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（2012-12-28 收稿/编辑 陈明伟）
广西地桃花药材HPLC指纹
图谱研究
曾海生 右江民族医学院附属医院 533000 广西百色市中山二路18号
陈 勇 谢 臻 周 媛* 广西中医药大学 530001
钟明玉 广西中医药大学第一附属医院 530023
摘 要 目的：建立广西地桃花药材的指纹图谱，为科学评价广西地
桃花药材质量提供参考依据。方法：采用高效液相色谱技术，色谱柱
Phenomenex Gemini C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），甲醇-0.5%冰乙酸水溶
液梯度洗脱，检测波长320 nm，柱温25 ℃，流速0.8 ml/min，分析时间
120 min，进样量为10 μl。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A
版）计算10批药材的相似度。结果：指纹图谱的方法考察包括精密度、稳定
性和重复性实验，均符合有关规定。建立的标准指纹图谱有17个共有峰，
与对照图谱相比较，每批药材色谱图相似度均在0.91以上。结论：该方法
精密度、稳定性及重现性较好，特征性及专属性强，可以有效地用于地桃
花原材料质量控制，为开发和利用地桃花药材资源提供依据。
关键词 地桃花；HPLC；指纹图谱
中图分类号：R284.1 文献标识码：A
文章编号：1003-0719（2013）01-0052-05
Research on HPLC Fingerprint of Urena Lobata L. Growing
in Guangxi
Zeng Haisheng（Afiliated Hopspital of Youjiang Medical University for
Nationalities，18 Zhongshaner Rd，Baise 533000，Guangxi, China）
ChenYong Xie Zhen Zhou Yuan（Guangxi University of Chinese Medicine,
Nanning 530001, Guangxi, China）
Zhong Mingyu（The First Affiliated Hospital of Guangxi University of
Chinese Medicine, Nanning 530023, Guangxi, China）
Abstract Objective：To establish HPLC fingerprint of Urena lobata L.
growing in Guangxi, in order to provide evidence of scientific assess for
quality control of it. Methods: HPLC was adopted on Phenomenex C18110A
column （5 μm, 4.6 mm×250 mm）by gradient elution with methanol-0.5%
glacial acetic acid, detection wavelength of 320 nm, column temperature of
25 ℃, flow rate of 0.8 ml·min-1, analysis time of 120 minutes, and injection
volume of 10 μl. Similarity of 10 different batches of Urena lobata L. was
基金项目：广西中医药管理局中医药科技专项课题（No.GZKZ1114）；广西中医药大学
重点课题（No.ZD2009016）
*通讯作者
·中药方剂·
·52· 52
（总 ）广西中医药 2013年 2月第 36卷第 1期
地桃花为锦葵科植物肖梵天花
Urena lobata L.的干燥地上部分［1］，
又名肖梵天花、野棉花、狗脚迹、大
梅花树、刺头婆、痴头婆、天下捶、
小朝阳、假桃花等，生于海拔200～
2 500 m的干热空旷地、荒坡或疏
林下，主产于广西、云南、贵州等
地，日本、越南、柬埔寨、老挝、泰
国、缅甸、印度、南美洲、澳大利亚、
非洲、美国等也有分布［2］。地桃花
味甘、辛、平，入肺、脾二经，具有祛
风利湿、活血消肿、清热解毒的功
效。地桃花主要含有木质素［3］、有
机酸类［4］、黄酮类［5-8］、酚酸类［9-10］、
挥发油［11］等成分。研究表明，地桃
花根茎的水提物和甲醇提取物均
有抑菌活性［12-13］，叶提取物的乙
酸乙酯和正丁醇分离部位具有抗
氧化作用［14］。
植物药具有复杂的化学成分，
而其活性成分常常不甚明确，为了
系统、完整地反映地桃花药材的质
量，本研究根据国家药典委员会颁
布的《中药注射剂指纹图谱研究的
技术要求（暂行）》［15］，采用高效液
相色谱法对广西不同产地地桃花
药材进行了指纹图谱的研究，为全
面控制地桃花药材及其制剂质量
提供科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent1100高效液相色
谱仪，含在线真空脱气机（G-1322A）、
高压四元梯度泵（G-1311A）、标准
自动进样器（G-1313A）、智能化柱
温箱（G-1316A）、可变波长检测器
（G-1314A）、二极管阵列检测器；
B3500S-MT超声波清洗器（上海必
能信公司）；Millipore Simplicity -
