全 文 ：• 1293 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2015年4月第30卷第4期 CJTCMP , April 2015, Vol . 30, No. 4
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（收稿日期：2014年2月20日）
·研究报告·
狼毒水提物对大鼠佐剂性关节炎模型治疗作用
韩波，张国伟，孙军花，秦桂芳，马晓莉
（河北大学中医学院，保定 071002）
摘要：目的：探讨狼毒水提物对大鼠佐剂性关节炎模型治疗作用及初步机制。方法：采用佐剂关节炎大鼠模
型，以雷公藤多苷为阳性对照药物，观察及检测狼毒水提物对大鼠一般状况、关节炎肿胀度、关节炎评分、胸腺
指数、脾脏指数、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）水平的影响。结果：狼毒水提物能抑制
大鼠足趾继发性肿胀继发性肿胀，能降低关节炎指数，降低关节组织病理评分。结论：狼毒水提物能够抑制大鼠
佐剂性关节炎发生发展。
关键词：类风湿关节炎；狼毒水提物；关节炎
基金资助：河北省中管局科研项目（No.2009154）
Effects of aqueous extract of stellera chamaejasme in adjuvant-induced arthritis rat model
HAN Bo, ZHANG Guo-wei, SUN Jun-hua, QIN Gui-fang, MA Xiao-li
( College of Traditional Chinese Medicine, Hebei University, Shijiazhuang 071002, China )
Abstract: Objective: To observe the treatment effect and preliminary mechanism of aqueous extract of stellera
chamaejasme in adjuvant-induced arthritis rat model. Methods: Adjuvant-induced arthritis rat model was established by etiology
simulation method, taking tripterygium glycosides as control drug. The general status of rats, arthritis swelling grade, arthritis
scoring, thymus index, spleen index were observed, the level of tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) were
detected. Results: The aqueous extract of stellera chamaejasme could inhibit the arthritis rat disease symptoms that decreased the
通讯作者：马晓莉，河北省保定市裕华东路342号河北大学中医学院，邮编：071002，电话：0312-5079623，E-mail：ma_xiaoli@163.com
张国伟，河北省保定市裕华东路342号河北大学中医学院，邮编：071002，电话：0312-5079644，E-mail：xxzgw@126.com
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狼毒史载于《神农本草经》，列为下品，味苦、辛，性平，有
毒，入肺、脾、肝经，具逐水祛痰、破积杀虫功效[1]，历代本草以
瑞香狼毒为正品[2]。有临床研究提示，以狼毒为主治疗类风湿
关节炎（rheumatoid arthritis，RA）疗效明显[3]，目前未见相关实
验研究，本文通过狼毒水提物对大鼠佐剂性关节炎模型作用进
行研究，研究狼毒治疗类风湿关节炎药效作用。
材料
1. 动物 SPF级健康雄性Wistar大鼠48只，体质量（180±20）g，
购自军事医学科学院实验动物中心，合格证号：SCXK（军）2007-
004。饲养环境：河北大学医学实验中心SPF动物房。
2. 药物及主要试剂 瑞香狼毒，购于安国市昌达中药材
饮片有限公司，经河北大学中医学院梁宪茂老师鉴定为正品；
雷公藤多苷片，黄石飞云制药有限公司，产品批号：20111201；
卡介苗（bacille calmette guerin，BCG），购自北京生物制品研究
所；脱钙液：EDTA 100g，加入60℃蒸馏水450mL、NaOH 15g，
