全 文 ：浙江中医药大学学报 2013年 3月第 37卷第 3期
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中
药
研
究
龙须藤抗类风湿关节炎有效部位的研究
郑海音 1 徐伟 2 李煌 2 褚克丹 2 陈立典 3 张玉琴 2
1.福建中医药大学中西医结合学院 福州 350122 2.福建中医药大学药学院 3.福建中医药大学康复医学院
摘要：[目的] 筛选龙须藤抗类风湿性关节炎的有效部位。[方法] 采用系统溶剂提取法对龙须藤进行提取、分离得到不同部位的萃取物，采用牛Ⅱ型
胶原诱导大鼠关节炎模型（CIA模型），以各组提取液灌胃给药，观察各组提取液对 CIA模型大鼠的影响。[结果] 龙须藤具有抗类风湿关节炎的有
效部位为乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物，具有较强的抗类风湿关节炎作用，其他萃取物活性极弱。[结论] 初步确定了龙须藤抗类风湿关节炎的有
效部位为乙酸乙酯部位和正丁醇部位，为龙须藤深入研究抗类风湿关节炎奠定了基础。
关键词：龙须藤；类风湿关节炎；CIA模型；有效部位
中图分类号：R282.71 文献标识码：A 文章编号：1005-5509（2013）03-0321-05
Study on Bauhinia championi (Benth.) Benth Effective Parts of Anti-Rheumatoid Arthritis Zheng Haiyin,Xu Wei, Li Huang,et al College of Inter－
grative Medicine of Fujian TCM University,Fuzhou(350122)
Abstract:[Objective] To research the effective parts of anti-rheumatoid arthritis of Bauhinia championi(Benth.) Benth. [Methods] The different parts of the
Bauhinia championi(Benth.) Benth were extracted and separated by the methods of system solvent extraction. A rat model of RA induced by Ⅱcollagen
was used and the rat was infused by intragastric gavage with different groups of extraction. Then observe the effect on CIA rats. [Results] The best active
extraction of Bauhinia championi(Benth.) Benth was ethyl acetate extract, and n-butanol extract was less effective part of anti-rheumatoid arthritis. The
others had little activity. [Conclusion] The effective part of anti-rheumatoid arthritis of Bauhinia championi(Benth.) Benth was identified initially, which
provided the foundation of Bauhinia championi (Benth.)Benth development.
Key words: Bauhinia championi(Benth.) Benth；rheumatoid arthritis；CIA model；effective parts
龙须藤又名羊蹄藤、乌郎藤、过岗圆龙、九龙藤、
五花血藤、梅花入骨丹、燕子尾、黑皮藤等，为豆科羊
蹄甲属多年生藤本植物（Bauhinia championi (Benth.)
Benth），分布于浙江、江西、福建、广东、广西、湖南、湖
北、贵州等省区[1]。其藤茎入药，性平、苦涩，无毒，具有
祛风除湿，活血止痛，健脾理气等功效[2]，民间主要用
于治疗胃脘痛[3]、风湿关节痛[4,5]、急慢性腰腿痛[6]等。龙
须藤的化学成分已有相关研究，文献报道该植物含有
黄酮类化合物[7,8]、挥发油[9]、多糖[10]等成分，但目前龙须
藤抗类风湿关节炎的有效成分尚不清楚，且研究较
少。本实验采用与临床类风湿性关节炎较为接近的牛
Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型（CIA模型），研究龙须
藤不同提取部位抗类风湿性关节炎的作用，以确定龙
