全 文 ：　　表 2　康定乌头及不同炮制品对二甲苯致小鼠耳廓肿胀度的影响
( x±s, n=10)
组别 剂量(mg/kg) 肿胀度(mg)
空白对照 -- 7.99±2.27
药典法制 13.05 6.81±3.25
药典法制 6.53 8.17±3.83
藏医院制 13.05 4.40±2.97＊
藏医院制 6.53 4.87±2.96＊
诃子汤制 13.05 4.17±3.09＊＊
诃子汤制 6.53 4.72±1.99＊
青稞酒制 13.05 6.21±5.04
青稞酒制 6.53 3.18±2.14＊＊
生品　　 13.05 4.09±2.72＊＊
生品　　 6.53 3.32±2.55＊＊
地塞米松 1.50 4.52±2.12＊
　　与对照组比较 ＊P<0.05, ＊＊ P<0.01(下同)
2.3　康定乌头及不同炮制品对棉球致小鼠肉芽肿的影响 　表
3结果显示 ,地塞米松 , 青稞酒制高剂量 , 诃子汤制低剂量对棉
球致小鼠肉芽肿有明显抑制作用。
　　表 3　康定乌头及不同炮制品对棉球致小鼠肉芽肿的影响( x±s, n
=10)
组别 剂量(mg/kg· d)肉芽肿重(mg) 抑制率(%)
模型对照 17.79±5.96
药典法制 13.05 12.68±4.20 28.71
药典法制 6.53 13.63±3.81 23.38
藏医院制 13.05 15.13±6.45 14.93
藏医院制 6.53 13.35±3.85 24.93
诃子汤制 13.05 11.94±3.74＊ 32.90
诃子汤制 6.53 11.10±3.20＊＊ 37.61
青稞酒制 13.05 11.06±3.10＊＊ 37.86
青稞酒制 6.53 15.63±4.05 12.12
生品　　 13.05 14.46±4.95 18.70
生品　　 6.53 11.30±2.35＊ 36.48
地塞米松 1.50 10.92±2.49＊＊ 38.60
2.4　康定乌头及不同炮制品对醋酸致小鼠扭体反应次数的影
响 　表 4结果显示 , 与模型组比较 ,青稞酒制 、诃子汤制 、 05版
药典法制高剂量 , 甘孜州藏医院制低剂量 , 生品高剂量及吲哚
美辛均可以显著减少扭体次数。
3　讨论
　　康定乌头在藏族 、羌族等少数民族医药中应用广泛 , 目前 ,
　　表 4　康定乌头及不同炮制品对醋酸致小鼠扭体反应次数的影响
( x±s, n=10)
组 别 剂量(mg/kg· d) 扭体次数(次)
模型对照 28.11±14.79
药典法制 13.05 14.60±7.26＊＊
药典法制 6.53 19.10±7.59＊
藏医院制 13.05 21.33±8.97
藏医院制 6.53 13.44±4.36＊＊
诃子汤制 13.05 14.90±7.72＊＊
诃子汤制 6.53 22.00±7.41
青稞酒制 13.05 13.50±6.54＊＊
青稞酒制 6.53 21.10±4.51
生品　　 13.05 17.22±7.12＊＊
生品　　 6.53 21.78±4.35
吲哚美辛 7.50 8.78±7.79＊＊
国内仅有吕光华 [ 4]针对康定乌头根的化学成分研究做过报道 ,
为给康定乌头的发掘整理提供基础 , 有必要对康定乌头的药效
物质基础及作用做深入研究。本实验首次对康定乌头及不同炮
制品的急性毒性 、抗炎 、镇痛进行了初步研究。我们对炮制前后
化学成分变化及药理实验研究发现:双酯型生物碱的含量多少
与康定乌头炮制前后毒性 、抗炎作用强弱密切相关。由本实验
结果可以得出康定乌头及炮制品毒性大小顺序为:青稞酒制 >
生品 >诃子汤制 >甘孜州藏医院制 >05版药典法制;生品及不
同炮制品均有一定的抗炎镇痛活性;药理活性和毒性大小之间
存在一定的关联性(即毒性越大的抗炎镇痛效果越好);本实验
结果可以给临床安全用药提供一定的参考。康定乌头及其不同
炮制品更深入的药理作用及其具体作用机制还在进一步的研
究中。
参考文献
