全 文 ：0.25 g, 精密称定 , 分别精密加入一定量的槲皮素对照品溶液 ,按
“ 2.2.3”项下方法制备并测定 , 结果回收率平均值为 97.77%,
RSD为 1.00%。
2.2.9　样品含量测定 精密吸取对照品溶液与 10批天胡荽药
材供试品溶液各 10 μl, 按上述色谱条件测定 , 测定峰面积积分
值 , 按外标法计算槲皮素的含量。结果见表 1。
3　讨论
通过实验发现 , 在槽内先加入展开剂 , 再在展开缸内用小烧
杯盛上盐酸 , 然后进行薄层板预饱和 30min, 再展开 , 其色谱斑点
圆而集中 , 分离度较好。
表 1　样品中槲皮素的含量 %
编号 种名 采样地点 采收时间 含量
1 天胡荽 贵州贵阳花溪 2008-07 0.16
2 天胡荽 贵州贵阳三江农场 2008-06 0.21
3 天胡荽 贵州贵阳水田 2008-07 0.22
4 天胡荽 贵阳中医学院 2008-08 0.11
5 破铜钱 贵州天柱远口 2008-08 0.04
6 破铜钱 贵州天柱坌处 2008-08 0.03
7 破铜钱 贵州锦屏茅坪 2008-08 0.07
8 破铜钱 贵州剑河 2008-08 0.01
9 破铜钱 贵州凯里 2008-08 0.03
10 破铜钱 贵州三穗 2008-08 0.05
　　n=3
天胡荽药材除了含有槲皮素外 , 还有多种黄酮苷 ,本文以盐
酸和硫酸作为水解酸进行了比较 ,还对水解酸的浓度 、溶剂和提
取时间进行了考察。结果本文所用的条件较好。
曾对甲醇 -水(50∶50)、甲醇 -0.1%磷酸(50∶50)、乙腈
-水(45∶55)等流动相进行考察 ,发现上述条件不够理想。 采
用乙腈 -0.1%磷酸(45∶55)作为流动相 , 槲皮素色谱峰能够达
到基线分离 ,峰形对称 、尖锐。
1990年版《广西中药材标准》收载天胡荽和破铜钱为天胡荽
药材的来源品种 ,而 2003年版 《贵州省中药材 、民族药材质量标
准》只收载天胡荽为天胡荽药材的来源品种 ,同时槲皮素的含量
测定结果表明 ,天胡荽和破铜钱两种植物在成分含量上有明显的
差异。因此 , 天胡荽和破铜钱两种植物的干燥全草能否同时作为
天胡荽药材使用有待商榷。
在 《广西中药材标准》 1990年版与《贵州省中药材 、民族药材
质量标准》 2003年版中 [ 1, 5] , 只对药材性状与粉末鉴别作了规定 ,
本实验首次对天胡荽药材中槲皮素进行薄层鉴定与含量测定 , 可
作为天胡荽药材质量控制的有效方法。
参考文献:
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阳:贵州科技出版社 , 2003:69.
收稿日期:2008-10-13;　修订日期:2009-10-21
基金项目:苏州大学创新团队项目资助(No.9034602);
苏州大学医学发展基金资助项目(No.EE134519)
作者简介:荆春霞(1980-),女(汉族),河北邢台人 ,现任在读硕士研究生 ,
学士学位 ,主要从事动脉粥样硬化研究工作.
＊通讯作者简介:吴开云(1954-), 男(汉族),江西安福人 , 现任苏州大学
教授 ,硕士学位 ,主要从事动脉粥样硬化研究工作.
毛葡萄叶水提物对血栓形成和血黏度的影响
荆春霞 ,周　芃 ,杨亚安 ,王旻晨 ,王晓春 ,吴开云＊
(苏州大学 ,江苏 苏州　215123)
摘要:目的 探讨毛葡萄叶水提物对血栓形成和血黏度影响并研究其主要作用机理。方法 用大鼠动静脉旁路血栓形成
模型观察血栓的形成 , 测定血栓湿重及干重;放射免疫法测定 TXB2和 6-keto-PGF1α水平;用血瘀血液流变学模型测定
全血黏度。结果 毛葡萄叶水提物可剂量依赖性抑制大鼠血栓形成 , 其血栓干重及湿重与对照组相比均显著降低(P<0.