须藤治疗类风湿性关节炎的有效部位，为其开发研究
提供理论依据。
1 材料
1.1 实验动物 Wistar大鼠，SPF 级，雄性，体质量
(200±20)g，由福建中医药大学实验动物中心提供，购
自中国科学院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动
物有限公司[生产许可证：SCXK（沪）2012-0002]，动物
合格证号 200700518360。
1.2 药品与试剂 龙须藤于 2011年 4月采于福州永
泰，经福建中医药大学药学院中药教研鉴定室卢伟教
授鉴定为龙须藤 Bauhinia championi (Benth.) Benth。
药材样本存放于福建中医药大学药学院。雷公藤多苷
片，黄石飞云制药有限公司，批号 20110501。完全弗氏
佐剂(CFA)，美国 Sigma公司，批号 F-5503；牛Ⅱ型胶
原，美国 Sigma公司，批号 C-20022。IL-1β（E90563Ra）
和 TNF-α（E90133Ra）ELISA试剂盒均购自 Uscn Life
Science Inc.。
1.3 仪器 SE202F电子天平，奥豪斯仪器（上海）有
限公司；YLS-7B足趾容积测量仪，济南益延科技发展
有限公司。
2 方法
2.1 供试样品的制备 取龙须藤藤茎 7.8kg，粉碎成
粗粉后用 80%乙醇回流提取 3次，每次 2h，合并提取
————————
基金项目：国家自然科学基金项目(81001624)；福建省科技厅重大专项（2009YZ0001-1-1）
Fund project:Programme approved by National Natural Scientific Foundation(81001624);Programme of the major projects of
Science and Technology Bureau of Fujian Province(2009YZ0001-1-1)
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DOI:10.16466/j.issn1005-5509.2013.03.020
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液，回收乙醇，得到乙醇提取物。提取物加水混悬后，依
次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，
回收溶剂后得到石油醚提取部位 3g，三氯甲烷提取部
位 30.8g，乙酸乙酯提取部位 236.5g，正丁醇提取部位
503g。灌胃前分别用 0.5% CMC-Na溶液配成实验用
药浓度。
2.2 Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠模型 (CIA) 的建立
将 70只Wistar大鼠随机分为 7组，即正常组、模型
组、阳性对照组（雷公藤多苷片）、醇提组、石油醚组、三
氯甲烷组、乙酸乙酯组、水饱和正丁醇组，每组为 10
只。将完全弗氏佐剂（CFA）与 2mg·mL-1的牛Ⅱ型胶原
乳液等体积混合，制成胶原乳剂，除正常组外，每只大
鼠尾根部皮内注射胶原蛋白 0.2mg。于第 7d进行 2次
免疫，除正常组外，每只大鼠尾根部皮内注射胶原乳剂
0.1mg，不完全弗氏佐剂（IFA）与 2mg·mL-1的牛Ⅱ型胶
原乳液等体积混合，制成胶原乳剂。
2.3 给药 初次免疫后第 1d开始分组灌胃给药，1
次/d。正常组、模型组给予 9.0g·L-1氯化钠注射液 10
mL（kg·d）-1；各提取部位组和醇提组给予 16.49g生
药/（kg·d）；雷公藤多苷组给予 6mg（kg·d）-1。连续给
药 28d。
2.4 大鼠一般状态观察以及体重测量 观察大鼠毛
色、光泽度及其饮食、活动等情况。并在实验第 1d称
重，以后每 7d称重 1次，记录结果。
2.5 足跖容积的变化 采用容积法测量大鼠造模前
后足容积并记录。致炎后每 4d对大鼠右后足容积进
行测量，记录容积值。肿胀程度用造模后容积-造模前
容积的差值（mL）表示[11]。
2.6 关节滑膜组织病理学检查 实验大鼠处死后，取
下右后膝关节、包括踝关节在内的整个足爪、包括腕
关节在内的整个前爪，固定于 10%甲醛内，脱钙后常
规石蜡包埋，切片后 HE染色，观察大鼠关节炎症、滑
膜病变、骨质破坏等变化情况，在光学显微镜下观察病
理组织学变化。
2.7 CIA 大鼠血清 IL-1β 和 TNF-α 的含量的测定
10%水合氯醛麻醉（0.15mL·100g-1），腹主动脉取血，静
置，3000r/min离心 15min，分离血清于-80℃冰箱保存
备用。测定前置室温复融均匀，取上清测定。按照
ELISA试剂盒提供的说明进行操作，反应终止后上酶
标仪于 450nm测定 OD值，绘制标准曲线，计算浓度。