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4　吕光华 ,李正邦 , 袁玲 , 等.康定乌头根的化学成分研究.中草药 ,
1999;30(3)∶ 164 ～ 166
毛葡萄叶水提物对 FeCl3诱导血栓形成的作用及其机制研究＊
周　芃 ,荆春霞 ,王旻晨 ,杨亚安 ,陈尔齐 ,吴开云＊＊
(苏州大学基础医学部心血管研究室 , 苏州　215123)
　　摘　要　目的:观察毛葡萄叶水提物对 FeCl3诱导大鼠血栓形成的影响及主要作用机制。方法:预防性给药 10天后用 FeCl3
诱导大鼠颈总动脉血栓形成模型观察血栓形成 ,测定血栓湿重 , HE染色观察血栓的形态学变化;放射免疫法测定血栓素(TXB2)、前
44 中药药理与临床 2009;25(1)
＊ 苏州大学创新团队项目资助(编号:9034602)、苏州大学医学发展基金资助项目(EE134519)　　　　＊＊通讯作者
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2009.01.023
列环素(6-keto-PGF1α)、内皮素(ET)变化 , 探讨其作用机理。结果:毛葡萄叶水提物对 FeCl3诱导大鼠血栓湿重明显减轻;血浆
TXB2、ET降低 , 6-keto-PGF1α水平升高。结论:毛葡萄叶水提物有明显抗血栓形成作用 , 其机制与血管 ET及血液 TXB2和 6-keto-
PGF1α含量水平有关。
　　关键词　毛葡萄叶水提物;血栓;三氯化铁;血栓素 A2;前列环素;内皮素
　　毛葡萄(VitisquinquangularisRehd)能调经活血 、舒筋活络 ,
外用治跌打损伤 、筋骨疼痛 , 外伤出血等 [ 1] 。本实验采用三氯
化铁(FeCl
3
)诱导的大鼠颈总动脉血栓形成模型 ,首次发现毛葡
萄叶水 提 物 有明 显 抗 血栓 形 成 作用 (专利 申 请 号:
200810025205.X),并对其主要作用机制进行了探讨 , 现报道如
下:
1　材料与方法
1.1　试验药物　毛葡萄叶水提物制备:毛葡萄叶采自江西 ,苏
州大学生药研究所鉴定 , 500克干叶浸泡于水中 , 加热提取 3
次 , 每次 45分钟 , 合并提取液蒸发浓缩至至 1000毫升 , 再用终
浓度为 50%乙醇沉去杂质 , 过滤后用旋转蒸发除去乙醇 , 浓缩
后的溶液经冷冻干燥后得到粉末状提取物 150克(批号为:KX-
SH-T1),主要成份含黄酮 25%、酚类 、氨基酸等。实验时配成
30%(约含生药 1g/ml)。 复方丹参滴丸 (compounddanshen
drippingpils, CDDP), 天津天士力制药股份有限公司 , 规格为
每粒 27mg,批号:20060802。
1.2　动物　清洁级 SD大鼠 60只 , ♀ ♂各半 , 体重 250 ～
280g, 由苏州大学实验动物中心提供。
1.3　试剂　内皮素(endothelin, ET)放射免疫分析药盒购自
北京普尔伟业生物科技有限公司。血栓素 B2(thromboxaneB2,
TXB2)和 6-酮-前列腺素 F1α(6-keto-prostaglandinF1α, 6-keto-
PGF1α)放射免疫测定试剂盒购自苏州大学江苏省血液学研究
所。 FeCl3为国产分析纯 ,配成 2.16mol/L水溶液。
1.4　仪器　 SN-682型放射免疫计数仪(上海核福光电仪器
有限公司)。 OLYMPUSCX31显微镜(日本 OLYMPUS公司)。
1.5　方法　大鼠经适应 1周后随机分为 6组:①假手术组
(sham):以蒸馏水灌胃;②模型组(model):以蒸馏水灌胃;③④
⑤为毛葡萄(VRE)大 、中 、小剂量组:30%毛葡萄叶水提液(约
含生药 1g/ml)分别以 4g/kg, 2g/kg, 1g/kg灌胃;⑥复方丹参滴
丸组(CDDP):CDDP溶液灌胃(67.5mg/kg)。各组动物按上述