05或 P<0.01), 有降低血浆 TXB2和升高 6-keto-PGF1α水平 , 对血液黏度也有明显降低作用。结论 毛葡萄叶水提物
有明显抗血栓形成和降低血黏度作用 ,其机制可能与影响血浆 TXB2和 6-keto-PGF1α含量水平有关。
关键词:毛葡萄叶水提物;　血栓;　模型;　大鼠;　血栓素 B2;　前列环素;　血粘度
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)01-0045-03
　　临床上由血栓引起的心 、脑血管病发病率逐年增加 , 寻找有
效的抗血栓药是这一领域的研究热点。 近来研究表明从中草药
中寻找具有抗血栓作用的药物具有良好的发展前景。毛葡萄 Vi-
tisquinquangularisRehd,为木质藤本植物 ,味酸 、微苦 , 性平 , 根皮
和叶可作药用 , 有调经活血 、舒筋活络作用 ,外用治跌打损伤 、筋
骨疼痛 , 外伤出血等 [ 1] 。 现有的文献资料中并未发现毛葡萄及
其提取物具有抗血栓的作用 ,本实验采用被广泛用于抗血栓药物
的研究动静脉旁路模型和急性血瘀血流变学模型 [ 2 , 3] ,首次发现
毛葡萄叶水提物有明显抗血栓形成和降低全血血黏度的作用
(已申请发明专利 , 申请号:200810025205.X),并对其主要作用
机制进行了探讨。现报道如下。
1　材料与仪器
1.1　动物 SD大鼠 , ♀♂各半 , 体质量(250±20)g, 苏州大学实
验动物中心供应 , SPF级 , 实验动物生产许可证号:XCYK(苏)
2002-0008, 实验动物使用许可证号:SYXK(苏)2002-0037。
1.2　仪器 电子精密天平(上海奥豪斯公司);DK-600型电热
恒温水槽;TDL80-2B型台式离心机(上海安亭科学仪器制造
厂);LEICARM2126RT石蜡切片机(上海徕卡仪器有限公司);O-
LYMPUSCX31显微镜(日本 OLYMPUS公司);TYXN-96多功
能智能血液凝聚仪 ;γ放免计数仪 FJ-2003/50A。
1.3　药品及试剂 毛葡萄叶水提物制备:取 500 g干毛葡萄叶
(来源:江西 , 苏州大学生药研究所鉴定), 浸泡于水中 , 加热提取
3次 , 45 min/次 ,合并提取液用蒸发浓缩至 1 000 ml, 再用终浓度
为 50%乙醇沉去杂质 ,过滤后用旋转蒸发除去乙醇 ,浓缩后的溶
液经冷冻干燥后得到粉末状提取物 150 g(批号为:KXSH-T1),
·45·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.1 时珍国医国药 2010年第 21卷第 1期
主要成分为黄酮(25% ), 还含有酚类 、氨基酸等。实验时配成
30%(约含生药 1g· ml-1);血栓素 B2(thromboxaneB2 , TXB2)和
6 -酮 -前列腺素 F1α(6 -keto-prostaglandinF1α, 6 -keto-
PGF1α)放射免疫测定试剂盒购自苏州大学江苏省血液学研究
所 , 复方丹参滴丸(compounddanshendrippingpils, CDDP),天
津天士力制药股份有限公司产品 , 规格为每粒 27mg, 批号:
20060802, 批准文号:国药准字 Z10950111。盐酸肾上腺素注射液
1mg/ml上海禾丰制药有限公司 批号 070902, 其它试剂均为市售
国产分析纯。
2　方法
2.1　 动静脉旁路血栓模型与给药分组 SD大鼠 50只 , ♀♂各
半 , 体质量(250±20)g, 分为对照组 , 中药(VRE)大 、中 、小剂量
组和丹参(CDDP)组各 10只 , 各组动物分养。大剂量中药组每
天灌中药 4 ml(4g· kg-1);中剂量中药组每天灌中药 4 ml(2g·
kg-1);小剂量中药组每天灌中药 4 ml(1 g· kg-1);对照组灌生
理盐水 4 ml每只;丹参组(70 mg· kg-1)。连续灌胃 9 d;第 10
天于灌胃 1 h后按血栓模型过程行动静脉旁路术。
2.2　动静脉旁路模型的建立 3.6%水合氯醛 1ml· 100 g-1麻醉
后固定于解剖台上 , 准备好一根塑料管(d=0.3 mm)两端拉细 ,
管中放置一根 6 cm的 4号线 ,并灌满 50 U· ml-1肝素。分离右
侧的颈总动脉和左侧的颈外静脉。静脉端先结扎静脉远心端 ,剪
开一个小口 , 将管向近心端插入并结扎固定。动脉端先用血管夹
夹住近心端 , 剪开一个小口 , 将管向近心端插入并结扎固定。然
后放开血管夹 , 保证血流通畅 ,计时 20 min后将线取出 [ 2] 。分别
称量栓线的湿重和干重 , 将形成的血栓固定 、包埋 , 切片 、HE染