185超纯水器（美国密里博公司）；
BP211D电子分析天平（德国赛多
利斯公司）；中药色谱指纹图谱相
似度评价系统2004A（国家药典委
员会）。
1.2 试药 槲皮素对照品（由中
国药品生物制品检定所提供，供含
量测定用，批号100081-200907）；
甲醇（天津市四友生物医学技术有
限公司，色谱纯）；甲醇（北京化工
厂，优级纯）；冰乙酸［中国医药（集
团）上海化学试剂公司，分析纯］；
其他试剂均为分析纯。地桃花采自
广西各地，经广西中医药大学刘寿
养副教授鉴定为锦葵科植物肖梵
天花Urena lobata L.。产地详见表
1。
2 HPLC指纹图谱的建立
2.1 色谱条件 Phenomenex Gemini
C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱
柱；流动相为甲醇（C）-0.5%冰乙
酸（D），按表2中的条件进行梯度洗
脱；柱温25 ℃；进样量：10 μl；理论
塔板数以槲皮素计，应不低于5 000，
色谱图见图1~图2。
2.2 供试品溶液制备 取地桃花
药材粉末约1 g，精密称定，置锥形
瓶中，加76%甲醇12 ml，再加
0.69 ml盐酸，称定重量，95 ℃回流
提取68 min，放冷至室温，再称定
重量，用76%甲醇∶盐酸（12∶0.69）溶
液补足重量，滤过，取续滤液，用
0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
2.3 对照品溶液的制备 取槲皮
素对照品适量，加76%甲醇∶盐酸
（12∶0.69）制成0.13 mg/ml溶液，摇
匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即
得。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验 取编号为3号
的供试品，按2.2项方法制备供试
品溶液，在上述色谱条件下连续进
样6次，记录指纹图谱。结果表明，
各色谱峰的相对保留时间RSD值
在0.06%～0.86%之间，各峰相对峰
面积RSD值在1.74%～2.28%之间。
表明仪器的精密度良好。
2.4.2 稳定性试验 取编号为3号
的供试品，按2.2项方法制备供试
品溶液，在上述色谱条件下，分别
在0，2，4，8，12，24 h进样测定，记
录色谱图，结果各色谱峰的相对保
表2 梯度洗脱条件表
时间
（min）
甲醇
（%）
0.5%冰乙酸
（%）
0～120 35→55 65→45
表1 10批地桃花药材来源
编号 来源 采摘日期
1 广西博白 2009.9
2 广西南宁 2009.10
3 广西蒙山 2009.7
4 广西北流 2009.10
5 广西来宾 2010.7
6 广西玉林 2010.8
7 南宁武鸣 2011.7
8 广西上林 2011.7
9 广西横县 2011.7
10 广西合浦 2011.8
calculated with similarity evaluation system for chromatographic fingerprint of TCM（2004 A edition）. Results：The
method was validated through the following performance criteria, precision, stability and repeatability. There were 17
peaks in the standard fingerprint established, and the similarity of each batch was over 0.91 compared with the
control fingerprint. Conclusion：The HPLC fingerprint of Urena lobata L. has good precision, stability, repeatability,
and it is of specific, so that it can be used for quality control and further exploration of Urena lobata L.
Key words Urena lobata L.；HPLC；fingerprint
·53·53
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留时间RSD值在0.57%～1.70%之
间，各峰相对峰面积RSD值在
0.32%～2.06%之间，表明24 h 内供
试品溶液稳定性较好。
2.4.3 重现性试验 取编号为3号
的供试品，按供试品溶液制备方法
制备，在上述色谱条件下进样测
定，记录色谱图，考察实验方法的
重复性。结果6份样品的HPLC指纹
图谱中各色谱峰的相对保留时间
RSD值在0.70%～1.21%之间，各峰
相对峰面积RSD值在1.25%～2.16%
之间，表明该方法重复性较好。
2.5 各批地桃花药材色谱图的采
集 分别取10批不同产地的地桃
花药材粉末各1 g，精密称定，按2.2
项方法制备地桃花药材供试品溶
液，按2.1项色谱条件依次进行测定，
记录10批地桃花药材HPLC色谱
图，根据图1及图2的检测结果，可
以确定15号峰为槲皮素色谱峰。10
批地桃花指纹图谱叠加图见图3。
2.6 共有峰的确定 10批不同产
地地桃花样品的色谱指纹图谱虽
然有一定差异，但其中有17个色谱
峰为地桃花药材的共有特征峰，约
占总峰面积的78%，其保留时间分
别为8.37，12.53，20.33，21.61，25.41，