剂量灌胃给药 , 给药体积 1ml/100g,每日一次 , 连续 10天。于末
次给药后 15min,以 4%水合氯醛腹腔注射(1ml/100g)麻醉 , 然
后参照文献 [ 2 ～7]并加以改良制作颈总动脉血栓模型 ,分离两侧
颈总动脉 , 右侧颈总动脉备采血用 , 左侧颈总动脉分离长度为
1.5cm,其下置小片塑料薄膜(4cm×1.2 cm), 用于保护血管周
围组织 , 给药后 1h, 2 ～ 5组将吸有 10μlFeCl3溶液的小片滤纸
(1 cm×0.6 cm)敷于左侧颈总动脉上 , 假手术组敷等量生理盐
水滤纸片。敷纸片后 20min去除纸片 ,去除纸片后 90min从右
颈总动脉插管取血。第 1管取血 1.8ml置于含有 0.2mlEDTA-
Na2(0.06 mol/L)的塑料试管中 , 第 2管取血 2ml置于含 7.5%
EDTA-Na
2
30μl和抑肽酶 40μl的塑料试管中 , 混匀后 3000 rpm
4℃离心 15min,第 1管的血浆用于测定 TXB2、 6-keto-PGF1α,第
2管的血浆用于测定内皮素(ET)。
1.5.1　血栓重量测定　 取下左侧血栓形成段的颈总动脉 ,
在滤纸上吸干残血后 ,用电子分析天平测定其重量。
1.5.2　血栓形态学观察　各组取血栓形成段血管作石蜡切
片 , HE染色后光镜下(100×)观察血栓。
1.5.3 　内皮素的检测　用放射免疫法测定血浆内皮素(ET)
含量 ,具体操作按放免试剂盒说明书进行。
1.5.4　血栓素 A
2
(TXA
2
)、前列环素(PGI
2
)检测　用放射免
疫法测定血浆中的 TXB2和 6-keto-PGF1α的含量并计算出 TXB2
与 6-keto-PGF
1α比值。
2　结果
2.1 　对血栓形成的影响　血栓 HE染色显示 , 模型组全血管
腔内都已形成血栓 ,血栓体是以血小板 、红细胞和少量白细胞的
混合型血栓 , 其中血小板形成的结构最明显(见图 1 A);VRE
组中的大 、中 、小剂量血栓形成明显小于模型组 , 并血栓体较疏
松 ,血栓体中血小板形成的结构明显少于模型组(见图 1 B～
D)。 CDDP对照组与模型组对比 , 血栓有不同程度的减小 , 但与
VRE组比较 , 其血栓明显大于 VRE组。血栓重量测定结果也
与形态学观察相一致 , VRE大 、中 、小剂量组均有明显降低血栓
重量(P<0.01),其中以中剂量组作用最显著 ,见表 1。
A:模型组;B:毛葡萄大剂量组;C:毛葡萄中剂量组;D:毛葡萄小剂量组;
E:复方丹参组
图 1　各组大鼠血栓 HE染色 (100×)
2.2 　对内皮素(ET)水平的影响　 模型组与假手术组比较 ,
血浆 ET含量明显上升 , 而 VRE的中 、大剂量组(2ml/kg, 4ml/
kg)能明显降低血浆 ET水平 , VRE小剂量组与CDDP组则无显
著性变化 ,见表 1。
　　表 1　各组大鼠血栓重量和血浆内皮素含量变化( x±s, n=10)
Group Dose Thromboticweight(mg)
ET　　
(ng/L)　　
Sham 0.0±0.0＊＊ 156.93±22.12＊＊
Model 7.9±1.5 398.26±56.23
VRE 4g/kg 4.1±1.0＊＊ 330.65±58.10＊
VRE 2g/kg 3.9±0.7＊＊ 317.83±53.43＊＊
VRE 1g/kg 4.2±0.8＊＊ 340.27±68.38
CDDP 67.5mg/kg 5.2±0.9＊＊ 341.73±78.32
　　＊ P<0.05 , ＊ ＊ P<0.01vsmodel组(下同)
2.3　对 TXB2和 6-keto-PGF1α水平的影响　模型组与假手术
组比较 , 血浆 TXB2 水平明显升高 , 而 6-keto-PGF1α则下降 ,
TXB2 /6-keto-PGF1α数值增大;VRE组与模型组比较 , 小 、中 、大
剂量组都有明显降低血浆 TXB2水平和升高 6-keto-PGF1α水平 ,