色 , 观察血栓成分。并腹主动脉取血 , 离心 2 000 r/min,取血清 ,
-20℃保存待测 TXB2和 6-keto-PGF1α含量。
2.3　血栓重量测定 取下栓线后在滤纸上吸干后 , 用电子分析天
平测定其重量。然后置 60℃烘箱烘干至恒重称其重量为干重。
2.4　血栓形态学观察 各组取血栓形成栓线作石蜡切片 , HE染
色后光镜下观察血栓 。
2.5　血栓素 B2(TXB2)、6-keto-PGF1α检测 用放射免疫法测
定血清中的 TXB
2
和 6-keto-PGF
1α的含量并计算出 TXB2与 6
-keto-PGF1α比值。
2.6　血淤血流变学模型与给药分组 SD大鼠 40只 , 大鼠 , ♀♂
各半 , 体质量(250±20)g,将大鼠分为 4组 , 每组 10只 , 即对照
组 、血瘀模型组 、丹参组 、中药模型组 ,各组动物分养。对照组:每
天生理盐水灌胃 5 ml/只 , 连续 7d。第 7天停食 , 次晨取血检测。
②造模组:每日丹参组(70 mg· kg-1), 中药中剂量组(2 g·
kg-1)灌胃 ,分灌不同药物连续 7d, 于第 7天皮下注射肾上腺素
0.08 ml· 100 g-1 ,共 2次 , 2次相隔 4 h, 于第 1次注射后 2 h,将
大鼠浸入冰水中 5 min, 处置后停食 ,次晨取血检测 [ 4, 5] 。
2.7　全血血粘度的检测 腹主动脉抽血 5ml, EDTA-2Na抗凝 ,
TYXN-96多功能智能血液凝聚仪测定全血高切 , 中切 , 低切血
粘度。
2.8　统计学处理 所得数据用 x±s表示 , 显著性检验采用 SPSS
10.0统计软件进行 one-wayANOVA分析并以 t检验 , 组间差异
以 α<0.05为显著性标准。
3　结果
3.1　对血栓形成的影响 血栓 HE染色显示 , 对照组线栓形成
的血栓 , 血栓体是以血小板 、红细胞和少量白细胞的混合型血栓 ,
其中血小板形成的结构最明显(见图 1a);给药组中的大 、中 、小
剂量组血栓形成明显小于对照组 ,并且血栓体较疏松 ,血栓体中
血小板形成的结构明显小于对照组(见图 1b～ d)。丹参组与对
照组对比 ,血栓有不同程度的减小 , 但与药物组比较 ,其血栓明显
大于药物组。血栓重量测定结果也与形态学观察一致。药物组
有明显降低血栓重量(P<0.05, P<0.01 , P<0.01), 见表 1, 其
中中药中剂量组作用最显著。
表 1　各组大鼠血栓形成重量比较( x±s)
组别 剂量 /mg· kg-1 湿重 /mg 干重 /mg
对照 - 48.6±5.38 14.1±1.73
丹参 70 43.1±4.01＊ 13±1.15＊
中药小剂量 1 000 42.1±5.42＊ 12.4±1.35＊
中药中剂量 2 000 29.3±6.07＊＊ 9.6±1.26＊＊
中药大剂量 4 000 41±4.08＊ 12.4±0.97＊
　　与对照组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01;n=10
3.2　对 TXB
2
和 6 -keto-PGF
1
α水平的影响 对照组血浆
TXB
2
含量升高(P<0.01), 而 6 -keto-PGF
1α含量降低(P<
0.01), TXB2 /6-keto-PGF1α数值增大(P<0.01)。与对照组比
较 , 毛葡萄小 、中 、大剂量组能明显降低血浆 TXB2含量(P<
0.05, P<0.01), 而升高 6 -keto-PGF1α含量(P<0.05, P<
0.01), TXB2 /6 -keto-PGF1α数值降低有显著性差异(均 P<
0.01)。丹参组与毛葡萄中 、高剂量组的作用相似(P<0.05、P<
0.01)。见表 2。
表 2　TXB
2
和 6-keto-PGF
1
α含量测定结果( x±s)
组别 剂量 /mg· kg-1
TXB
2
/
ng· L-1
6-keto-PGF
1
α/
ng· L-1
TXB2/
6-keto-PGF1a
对照 - 295±88 81.4±27 3.62±0.23
丹参 70 277±63＊ 118±20＊ 2.35±0.18＊＊
中药小剂量 1 000 268±29＊ 103±18＊ 2.6±0.32＊＊
中药中剂量 2 000 218±8＊＊ 125±34＊＊ 1.74±0.56＊＊
中药大剂量 4 000 258±90＊＊ 103±14＊＊ 2.5±0.37＊＊
　　与对照组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01;n=10