30.31，32.84，35.34，40.94，44.16，
46.72，51.60，56.04，66.52，76.25，
96.36，100.70 min，这些特征峰可
作为控制地桃花药材质量的标准
之一。非共有色谱峰没有特定的规
律，可视为不同样品之间的差异。
以15号色谱峰为参照峰（S峰），计
算共有特征峰的相对保留时间和
相对峰面积，结果见表3、表4。
2.7 地桃花药材相似度评价 本实
验采用《中药色谱指纹图谱相似度
评价系统A版》对地桃花药材HPLC
指纹图谱进行相似度计算，结果10
批次地桃花药材中所有批次与对照
指纹图谱的相似度均大于0.91，表明
地桃花药材与对照指纹图谱有较好
的一致性，本方法可用于综合评价
药材的整体质量。计算结果见表5。
3 讨 论
3.1 中药材的成分复杂，选择单一
流动相一般无法达到很好的分离，
本实验采用梯度洗脱方法，通过调
节控制洗脱程序，使样品各成分在
整个分析时间段内充分分离。同
时，为了保证方法的稳定和重现，
分离度应稍大，各色谱峰间距应比
较均匀一致。大多数情况下，醇-水
系统由于热力学和可压缩性因素
影响，在梯度洗脱时易导致基线漂
移，为了避免梯度洗脱时的基线漂
移，曾选择甲醇-0.5%冰乙酸系统
为流动相，加入冰乙酸的目的是为
了改善色谱峰的分离程度及改善
峰形。通过多次实验摸索，最后确
定的洗脱程序可以获得重现性良
好的色谱图，符合指纹图谱研究的
要求。
3.2 10批不同产地地桃花样品的
色谱指纹图谱有一定差异，部分色
谱峰分离度未达到1.5以上，个别色
谱峰不是10批药材共有，故未确定
为共有峰。因此，共确定其中17个
色谱峰为地桃花药材的共有特征
峰，约占总峰面积的78%。相似度
·54· 54
（总 ）广西中医药 2013年 2月第 36卷第 1期
表4 10批地桃花共有峰的相对峰面积
编号
产地
平均值
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1 2.8517 2.7254 0.9112 0.9643 0.9644 1.5577 1.4047 1.0685 0.9112 0.9967 1.4356
2 2.8901 2.0188 1.6762 1.1853 1.1853 1.6040 1.5225 1.0115 1.6763 1.0587 1.5829
3 4.7726 4.5319 1.2575 1.8588 1.8588 1.6886 1.5039 1.0834 1.2576 1.1979 2.1011
4 3.9623 3.6634 2.6930 2.2303 2.2304 3.8338 3.3499 2.3703 2.6931 2.9295 2.9956
5 0.9990 0.9431 0.3666 0.7017 0.7016 0.5174 0.4422 0.4253 0.3667 0.5511 0.6015
6 2.5272 2.2143 0.8463 0.9236 0.9601 1.1494 1.0287 0.7346 0.8464 0.7486 1.1979
7 1.6735 1.5762 1.2323 3.3143 3.3144 1.7844 1.8161 1.3074 1.2323 1.2194 1.8470
8 5.2679 4.8333 7.5247 8.2430 8.2434 9.9141 8.9070 6.4549 7.5253 6.5932 7.3507
9 2.3887 2.0864 1.7218 1.9510 1.9510 2.3409 2.0787 1.4925 1.7219 1.3855 1.9118
10 1.9030 1.7965 2.5890 2.1431 2.1431 3.3224 2.9462 2.1639 2.5893 1.9246 2.3521
11 3.5974 3.2963 3.4521 3.7989 3.7992 4.7325 4.0524 2.9265 3.4523 2.8744 3.5982
12 3.8615 3.7708 1.5750 3.0757 3.0758 3.1275 2.4129 1.4880 1.5751 1.0036 2.4966
13 6.6833 6.1140 6.3580 6.8671 6.8674 8.3628 7.4878 5.4871 6.3584 4.8879 6.5474
14 2.2977 1.7343 2.7296 1.6101 1.2022 3.8445 3.1527 2.2965 2.7298 1.8118 2.3409
15 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000
16 4.1898 3.8348 1.7945 2.0862 2.0862 2.3967 2.1329 1.5518 1.7947 1.6523 2.3520
17 4.0713 3.7416 1.8607 1.8851 1.8851 2.3993 2.1813 1.5930 1.8609 1.6349 2.3113
表3 10批地桃花共有峰的相对保留时间
编号
产地
平均值
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1 0.1084 0.1086 0.1095 0.1085 0.1085 0.1092 0.1092 0.1094 0.1095 0.1084 0.1089
2 0.1625 0.1629 0.1634 0.1631 0.1631 0.1632 0.1631 0.1634 0.1634 0.1631 0.1631