TXB2 /6-keto-PGF1α数值明显降低;CDDP组与 VRE小剂量组的
作用相似 ,见表 2。
45中药药理与临床 2009;25(1)
　　表 2　各组大鼠血浆 TXB2和 6-keto-PGF1α的变化( x±s, n=10)
Group Dose TXB2(ng/L)
6-keto-PGF1α
(ng/L) TXB2 /6-keto-PGF1α
Sham 295.94±80.73＊＊ 114.87±34.48＊＊ 2.59±0.27＊＊
Model 449.91±115.77 54.27±15.66 8.35±0.41
VRE 4g/kg 325.38±70.08＊＊ 90.71±24.10＊＊ 3.63±0.33＊＊
VRE 2g/kg 322.57±78.64＊＊ 90.34±30.30＊＊ 3.66±0.34＊＊
VRE 1g/kg 350.92±86.52＊ 84.72±30.69＊ 4.31±0.53＊＊
CDDP 67.5mg/kg348.24±84.04＊ 84.18±33.91＊ 4.36±0.65＊＊
3　讨论
　　血栓形成是一系列复杂的过程 , 它的发生和发展与血液 、
血流和血管的生理功能变化密切相关。中医学认为血栓形成
是血脉不通 ,血行失度 , 血凝而不流 , 血气不至所致的血瘀
证。现代研究表明 ,血栓形成与血管内膜损伤 、血小板功能异
常 、凝血机制改变 、纤溶系统及血流状态等因素有关。动脉血栓
多数在发生血管壁损伤的基础上 , 以血小板为主的多细胞相互
作用的结果 [ 8 ～10] 。本文采用 FeCl3诱导大鼠颈总动脉血栓形成
模型 , 观察了毛葡萄叶水提物血栓形成的影响及作用机制。
FeCl3诱导血栓形成模型的主要原理是 FeCl3局部浸润动脉可使
血管内膜剥脱 ,内膜下组织暴露 , 通过 Fe3+促发羟自由基的产
生 , 引发脂质过氧化 ,损伤血管内皮 , 促使血小板黏附聚集并发
生释放反应 , 激发凝血过程 , 导致血管混合性血栓形成。 FeCl3
诱导的血栓模型可靠 、形成简便 、快捷 , 结构更接近于临床自发
性血栓形成的组织学形态特征 , 有助于血栓症诊断与治疗实验
的科学性和可信性 [ 7] 。本实验对该模型进行了简单的改良使
之更适合对 FeCl3诱导血栓形成的研究。实验结果表明了毛葡
萄叶提取液能明显抑制 FeCl
3
诱导大鼠血栓形成 , 给药组明显
降低了血栓的重量及血栓形成的百分率 , 血栓 HE染色也显示
给药组的血栓体中血小板形成的结构明显少于模型对照组。
　　内皮素(endothelin, ET)是血管内皮细胞分泌的迄今所知作
用最强 、持续最久的缩血管活性多肽。具有强缩血管 , 诱导血小
板聚集和血栓形成作用而造成血管损害。在生理情况下 , ET与
血管内皮细胞舒张因子(endothelium-derivedrelaxingfactors,
EDRFs)二者相互制约维持动态平衡 , 血管内皮细胞舒张因子可
抵消 ET的强缩血管作用 , 控制机体的血压与局部血流。本实
验研究中 , 给大鼠预防性给药 10天后 , 毛葡萄叶水提物能明显
降低血浆 ET水平 , 表明毛葡萄叶水提物具有降低血浆中 ET水
平的作用 , 提示毛葡萄叶水提物抗血栓形成作用可能与其降低
血浆 ET水平相关。
　　血栓素 A2(TXA2)和前列环素(PGI2)是细胞膜释放的花生
四烯酸代谢的主要产物 , TXA2主要在血小板生成 , 其引起微血
管收缩 、血小板凝聚 、血栓形成和止血。而 PGI2主要在血管壁
生成 , 作用与 TXA2相反呈强力扩张微血管 ,抗血小板凝聚 , 防止
血栓形成 ,正常生理状态下 , 完整无损的血管内皮细胞具有抑
制血小板在其表面粘附聚集和活化 、抗血栓功能 , 在循环血液
中 TXA2和 PGI2的浓度处于相对平衡状态 , 二者在体内形成一
种精巧的分子调节机制 , 对血管舒缩 , 血小板聚集及血栓形成