3.3　对全血血粘度的影响 模型组 , 中剂量组与丹参组血粘度高
切 , 中切 ,低切都明显高于对照组。但中剂量组与丹参组都降低
了 3种切变率状态下的血粘度(P<0.01, P<0.05)。见表 3。
a-对照组;b-中药大剂量组;
c-中药中剂量组;d-中药小剂量组;e-丹参组
图 1　不同组血栓 HE染色(100×)
表 3　各组血粘度检测结果( x±s)
组别 剂量 /mg· kg-1
血黏度 /η.mPa-1.s-1
低切 中切 高切
对照 - 10.46±1.38 5.49±0.71 4.18±0.57
丹参 70 17.99±2.18＊Δ 8.11±0.95＊Δ 5.92±0.59＊Δ
模型 - 19.83±1.71 9.05±0.82 6.62±0.47
中药中剂量 4 000 17.1±2.96＊＊ΔΔ 7.5±1.36＊＊ΔΔ 5.51±0.93＊＊ΔΔ
　　与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ΔP<0.05;与模型组比较 , ΔΔP<0.01
·46·
时珍国医国药 2010年第 21卷第 1期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.1
4 　讨论
血栓形成是一个复杂的过程 ,血小板在血栓形成过程中是一
重要因子。当血管受损伤时 , 血小板在病变部位蓄积 , 导致血栓
形成闭塞血管 , 引起缺血性组织损伤。血栓形成是许多心脑血管
疾病的主要发病原因。阻止血栓形成是预防心脑血管疾病的关
键 [ 5] 。本文采用动静脉旁路模型观察了毛葡萄叶水提物 3种剂
量(1, 2, 4 g· kg-1)对血栓形成的影响及作用机制。 从实验结果
可以看出中药(大 、中 、小剂量)组都有明显抗血栓形成作用 , 给
药组的血栓干 、湿重与对照组相比明显减小。血栓的 HE染色也
可以看出各组均是混合型血栓(红细胞 、血小板和白细胞组成),
但对照组血栓体是以血小板形成的结构最明显 ,给药大 、中 、小剂
量组血栓形成明显小于模型组且栓体较疏松 ,血栓体中血小板形
成的结构明显小于对照组 ,特别中剂量药物组血小板形成的结构
明显减少。
血栓素 A2(TXA2)主要在血小板生成 , 能引起微血管收缩 、
血小板凝聚 、血栓形成和止血。 而前列环素(PGI
2
)主要在血管
壁生成 , 作用与 TXA2相反呈强力扩张微血管 ,抗血小板凝聚 ,防
止血栓形成 , 正常生理状态下 , 完整无损的血管内皮细胞具有抑
制血小板在其表面粘附聚集和活化 、抗血栓功能 , 在循环血液中
TXA2和 PGI2的浓度处于相对平衡状态 , 二者在体内形成一种精
巧的分子调节机制 , 对血管舒缩 , 血小板聚集及血栓形成起着重
要的调节作用。 由于二者的极不稳定 , TXA2 半衰期为 30 s,
PGI2的半衰期也仅有 3 min,所以二者分泌后便迅速稳定代谢为
TXB2和 6-Keto-PGF1a[ 6] , 因此通常通过测定 TXB2和 6-Keto
-PGF1a的变化来反映 TXA2和 PGI2的变化情况 , 从本实验结果
表明毛葡萄小 、中 、大剂量组能明显降低血浆 TXB2含量 , 而升高
6-keto-PGF1α含量 ,其中中剂量效果最好;与阳性药物丹参组
对照其与中剂量组也好于丹参组。说明毛葡萄叶提取液的抗血
栓作用与 TXB2和 6-keto-PGF1α水平相关。
中医理论认为心脑血管疾病是 “暴怒”所致肝阳上亢 , 突遇
外寒之邪侵袭可引发寒凝气滞 , 致使血行不畅 、脉络不通最终造
成血淤 [ 3, 6, 7] 。现代医学认为血黏度反映的是血液在流动时内摩
擦力的大小 , 内摩擦力越大 ,血液的淤度就越大 ,它在血管中流动
的阻力就越大 , 血液流动的速度也就越慢 , 最终导致组织缺血缺
氧 , 如血管受损更易形成血栓 [ 8 , 9] 。许多研究证明血淤度增高是
由于红细胞的变形能力 、刚性及红细胞的聚集能力的改变 , 影响
微循环及组织 、器官的血流量 , 以导致疾病的发生。 本实验在急
性血淤模型上证明毛葡萄叶水提物对血黏度有明显改善作用 , 给
药组血黏度高切 , 中切 , 低切都明显低于对照模型组和丹参组。
该模型具有血液流变性指标变化稳定 , 重复性好 , 对活血化淤中
药的反应敏感等优点 [ 4, 10] 。
本实验首次观察了毛葡萄叶提取物对血栓形成的影响 , 并初
步证此药对血栓形成和降低血黏度有较好作用。毛葡萄来源广
泛 , 其提取工艺简单 , 具有广阔的开发前景。本实验结果为临床
上寻找良好的抗血栓药打下了一个较好基础。
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