2.8 统计方法 所有数据均用 (x±s ) 表示，应用
SPSS16.0统计软件做统计分析，采用 t检验分析。
3 结果
3.1 对 CIA模型大鼠一般症状及体质量的影响 模
型组大鼠经胶原乳化液致敏、加强免疫后，精神状态、
饮食情况、活动能力均有所降低，初次免疫后尾部出现
溃烂，7d后逐渐结痂。在 2次免疫后第 3d左右，大鼠
开始发病，模型组大鼠足趾和踝关节开始出现红肿，
并日渐加重，部分大鼠右后足出现足趾变形，实验后
期由于大鼠自愈能力足趾和踝关节红肿有所减轻，但
与正常组比较足肿胀仍有显著性意义，无死亡情况；
石油醚组和三氯甲烷组足趾和踝关节红肿等情况与
模型组相似, 部分大鼠右后足也出现足趾变形，无死
亡情况；雷公藤多苷组、正丁醇组、乙酸乙酯组大鼠治
疗后上述症状均有所缓解, 足趾和踝关节开始出现红
肿较轻, 足趾变形情况极少，无死亡情况。除正常组
外，其他各组大鼠体重缓慢增长，在发病期间体重开始
下降，而后缓慢增长。见表 1。
3.2 对 CIA模型大鼠足肿胀度的影响 结果见表2。
3.3 对 CIA模型大鼠踝关节组织病理学的影响 各
组动物踝关节病理学如图 1显示，正常对照组的大鼠
滑膜组织滑膜衬里层厚为 1～2 层，细胞排列整齐，无炎
性细胞浸润及血管增生，关节软骨光滑无破坏。而 CIA
模型组的大鼠滑膜细胞增生明显，排列紊乱，滑膜衬里
层细胞增生，滑膜增厚，伴随纤维素渗出，胶原纤维沉
着，可见大量的梭形成纤维样细胞，组织稀松，有些切
片可看到滑膜向软骨表面侵蚀性生长。醇提组、石油醚
组和三氯甲烷组滑膜组织病变程度相仿，与模型组比
较中度增生，排列紊乱，组织稀松，有些少量滑膜向软
骨表面侵蚀性生长；乙酸乙酯组可见滑膜组织中度增
生，排列较整齐，组织较紧密，无明显软骨及骨组织破
坏；正丁醇组病变减轻程度不及乙酸乙酯组。
3.4 CIA大鼠血清 TNF-α 和 IL-1β的含量的测定
见表 3。
从表 3可见，模型组大鼠血清 TNF-α和 IL-1β
与正常组比较明显增高(P<0.01)，醇提组、石油醚组、
三氯甲烷组、乙酸乙酯组、正丁醇组和雷公藤多苷组
均可下调 CIA大鼠血清 TNF-α 和 IL-1β的含量，乙
酸乙酯组比较有差异显著性(P<0.05)。
4 讨论
目前类风湿关节炎动物模型主要有胶原诱导性
关节炎(CIA)、佐剂性关节炎(AA)、酵母多糖诱导的关
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节炎(ZIA)、多聚糖诱导的关节炎(PGIA)等，CIA 模型
是 Trentham等于 1977 年首次建立的实验性关节炎
动物模型[12]，CIA作为 RA的动物实验模型，表现为多
发性外周关节炎，关节局部红肿，严重致关节畸形，病
理变化为增生性滑膜炎，关节软骨破坏、骨侵蚀，关节
腔内有炎性细胞侵润，临床表现、实验室指标与免疫
表 1 对各组大鼠体重的影响（g，x±s）
Tab. 1 The influence of the rat weight（g，x±s）
组别 例数 0d 7d 14d 21d 28d
正常组 10 198.93±9.95 231.49±11.57 257.96±12.90* 293.29±14.66** 325.40±16.34**
模型组 10 197.30±9.72 221.81±11.09 231.32±10.81 209.96±10.43 213.73±10.54
雷公藤多苷组 10 197.73±9.88 212.92±10.65 218.24±10.99* 221.97±11.21** 229.80±11.49**
醇提组 10 198.59±8.88 224.90±10.34 240.31±11.02* 231.00±13.76** 231.68±10.76**
石油醚组 10 198.11±9.17 221.05±10.79 235.58±11.79* 218.27±12.37** 226.56±13.25**
三氯甲烷组 10 197.99±10.78 224.27±11.48 236.67±9.79* 230.65±14.75** 231.95±14.67**
乙酸乙酯组 10 198.25±9.69 231.85±11.34 245.37±10.26** 234.65±13.39** 237.59±12.01**△
正丁醇组 10 198.60±9.69 237.18±11.34 239.37±10.26** 229.48±13.39** 230.68±12.01**△
注：与模型组相比，*P<0.05, **P<0.01；与雷公藤多苷片组相比，△P<0.05。
Note: Compared with model group, *P<0.05, **P<0.01；compared with tripterygium glycosides tablet group, △P<0.05.