搅拌至透明，加入0.2mol/L PBS 500mL，调pH值7.2-7.3，蒸馏
水定容至1 000mL；弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant，
CFA）：将羊毛脂与石蜡油（12）于70℃水浴中充分混匀，
高压灭菌（121℃、30min），制成弗氏不完全佐剂（Freund’s
incomplete adjuvant，IFA），4℃保存，临用时，将灭活BCG与IFA
（12.5）混匀（10mg/mL）备用。
3. 仪器 TDL-5-A型台式离心机，上海安亭科学仪器厂；FC
型酶标仪，Thermo。
方法
1. 狼 毒 水 提 物的制备 取 狼 毒1k g，加 8 倍 量 水冷浸
30min，水煎煮2次，第1次30min，第2次20min，趁热过滤，合并
滤液，静置过夜，弃去沉淀，离心机4 500r/min，离心3次，取上
清液，浓缩至浓度1g/mL，4℃冰箱保存备用。
2. 大鼠佐剂性关节炎模型制备 参考文献[4]，大鼠佐剂
性关节炎（adjuvant-induced arthritis，AA）模型制备：临用前从
冰箱取出CFA，充分振荡、混匀。空白组大鼠右足跖中部皮内注
射0.1mL 0.9%氯化钠溶液，其余各组大鼠右足跖皮内注射CFA
0.1mL。
3. 分组与给药 雄性Wistar大鼠48只，随机分成6组，每组
8只，即对照组、模型组、阳性药组（100mg/kg）、狼毒低剂量组
（2.5g/kg）、狼毒中剂量组（5g/kg）、狼毒高剂量组（10g/kg），
分组后大鼠适应性饲养1周，实验第5天，开始经口给予各组供
试物，每日1次，连续21d。观察原发及继发性病变情况，病变按
关节炎指数评分。末次给药后24h，称体质量，麻醉处死大鼠，
腹主动脉采集血液，3 000r/min离心10min制备血清样品，-20℃
冻存待检；迅速取出胸腺和脾脏，称质量；取大鼠左踝关节组
织，用FAA液（50%酒精∶10%福尔马林∶5%醋酸=18∶1∶1）固定
48h，乙二胺四乙酸脱钙，进行HE病理检测，光镜下观察组织
形态变化。
4. 指标检测
4.1 一般情况 状态观察（包括毛色、光泽度及活动情
况），体质量。
4.2 检测指标 给药后第3、5、8、18、21天脚爪肿胀度，前
肢、耳、尾部病变发生率和严重程度，根据病变程度累计积分，
计算出每只大鼠的关节炎指数（arthrositis index）；踝关节组织
学改变；胸腺指数，脾脏指数；血清IL-6、TNF-α水平。
4.3 指标相关计算方法 ①大鼠肿胀度：肿胀度=（致炎后
足厚一致炎前足厚）/致炎前足厚×100%。②关节炎指数评分标
准：鼻：结缔组织无肿胀评分为0，结缔组织严重肿胀评分为1；
尾：无小结评分为0，有小结评分为1；耳朵：无小结、不红评分
为0，有小结、红评分为1；前爪：无炎性反应评分为0，至少一个
关节有炎性反应评分为1；后爪：无炎性反应评分为0，轻度炎性
反应评分为1，中度炎性反应评分为2，严重炎性反应评为3。③
踝关节病理组织切片评分标准：观察关节滑膜被覆上皮有无细
胞变性、增生，间质有无炎细胞浸润及肉芽组织形成，关节腔有
无减小或闭塞，关节软骨有无破坏或纤维化，关节周围皮下组
织有无炎细胞浸润或纤维化。根据关节各部位病变轻重程度，
依次定量为0分（无病变）、1分（轻度或少量）、2分（中度或多
量）、3分（重度或大量）、4分（极重度）。关节周围皮下组织病
变以半量计算，累加所有分数，得出总分。病理组织切片由病理
专业人员阅片评分。④胸腺系数和脾脏系数：脏器系数=脏器湿
重（mg）/大鼠体质量（g）×100%。⑤血清TNF-α、IL-6水平检
测：采用ELISA试剂盒检测TNF-α、IL-6水平，以OD值表示。
5. 统计学方法 秩和检验检验病理分级，数据以x-±s表
示，t检验检测分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
结果
1. 各组大鼠一般情况 见表1。对照组大鼠被毛紧密贴身、
毛色光泽、精神良好、活动敏捷、食量正常；模型组大鼠关节肿
胀、活动减少，被毛较松散，毛色偏暗，精神状态偏差，食量减
少，体质量增长缓慢。各狼毒组大鼠的被毛、色泽、精神状态、
活动量、食量较模型组好。与模型组同期相比，除狼毒中剂量组
第18天体质量有显著增长（P<0.01），其余各组各时间段均未见
显著性差异。
primary and secondary paw edema, reduced arthritis index, improved joint pathology scoring. Conclusion: The aqueous extract of
stellera chamaejasme could inhibit the occurrence and development of disease in adjuvant-induced arthritis rat.