起着重要的调节作用。由于二者的极不稳定 , TXA2半衰期为
30s, PGI
2
的半衰期也仅有 3min, 所以二者分泌后便迅速稳定
代谢为 TXB2和 6-keto-PGF1α,因此通常通过测定 TXB2和 6-keto-
PGF1α的变化来反映 TXA2和 PGI2的变化情况 [ 11] 。本实验研究
中 ,给大鼠预防性给药 10天后 , 毛葡萄叶水提物明显降低血浆
TXB2水平和升高 6-keto-PGF1α水平 , 其 TXB2 /6-keto-PGF1α数值
也明显降低;本实验中的模型组与空白对照组(假手术组)结果
与文献 [ 5]报道一致。表明本文用 FeCl3诱导的血栓模型是成功
的 ,用这个模型证实毛葡萄叶水提物有降低血浆 TXB2水平和升
高 6-keto-PGF1α水平作用 ,说明改变 TXB2和 6-keto-PGF1α水平是
毛葡萄叶水提物抗血栓形成的另一作用途径。
　　综前所述 ,本实验首次发现毛葡萄叶提取物有明显抗血栓
形成作用 ,此植物来源广泛 , 提取工艺简单 , 具有广阔的开发前
景。为临床开发效果良好的抗血栓药打下了一个较好基础。
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EffectofVitisquinquangularisRehdextractonthrombosisinducedbyFeCl3
ZhouPeng, JingChunxia, WangMinchen, YangYaan, ChenErqi, WuKaiyun＊
(CardiovascularResearchInstituteofMedicalColege, SoochowUniversity, Suzhou　215123)
　　Objective:ToinvestigatewhethertheVitisquinquangularisRehdextract(VRE)hasaeffectonanti-thrombosisinducedbyFeCl3 and
46 中药药理与临床 2009;25(1)
itsmechanism.Methods:Aftergivingprophylacticdrugfor10d, thrombimodelwereinducedbyFeCl3 oncarotidarteryofdiferentexperi-
menatalrats.MorphologyofthrombuswasobservedbyHEstainingandthromboticweightwasalsodetected.ThecontentofTXB2 , 6-keto-
PGF1αandendothelin(ET)inplasmaweredeterminedbyradioimmunoassaytostudythemechanism.Results:ItwasshownthattheVitis
quinquangularisRehdextracthadsignificantlyinhibitedthrombosisinducedbyFeCl3 andreducdthethromboticweight.Meanwhile, ithad
downregulativethelevelofTXB2 andETandupregulativethelevelof6-keto-PGF1αinplasma.Conclusion:ItissuggestedthatVREhas
aeffectonanti-thrombosisinducedbyFeCl
3
, itsmechanismmaybeassociatedwiththecontentofTXB
2
and6-keto-PGF1αinplasmaandET
fromvessel, whichhadbeprovidedanevidenceoftheexploitinganewanti-thromosisforclinicalapplication.
