 2010)。但本研究中 TTC染色法和
过氧化物酶法测定的朱槿花粉生活力平均值比离体
萌发法高。对西葫芦(许利彩等, 2009)和含笑属植物
(杨琴军等, 2007)花粉生活力测定的结果也表明利用
TTC染色法测定比离体萌发法高。何小弟等(2005)在
梅(桃)属观赏树种花粉生活力的测定研究也表明,离
体萌发法与 B. C夏尔达考夫染色法(过氧化物酶法)
其花粉生活力测定差异不显著,且 B. C夏尔达考夫
染色法的测定值高于离体萌发法,均与本研究结果
类似。原因可能是染色法反应的是花粉本身的内含
物质及代谢情况,即使生活力较低也可能被染色。因
此染色法虽然操作方便,简单易行,但是染色法只能
反映花粉的营养物质含量或代谢情况,且整体染色
后颜色深浅的评判标准不易准确掌握,判断误差较
大,不能很准确的反应花粉的活力(姜雪婷等, 2006)。
离体萌发法操作复杂,但其萌发观察值科学可靠,因
此朱槿杂交育种中花粉生活力的测定仍以离体萌发
法为首选方法。
本试验中探讨了朱槿花粉萌发的最佳观察时间
朱槿不同品种花粉生活力的测定
Study on Different Varieties of Pollen Viability of Hibiscus 2840
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
图 5 8个朱槿品种的花粉形态
注: A:‘Pink Versicolor’; B:‘Columbine’; C:‘White Versicol-
or’; D:‘Double Psyche’; E:‘Prince of Orange’; F:‘Formosa
Red’; G:‘Versicolour’; H:‘Psyche’
Figure 5 The pollen morphology of 8 hibiscus varieties
Note: A:‘Pink Versicolor’; B:‘Columbine’; C:‘White Versi-
color’; D:‘Double Psyche’; E:‘Prince of Orange’; F:‘For-
mosa Red’; G:‘Versicolour’; H:‘Psyche’
为第 24~27 h。李玉苹在进行朱槿花粉生活力测定时
仅培养 3 h观察,8个品种中除重瓣玫红不萌发外,
其他品种的花粉生活力均为 30%以上(李玉苹等 ,
2015,江苏农业科学, 43(9): 202-204)。而本试验以‘Pink
Versicolor’为供试材料,在培养第 3 h 时,花粉鲜有
萌发,仅见 3~5个花粉其花粉管伸长,萌发率仅为
0.67%,随着培养时间的延长,花粉萌发率逐渐上升,
到第 24 h左右,萌发率达到最大值。其差异的原因可
能是物种不同,花粉萌发率不同,另外栽培环境、气
候条件、培养基组份等也可能影响花粉的萌发。
本研究探讨了硼酸和蔗糖对花粉离体萌发的影
响。蔗糖是花粉萌发的营养物质和能量来源,维持花
粉与培养基间渗透平衡的作用,硼参与果胶物质的
合成,利于花粉管壁的建造,同时硼离子与游离态的
糖结合,促进糖的吸收与代谢(杜纪红等, 2011;曾丽
霞和艾应伟, 2008)。但不同植物种类花粉萌发的最适
蔗糖浓度和硼酸浓度是不同的。本试验中朱槿花粉
萌发的最适培养基为 20%蔗糖+0.02%硼酸,其花粉
生活力最高。而二球悬铃木在 15%蔗糖+0.10%硼酸
的液体培养基上花粉萌发最好(陆顺教等, 2014),青
钱柳在培养基为 10 mg/L硼酸+10%蔗糖的培养条件
下花粉萌发率最高(冯岚等, 2010),三角梅花粉萌发的
最适培养基以蔗糖浓度 20 g/L,硼酸浓度 15 mg /L
最适宜(夏瑾华等, 2012,江苏农业科学, 40(9): 186-187)。
本研究测定了 8个朱槿品种一天中不同时间段
的花粉生活力,发现不同品种花粉的最高生活力差异
较大,特别是‘FormosaRed’,花粉生活力高达 41.39%,
而‘Prince of Orange’、‘Psyche’的花粉生活力极低,
在 5.0%以内。可见花粉生活力受自身遗传因素影响较
大,物种不同,花粉生活力各有差异。本研究还发现
大部分品种在下午 14:00时的花粉生活力最高,因此
花粉生活力除受自身遗传因素影响之外,其花朵发育
程度、环境条件等也可能对花粉生活力有较大影响。
综合以上研究结果表明:I2-KI染色法不适宜朱