表 2 各组对大鼠关节肿胀度的影响(x±s,n=10,mL)
Tab. 2 The rats to the influence of joint swelling degree(x±s)
组别
致炎前足
容积
致炎后足跖肿胀度
10d 14d 18d 22d 26d
正常组 1.65±0.16 0.01±0.01 0.02±0.03 0.02±0.05 0.02±0.04 0.02±0.03
模型组 1.65±0.13 0.19±0.09# 0.90±0.17# 1.48±0.13## 1.38±0.21## 1.30±0.34##
雷公藤多苷组 1.67±0.12 0.07±0.03△△ 0.10±0.16△△ 0.17±0.11△△ 0.19±0.08△△ 0.16±0.08△△
醇提组 1.65±0.13 0.15±0.05 0.85±0.13 1.20±0.21 1.01±0.01△△ 0.98±0.06△△
石油醚组 1.65±0.11 0.16±0.05 0.86±0.07 1.45±0.11 1.26±0.05 1.20±0.07
三氯甲烷组 1.66±0.21 0.16±0.08 0.85±0.05 1.29±0.21 1.19±0.08 1.00±0.05△
乙酸乙酯组 1.65±0.15 0.08±0.06 0.81±0.28△ 1.08±0.09△ 0.99±0.10△△ 0.68±0.10△△
正丁醇组 1.65±0.11 0.12±0.06 0.85±0.18△ 1.18±0.09△ 1.10±0.10△△ 0.86±0.10△△
注：与模型组相比，△P<0.05, △△P<0.01；与正常组相比，#P<0.05, ##P<0.01
Note: Compared with model group, △P<0.05, △△P<0.01；compared with normal group, #P<0.05, ##P<0.01.
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正常组 模型组 雷公藤多苷组
醇提组 石油醚组 三氯甲烷组
乙酸乙酯组 正丁醇组
图 1 各组大鼠滑膜组织病理组织学变化
Fig. 1 Histopathological changes of synovial tissues of different group rats
表 3 各组大鼠血清中 TNF-α和 IL-1β含量比较（x±s）
Tab 3 The comparison of the rat serum TNF alpha and IL - 1 β content（x±s）
组别 n IL-1β（pg·mL-1） TNF-α（ng·mL1）
正常组 10 33.21±2.51 2.381±0.142
模型组 10 53.34±3.23** 2.873±0.187**
雷公藤多苷组 10 41.42±3.65△△ 2.374±0.138△△
醇提组 10 39.68±2.57△ 2.680±0.182
石油醚组 10 50.36±2.11 2.674±0.147
三氯甲烷组 10 40.09±2.17△ 2.710±0.200
乙酸乙酯组 10 29.86±2.82△△ 2.493±0.169△△
正丁醇组 10 38.8±2.63△ 2.553±0.123△
注：与正常组比较，**P﹤0.01；与模型组比较，△P﹤0.05，△△P﹤0.01。
Note: Compared with normal group, **P<0.01; compared with model group, △P<0.05, △△P<0.01.
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及病理学改变方面均接近人 RA[13]，是筛选和研究治
疗 RA药物的较理想模型，也是目前国内外公认的
RA动物模型。本实验采用 Wistar大鼠复制模型，研
究显示模型组大鼠滑膜细胞增生明显，排列紊乱，滑
膜衬里层细胞增生，滑膜增厚，伴随纤维素渗出，胶原
纤维沉着，可见大量的梭形成纤维样细胞，组织稀松，
有些切片可看到滑膜向软骨表面侵蚀性生长，说明本
实验建立的 CIA模型较成功；而乙酸乙酯组和正丁
醇组滑膜组织中度增生，排列较整齐，组织较紧密，无
明显软骨及骨组织破坏，说明了乙酸乙酯组和正丁醇
组对 RA有较好的保护作用。
在 RA病理机制中细胞因子（Cytokine，CK）发挥
了重要的作用。研究表明细胞因子的异常产生及其
相互作用在 RA的关节软骨和骨质破坏过程中起重
要作用[14]。有研究表明[15]RA患者关节腔中 TNF-α的
含量明显升高，本实验结果也显示模型组大鼠血清和
关节组织中表达的 TNF-α、IL-1β明显升高，给药组
显著降低 TNF-α、IL-1β，进一步证实 TNF-α 和
IL-1β 在 RA 滑膜炎症的发病机制中起着重要作用
[16]。龙须藤能够降低 CIA 大鼠血清炎症因子 TNF-
α 及 IL-1β 的表达，证实了龙须藤的免疫调节作
用，有可能通过抑制 TNF-α、IL-1β等炎性细胞因子
的表达而达到治疗 RA的作用。
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（收稿日期：2012-10-22）
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