Key words: Rheumatoid arthritis; Aqueous extract of stellera chamaejasme; Adjuvant-induced arthritis rat model
Fund assistance: Science and Technology Program of Hebei Administration of Traditional Chinese Medicine
(No.2009154)
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2. 狼毒水提物对原发性足趾肿胀度的影响 见表2。注射
佐剂后，模型组大鼠右后足趾逐渐肿胀，在造模后的第1天就达
到高峰，随后肿胀度下降。狼毒各剂量组也呈相应趋势；与模
型组相比，阳性组、狼毒低剂量组在用药后的第3、5天有显著
性差异（P<0.05）；狼毒高剂量组在用药后第1天有显著性差异
（P<0.01）。
3. 狼毒水提物对继发性足趾肿胀的影响 与模型组相比，
阳性组、狼毒低剂量组、高剂量组在治疗后第18天有显著性差
异（P<0.01），狼毒中剂量组在第21天有显著性差异（P<0.05），
见表3。
表3 各组大鼠继发性足趾肿胀的变化（x-±s，n=8，mm）
组别 第18天 第21天
对照组 4.49±0.28 4.57±0.25
模型组 8.05±1.19** 7.95±1.43**
阳性组 5.71±1.29**△ 7.13±0.82**
狼毒低剂量组 6.59±0.52**△△ 7.25±0.59**
狼毒中剂量组 7.03±0.70** 6.75±0.50**△
狼毒高剂量组 6.71±0.69**△ 6.89±1.44**
4. 狼毒水提物对AA模型关节炎指数的影响 见表4。注
射佐剂的各组大鼠右后足趾在注射后第18天开始肿胀，随着
时间的推进出现不同程度的红肿，关节炎指数逐渐升高，在第
21天达到高峰。与模型组相比，各给药组的关节炎指数均有不
同程度的下降，其中狼毒低、高剂量组在第21天有显著性差异
（P<0.05）。
5. 狼毒水提物对AA模型组织学评分的影响 见表5，图1。
用药各组的大鼠踝关节病变与模型组比较，病变性质相同，但
病变程度有不同程度的减轻。与模型组相比，阳性组，狼毒低、
高剂量组有显著性差异（P<0.05）。
ᇍ✻㒘 ῵ൟ㒘 䰇ᗻ㒘⣐↦Ԣࠖ䞣㒘 ⣐↦Ёࠖ䞣㒘 ⣐↦催ࠖ䞣㒘
图1 各组大鼠踝关节组织病理切片观察（HE×100）
表1 各组大鼠体质量情况（x-±s，n=8，g）
组别 第1天 第5天 第12天 第18天 第21天
对照组 207.0±5.5 204.3±6.0 284.8±10.2 320.1±12.5 332.4±13.8
模型组 207.6±5.6 238.3±6.6 282.3±12.1 307.3±24.9 308.8±35.5
阳性组 207.9±6.9 240.6±8.3 288.5±10.2 313.5±20.5 315.1±27.8
狼毒低剂量组 207.3±7.5 234.5±10.5 286.6±14.7 323.8±18.9 333.8±24.1
狼毒中剂量组 208.9±9.5 240.6±10.8 291.3±9.3 329.8±11.2** 340.8±10.1
狼毒高剂量组 208.0±8.0 238.9±12.8 290.1±14.5 327.8±22.0 341.6±25.0
注：与模型组同期比较，**P<0.01。
表2 各组大鼠原发性组织肿胀度的变化（x-±s，n=8，%）
组别 第1天 第3天 第5天 第8天 第18天 第21天
对照组 -0.01±0.10 0.03±0.06 -0.06±0.06 0.01±0.08 0.03±0.05 0.01±0.07
模型组 0.54±0.13** 0.45±0.15** 0.55±0.28** 0.63±0.26** 0.13±0.23* 0.25±0.24*
阳性组 0.52±0.25** 0.31±0.15**△ 0.34±0.19**△ 0.47±0.23** 0.13±0.20* 0.19±0.45**
狼毒低剂量组 0.53±0.12** 0.25±0.14**△ 0.27±0.16**△ 0.44±0.17** 0.09±0.05* 0.11±0.21
狼毒中剂量组 0.61±0.11** 0.30±0.16** 0.45±0.15** 0.56±0.14** 0.19±0.12* 0.19±0.09**
