全 文 ：·论　著 ·
复方冬红合剂的稳定性考察
金芝贵 ,顾　方 ,陈晓文 ,吴飞华 ,李　钦(上海交通大学医学院附属第九人民医院药剂科 ,上海 200011)
[ 摘　要] 　目的:对复方冬红合剂的稳定性进行考察。方法:根据长期稳定性实验方法 , 检测复方冬红合剂的性状 、相对密
度 、pH 值及葛根素含量。结果:复方冬红合剂在一年内考核指标无显著性变化。结论:该制剂在一年内质量稳定。
[ 关键词] 　复方冬红合剂;药物稳定性;色谱法 ,高压液相
[ 中图分类号] 　R 927.1　　　[ 文献标识码] 　A　　　[ 文章编号] 　1671-2838(2008)05-0373-03
Investigation on stability of Compound Donghong Mixture
JIN Zhi-gui , GU Fang , CH EN Xiao-wen ,WU Fei-hua , L I Q in(Depar tment of Pharmacy , the Ninth Peoples H ospital affiliated to
the Medical Co llege of Shanghai Jiao tong Univ ersity , Shanghai 200011 , China)
[ ABSTRACT] 　Objective:To investig ate the stability o f Compound Donghong M ix ture.Methods:According to the method o f
long-term stability e xperiment , the pH value , rela tive density and the content of puerarin in the Compound Donghong M ix ture
were determined.Results:There w as no significant change in above pa rameters o f Compound Donghong M ixture in one year.
Conclusion:Com pound Donghong M ix ture is stable in quality in one yea r.
[ KEY WORDS] 　Compound Donghong M ix tur e;drug stability;chroma tog raphy , high pressure liquid
[ Pha rm Care & Res , 2008 , 8(5):373-375]
[ 作者简介] 　金芝贵(1954-),男(回族), 副主任药师.
E-mail:g reen fo rest@sina.com
　　复方冬红合剂是上海交通大学医学院附属第九
人民医院研制的院内制剂 ,由葛根 、西红花等中药组
成 ,具有活血化瘀 、清热凉血的功效 ,适用于动脉硬
化闭塞症 、糖尿病合并动脉闭塞症 、各种血管腔内成
型术后等由于瘀血阻滞引起的各种血管病症 ,临床
疗效显著 。处方中葛根含黄酮类成分 ,其中葛根素
(puerarin)为主要活性成分 ,具有增强脑及冠状血
管血流量 ,改善脑循环及外周循环的作用 ,可作为该
合剂主要质量标准控制指标。为保证该制剂的安全
有效 ,作者根据长期稳定性实验方法 ,检测该制剂中
葛根素含量 、pH 值及相对密度在一年内的变化情
况 ,现将有关实验方法及结果报道如下 。
1　材　料
1.1　仪器　Waters 2965型高效液相色谱仪(美国
Waters 公司);FA1004 分析天平(上海天平仪器
厂);附温比重瓶(上海崇明建设玻璃仪器厂);pHS-
3C精密 pH 计(上海雷磁仪器厂)。
1.2　试药　野葛根(产地江西 ,批号 050510)、毛冬
青(产地贵州 ,批号 050611)、西红花(进口 , 批号
050822)均购自上海童涵春中药饮片厂;复方冬红合
剂(本院自制 ,批号 051211 、051213 、051217);葛根
素对照品购自中国药品生物制品检定所 , 批号
110752-200511;甲醇(色谱纯 ,上海陆都化学试剂
厂);实验用水为 Millipore过滤水 。
2　方法和结果
2.1　合剂制备　将葛根等中药饮片用水浸泡 ,充分
浸湿后 ,加水过药面 2 ～ 4 cm ,煎煮两次 ,每次 1 h ,
过滤 ,合并滤液。滤液减压浓缩至约 300 mL ,冷却 ,
加入 2倍量的乙醇 ,静置过夜 ,过滤 ,回收乙醇至药
液约200 mL ,过滤 ,加入苯甲酸钠 3 g ,搅匀 ,加水至
1 000 mL ,灌封 ,灭菌 ,即得 。
2.2　性状和 pH 值考察　将 3批复方冬红合剂置
于常温 、常湿下 ,分别于 0 、3 、6 、9 、12 个月后进行考
察 。复方冬红合剂为深棕色液体 ,有少量轻摇即散
的沉淀 。在上述保存条件下 , 3批样品在一年内性
状稳定 。根据 2005年版《中华人民共和国药典》一
部合剂制剂通则的规定 ,对合剂的 pH 值进行监控 ,
检测结果见表 1。
表 1　不同时间样品的 pH值
Table 1　pH values of the samples at different time
(n=3)
批号 0月 3月 6月 9月 12月 平均值 RSD(%)
051211 4.68 4.75 5.01 4.82 4.80 4.81 2.56
051213 4.43 4.65 4.70 4.62 4.67 4.61 2.32
051217 4.81 4.93 5.11 5.00 4.91 4.95 2.26
·373·药学服务与研究　Pharm Care &Res　2008 Oct;8(5)金芝贵 ,等.复方冬红合剂的稳定性考察
2.3　相对密度考察　参照 2005 年版《中华人民共
和国药典》一部中相对密度测定法[ 1] ,取洁净 、干燥
的比重瓶 ,精密称定重量 ,装满复方冬红合剂 ,装上