3 0.2663 0.2665 0.2671 0.2676 0.2676 0.2672 0.2666 0.2670 0.2671 0.2668 0.2670
4 0.2847 0.2850 0.2851 0.2736 0.2736 0.2844 0.2841 0.2846 0.2850 0.2860 0.2826
5 0.3295 0.3301 0.3310 0.3304 0.3304 0.3313 0.3306 0.3309 0.3310 0.3300 0.3305
6 0.3984 0.3986 0.3989 0.3981 0.3982 0.3991 0.3979 0.4044 0.3989 0.3994 0.3992
7 0.4287 0.4291 0.4309 0.4300 0.4300 0.4316 0.4420 0.4443 0.4308 0.4290 0.4327
8 0.4782 0.4777 0.4712 0.4574 0.4574 0.4673 0.4676 0.4695 0.4712 0.4784 0.4696
9 0.5394 0.5392 0.5369 0.5255 0.5255 0.5343 0.5336 0.5353 0.5369 0.5417 0.5348
10 0.5809 0.5813 0.5792 0.5636 0.5635 0.5750 0.5751 0.5770 0.5792 0.5839 0.5759
11 0.6087 0.6091 0.6127 0.6094 0.6094 0.6135 0.6120 0.6120 0.6127 0.6087 0.6108
12 0.6734 0.6736 0.6768 0.6736 0.6736 0.6787 0.6766 0.6763 0.6767 0.6730 0.6752
13 0.7425 0.7418 0.7350 0.7136 0.7136 0.7289 0.7299 0.7321 0.7350 0.7426 0.7315
14 0.8684 0.8694 0.8724 0.8474 0.8686 0.8721 0.8718 0.8717 0.8724 0.8697 0.8684
15 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000
16 1.2628 1.2638 1.2633 1.2621 1.2621 1.2638 1.2660 1.2653 1.2632 1.2627 1.2635
17 1.3202 1.3211 1.3206 1.3190 1.3190 1.3212 1.3229 1.3226 1.3206 1.3203 1.3207
·55·55
（总 ） 广西中医药 2013年 2月第 36卷第 1期
分析结果表明，10批不同产地地桃
花样品与共有模式的相似度均大
于0.91，表明本文建立地桃花指纹
图谱可体现其药材共性特征，有利
于质量控制的提高。
3.3 本实验对不同产地地桃花药
材采用高效液相色谱法进行了系
统考察。对于参照峰的选择，图谱
中6号峰和15号峰分别为已知的成
分咖啡酸和槲皮素。由于6号峰没
有达到基线分离，且峰面积过小，
以6号峰为参照峰不合适。因此，选
取15号峰槲皮素为指纹图谱研究
的参照物，且该成分出峰时间较适
中。
3.4 本实验建立了地桃花药材的
HPLC指纹图谱分析方法，方法稳
定、可靠，重现性好，可为地桃花药
材的质量评价及控制提供科学依
据。
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（2012-12-28 收稿/编辑 陈明伟）
表5 10个产地地桃花色谱图相似度数据
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 对照指纹图谱
S1 1 0.985 0.944 0.925 0.920 0.914 0.915 0.932 0.910 0.944 0.939
S2 0.985 1 0.943 0.930 0.926 0.933 0.932 0.946 0.928 0.943 0.953
S3 0.944 0.943 1 0.921 0.916 0.920 0.922 0.920 0.918 1 0.939
S4 0.925 0.930 0.921 1 0.991 0.987 0.985 0.971 0.979 0.921 0.990
S5 0.920 0.926 0.916 0.991 1 0.976 0.973 0.964 0.979 0.916 0.982
S6 0.914 0.933 0.920 0.987 0.976 1 0.998 0.965 0.991 0.920 0.991
S7 0.915 0.932 0.922 0.985 0.973 0.998 1 0.962 0.994 0.922 0.992
S8 0.932 0.946 0.920 0.971 0.964 0.965 0.962 1 0.956 0.920 0.978
S9 0.910 0.928 0.918 0.979 0.979 0.991 0.994 0.956 1 0.918 0.987
S10 0.944 0.943 1 0.921 0.916 0.920 0.922 0.920 0.918 1 0.939
对照指纹图谱 0.939 0.953 0.939 0.990 0.982 0.991 0.992 0.978 0.987 0.939 1
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