狼毒高剂量组 0.74±0.13**△△ 0.32±0.12** 0.46±0.19** 0.50±0.19** 0.19±0.17* 0.15±0.18
注：与对照组相比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，△P<0.05，△△P<0.01。下表同。
表4 各组大鼠关节炎指数（x-±s，n=8，分）
组别 第18天 第21天
对照组 0 0
模型组 2.38±3.34 5.38±4.31
阳性组 1.25±3.24 2.63±1.39
狼毒低剂量组 0.38±1.06 1.00±1.51△
狼毒中剂量组 1.75±2.96 2.25±3.24
狼毒高剂量组 0 0.88±1.36△
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6. 狼毒水提物对佐剂性关节炎模型胸腺系数、脾脏系数
的影响 见表6。与对照组比较，模型组的脾脏系数明显增大
（P<0.05）；阳性组的脾脏系数显著增大（P<0.01）；狼毒高剂量
组的胸腺系数增大，有显著性差异（P<0.05）。与模型组相比，狼
毒中剂量组脾脏系数明显减小，胸腺系数显著增大（P<0.05）。
表6 各组大鼠脾脏系数、胸腺系数情况（x-±s，n=8，%）
组别 胸腺系数 脾脏系数
对照组 1.49±0.16 2.39±0.18
模型组 1.16±0.36* 2.88±0.57*
阳性组 1.23±0.20* 3.00±0.48**
狼毒低剂量组 1.39±0.20 2.58±0.20
狼毒中剂量组 1.41±0.25 2.43±0.17△
狼毒高剂量组 1.31±0.16* 2.57±0.26
7. 狼毒水提物对佐剂性关节炎模型大鼠血清TNF-α、IL-6
水平的影响 见表7。与对照组比较，模型组血清TNF-α、IL-6
水平略下降，其余各组的TNF-α水平略有上升，IL-6水平略下
降，但都无显著性差异。与模型组比较，阳性组血清TNF-α活
性明显下降，IL-6活性呈下降趋势。
表7 各组大鼠血清TNF-α、IL-6水平（x-±s，n=8，ng/L）
组别 TNF-α IL-6
对照组 0.65±0.18 0.85±0.45
模型组 0.61±0.16 0.77±0.46
阳性组 0.52±0.21 0.64±0.26
狼毒低剂量组 0.65±0.18 0.52±0.16
狼毒中剂量组 0.66±0.13 0.47±0.20
狼毒高剂量组 0.75±0.09 0.44±0.12
讨论
RA是一种自身免疫性疾病，其基本病变为滑膜炎症状，可
以引起软骨破坏和骨质侵蚀，最终导致关节畸形和功能障碍，
RA的病因至今不清楚。应用中药治疗RA在临床上往往能取得
很好的疗效[5-6]。在本项研究中，狼毒水提物对于大鼠足趾原
发性肿胀，在一定程度上起到抑制作用，提示狼毒对CFA导致
的大鼠直接炎性反应有一定抑制作用。使用狼毒水提物后，狼
毒水提物能抑制大鼠足趾继发性肿胀继发性肿胀，能降低关节
炎指数，其中，狼毒低、高剂量组在第21天有显著性降低，能降
低裸关节病理组织评分，提示狼毒水提物对大鼠AA有抑制作
用。以上提示狼毒水提物可以抑制大鼠AA模型的发生发展。
在RA关节腔损伤机制中，炎性细胞因子在RA的炎性反应
和骨破坏过程中起关键作用，可通过抑制关节胶原和蛋白多糖
合成，导致细胞外基质的破坏与重建加快RA的骨破坏进程[7]。
IL -6和TNF-α是RA发病中重要的炎性介质，参与了RA的发
病与发展，二者对关节软骨和骨的破坏有部分叠加或协同作
用[8-9]。在本项研究中，狼毒水提物能降低因免疫功能异常增强
而升高的脾脏系数，中剂量组降低作用尤其明显，但是未见用
药组能降低胸腺系数，提示其有一定的免疫抑制作用；在血清
TNF-α、IL-6水平方面，用药各组均能降低IL-6水平，对TNF-α
作用不显著，提示狼毒水提物抑制大鼠类风湿性关节炎的发生
发展与降低IL-6水平相关。
综上所述，狼毒水提物能够抑制大鼠AA发生发展。
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表5 各组大鼠踝关节组织病理改变轻重程度的比较
（x-±s，n=8，分）
组别 踝关节评分
对照组 1.00±0.00
模型组 2.88±1.25**
阳性组 1.63±0.52**△
狼毒低剂量组 1.25±1.16**△
狼毒中剂量组 2.00±0.76**
狼毒高剂量组 1.75±1.04**△
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