Keywords　 Vitisquinquangularis;thrombus;ferricchloride;thromboxaneA2;prostacyclin;endothelin
东川芎对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
陈正爱 ,尹大维
(延边大学基础医学院 ,延吉　 133000)
　　摘　要　目的:探讨东川芎对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用线栓法建立大脑中动脉可逆性脑缺血再灌注模
型 , 检测脑梗死体积 、脑组织中超氧化物歧化酶(superoxidedismutase, SOD)活性 、丙二醛(maleicdialdehyde, MDA)含量及环氧合酶 2
(Cyclooxygenase-2, COX-2)蛋白的表达。结果:与模型组比较 ,东川芎明显减轻脑缺血再灌注损伤大鼠脑梗死体积;提高脑组织 SOD
活性 , 降低 MDA含量(P<0.01);同时显著减少脑缺血再灌注损伤大鼠皮质和海马区 COX-2蛋白的表达。结论:东川芎对大鼠脑缺
血再灌注损伤具有保护作用。
　　关键词　东川芎;缺血再灌注;SOD;MDA;COX-2
　　东川芎为伞形科多年生草本植物 CnidlumofcinaleMakino
的干燥根茎 , 原产于日本 、韩国 、朝鲜 ,中国吉林省延边地区有栽
培 [ 1] 。药理研究表明 , 东川芎具有扩张血管 、改善微循环和抑
制血小板的聚集等作用 [ 2] 。目前 , 国内外研究川芎对脑缺血再
灌注损伤的保护作用的报道有很多 , 但尚未见东川芎对脑缺血
再灌注损伤的研究报道。本文观察了东川芎对脑缺血再灌注
损伤的影响。
1　材料与方法
1.1　 试验药物　 东川芎由延吉市新药大药房提供。称取东
川芎 500g,加 10倍量的乙醇 ,浸泡 24h,回流 2h,过滤 ,滤渣加 8
倍量的乙醇回流 90min,过滤 , 合并滤液 , 减压蒸出溶剂至浸膏。
丹参由延吉市新药特药大药房提供 ,取丹参 200g,水回流 2h,滤
渣加 8倍量乙醇回流 90min,合并滤液 , 减压蒸出溶剂至浸膏。
1.2　动物　 Wistar大鼠 ,体重 270 ～ 320g, 雌雄不拘 ,由延边大
学医学部动物科提供 。
1.3　试剂　 COX-2(N-20)多克隆抗体:免疫组化试剂盒和
DAB显色剂由北京中杉金桥生物技术有限公司提供;SOD﹑
MDA试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
1.4　方法　 实验采用 Longua及 Nagasawa的线栓法 [ 3]参考改
进后的线栓法 [ 4, 5]制备可逆性局灶性脑缺血再灌注动物模型 ,
将大鼠随机分为 5组 , 假手术组(正常组):只做手术操作(分离
至颈总动脉分叉处);缺血再灌注组(模型组);东川芎小剂量组
(8.1g/kg);东川芎大剂量组(16.2g/kg);丹参对照组(13.5g/
kg)。连续 7天灌胃给药后 1小时制备模型 ,缺血两小时后拔除
线栓 , 再灌注 24小时后处死大鼠 , 立即取脑 , 测定脑梗死体积;
以黄嘌呤氧化酶法测定 SOD活力 [ 6] , 以硫代巴比妥酸法(TBA)
测定 MDA含量 [ 7];采用免疫组化二步法 , DAB显色检测 COX-2
蛋白的表达。
2　结果
2.1　东川芎对脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积的影响　东川
芎大剂量组能明显减少脑梗死体积。
表 1　东川芎对脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(g/kg) 脑梗死体积(%)
假手术对照 　 0＊＊
模型对照　 32.68±9.82
东川芎　　 8.1 24.63±9.69
东川芎　　 16.2 17.98±8.89＊＊
丹参　　　 13.5 23.69±9.01＊
　　与模型组比较 ＊P<0.05;＊＊P<0.01(下同)
2.2　东川芎对脑缺血再灌注大鼠脑组织中 SOD活性和 MDA
含量的影响　东川芎能明显提高脑损伤大鼠脑组织中 SOD的
活性 ,降低脑损伤大鼠脑组织中 MDA的含量 ,见表 2。
　　表 2　东川芎对脑缺血再灌注大鼠脑组织 SOD活性和 MDA含量
的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(g/kg)
脑组织匀浆液
SOD(U/mgprot) MDA(nmol/mgprot)
假手术对照 38.20±3.54＊＊ 5.48±0.66＊＊
模型对照　 16.46±1.94 9.01±0.97
东川芎　　 8.1 18.90±2.91＊ 8.27±0.97
东川芎　　 16.2 25.22±1.02＊＊ 7.34±0.74＊＊
丹参　　　 13.5 20.09±1.94＊＊ 7.82±0.53＊
47中药药理与临床 2009;25(1)