槿花粉生活力测定,而 TTC染色法、过氧化物酶法、
离体萌发法均适用于朱槿花粉生活力测定,但以离
体萌发法最为稳定可靠,而离体萌发法中以 20%蔗
糖+0.02%硼酸培养 24~27 h为佳。朱槿 8个品种中,
‘Pink Versicolor’,‘Columbine’,‘White Versicolor’
,‘Double Psyche’,‘Formosa Red’,‘Versicolour’的
花粉生活力在 14:00 时最高,适合花粉采集;而
‘Prince of Orange’、‘Psyche’的花粉生活力太低,不
适合作为父本材料进行授粉。
3材料与方法
3.1材料
试验材料为朱槿的 8个品种,‘Pink Versicolor’,
‘Columbine’,‘White Versicolor’,‘Double Psyche’,
‘Prince of Orange’,‘Formosa Red’,‘Versicolour’,
‘Psyche’,均采自于中国热带农业科学院热带作物品
种资源研究所热带花卉资源圃。将同一品种不同植株
以及同一植株不同方向的花朵共约 20朵带枝采下立
即插入水中,迅速带回实验室取其新鲜花粉混合备用。
3.2花粉生活力测定方法
3.2.1 TTC染色法
分别取少量 0.1%、0. 5%、1.0%的 TTC溶液于 1mL
离心管中,各加入少量新鲜花粉,室温下 15 min后取
少许花粉混合液于载玻片上,于光学显微镜下观察
统计,其中被染成红色的花粉有活力,未被染色的花
2841
粉没有活力。每个处理重复 3~4次,每重复随机选取
3个视野观察,每个视野的花粉总数大于 30粒。花粉
生活力=(着色花粉数量/观察花粉数量)×100%。
3.2.2 I2-KI染色法
取少量 1.0%的 I2-KI溶液于 1ml离心管中,加
入少量新鲜花粉,室温下 15 min后取少许花粉混合
液于载玻片上,于光学显微镜下观察统计,其中被染
成蓝黑色的花粉有活力,未被染色的花粉没有活力。
重复数和花粉生活力统计同上。
3.2.3过氧化物酶法
将 0.5 g联苯胺、0.5 g α-萘酚分别溶于100 mL
的 50%酒精中,0.25 g碳酸钠溶于 100 ml蒸馏水中,
使用前将其少量等体积混合均匀成试剂Ⅰ,以 0.3%
的过氧化氢溶液为试剂Ⅱ。取少量等体积试剂Ⅰ和
试剂Ⅱ混合均匀于 1 mL离心管中,加入少量新鲜花
粉,室温下 15 min后取少许花粉混合液于载玻片上,
于光学显微镜下统计观察,其中被染成玫红色的花
粉有活力,未被染色的花粉没有活力。重复数和花粉
生活力统计同上。
3.2.4离体萌发法
采用液体培养法,分别加入不同质量浓度的硼
酸和蔗糖,硼酸浓度分别为 0.01%、0.02%、0.03%,蔗
糖浓度分别为 10%、15%、20%、25%、30%,进行双因
素完全随机区组试验。将 1~2滴培养液滴于双凹载
玻片上,用针头将少许花粉均匀散布于培养基中,于
25℃恒温培养箱中培养 24~48 h , 每隔 3 h 观察一
次。若花粉管长度超过花粉粒直径则计为萌发。重复
数同上,花粉萌发率=(萌发的花粉数量/观察花粉数
量)×100%。
3.3不同品种不同时间段花粉生活力的测定
分别选取 8个朱槿品种,测定一天中 4个不同时
间(10:00, 12:00, 14:00, 16:00)的花粉生活力,从而确
定同一品种的花粉在一天中的最佳采集时间,同时
比较不同品种的花粉生活力。
3.4 数据分析
对试验数据采用 Excel表格、SAS 9.0版分析软进
行方差分析及多重比较。
作者贡献
易双双负责试验设计、数据统计、试验操作和论
文撰写;谭春丽参与试验操作和数据统计;杨光穗、
尹俊梅负责项目管理及文章修改;黄素荣负责供试
材料的管理;徐诗涛负责试验器材及试剂的提供;牛
俊海为通讯作者,负责试验指导和论文修改。全体作
者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究由海南省重大科技项目(ZDZX2013012)
和海南省应用技术研发与示范推广专项(ZDZX2013
0100)共同资助。
参考文献
Du J.H., Ye Z.W., Su M.S., Zhang X.Y., and Gao Q.H., 2011,
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