温度计 ,置 20 ℃水浴中放置至合剂温度达20 ℃,用
滤纸擦去溢出侧管的液体 ,立即盖上罩 ,将比重瓶从
水中取出 ,将比重瓶外壁用滤纸擦拭干净 ,精密称
定 ,减去比重瓶重 ,求得合剂重量。再将比重瓶洗净
后 ,重新装满新沸过的冷水 ,依上法测得 20 ℃水的
重量 ,按公式计算:合剂相对密度=合剂重量/水重
量。检测结果见表 2。
表 2　不同时间样品的相对密度
Table 2　Relat ive densities of the samples at different time
(n=3)
批号 0月 3月 6月 9月 12月 平均值 RSD(%)
051211 1.023 1.019 1.025 1.029 1.025 1.024 0.354
051213 1.021 1.022 1.025 1.029 1.026 1.025 0.315
051217 1.025 1.028 1.030 1.031 1.028 1.028 0.223
2.4　含量测定
2.4.1 　色谱条件 　色谱柱为 Diamonsil C18柱
(250 mm×4.6 mm ,5 μm);流动相:甲醇-水(30 ∶
70),流速 1 .2 mL/min ,柱温为 25 ℃,检测波长为
250 nm ,进样量 10 μL。
2.4.2　对照品溶液制备　精密称取在60 ℃真空干
燥 4 h的葛根素对照品适量 ,加甲醇稀释成 56 μg/
mL ,作为对照品溶液 。
2.4.3　供试品溶液制备　将以上 3个批号的复方
冬红合剂过滤(滤膜孔径 0.45 μm),分别精密吸取
50 μL ,置 25 mL 容量瓶内 ,加水稀释至刻度 ,即得 。
2.4.4　阴性对照溶液制备　按 2.1项下合剂制备
方法制备不含葛根的合剂样品 ,再按 2.4.3项下方
法制备阴性对照溶液。
分别精密吸取供试品 、葛根素对照品与阴性对
照溶液各 10 μL ,以 2.4.1项下色谱条件进样测定。
所得图谱见图 1。
2.4.5　标准曲线的制备　按2.4.2项下方法制备
图 1　葛根素的 HPLC谱图
Fig 1　HPLC photograms of puerarin
A:对照品溶液;B:样品溶液;C:阴性对照溶液
浓度为0.112 mg/mL 的对照品储备液 ,精密吸取该
储备液 1 、2 、4 、6 、8 、10 mL ,分别置 10 mL 容量瓶
中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,然后按 2.4.1项下色
谱条件进样 ,以葛根素峰面积(A)为纵坐标 ,葛根素
浓度(c)为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得回归方程为:
A =13 900 c-47 800 , r=0.999 9 ,葛根素在 11.2 ～
112 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。
2.4.6　精密度 、重复性和回收率实验　精密吸取对
照品溶液 6份 ,按 2.4.1项下色谱条件分别进样测
定葛根素含量 ,得 RSD为 1.09%(n=6),表明精密
度良好。精密吸取批号为 051211的复方冬红合剂 ,
按 2.4.3项下方法制备供试品溶液 6份 ,按 2.4.1
项下色谱条件进样分别测定葛根素含量 ,得 RSD为
1.15 %(n =6),表明重复性良好 。精密吸取上述供
试品溶液 0.5 mL 共6份 ,各精密加入 56 μg/mL 供
试品溶液 0.5 mL ,混匀 ,按上述色谱条件测定加样
回收率 。结果平均加样回收率为(100.20 ±0.72)%
(n =6)。
2.4.7　葛根素含量稳定性考察　按 2 .4 .1项下色
谱条件对 3批样品中葛根素含量进行考察 。结果在
一年内复方冬红合剂中的葛根素含量稳定 ,见表 3。
表 3　不同时间样品中葛根素含量
Table 3　The contents of puerarin in
the samples at different time
(n=3 , ρB/mg·mL -1)
批号 0月 3月 6月 9月 12月 平均值 RSD(%)
051211 22.549 21.715 21.574 20.854 20.930 21.524 3.194
051213 26.358 25.716 25.170 24.449 24.865 25.310 2.944
051217 27.077 26.492 26.107 25.735 25.562 26.194 2.485
·374· ISSN 1671-2838　Ph arm Care &Res　药学服务与研究　2008 Oct;8(5)www .pcarjournal.net.cn　E-mai l PharmCR@yahoo.com.cn　Phn/ Fax 86-21-65519829　　　　　　　　　　
3　讨　论
3批样品中 ,葛根素含量在考察时间内变化不
大 ,可能与其具有较稳定的 C-苷键化学结构有
关[ 2] 。pH 值变化可能会使中药合剂出现酸败 、产
气等变质现象 ,因此监控 pH 值具有重要意义 ,经考
察发现 ,3批复方冬红合剂样品在一年内 pH 值均
变化不大 。此外 ,在实验过程中 ,未见样品沉淀析出
明显增多 ,可能是由于复方冬红合剂的组方较简单 ,
制备工艺中醇沉浓度较高 ,除去了大部分高分子物
质。从实验结果可看出 , 3批样品在一年内性状稳
定 ,pH 值及相对密度都在合格范围内 ,样品中葛根
素含量在一年内均比较稳定 ,因此可认为复方冬红
合剂的质量在一年内是稳定可靠的。
[参考文献]
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[ 收稿日期] 　2008-01-10 [ 修回日期] 　2008-08-27
[ 本文编辑] 　阳凌燕　　姚春芳
(上接第 369 页)
2.1.2　色谱条件　Agilent Zo rbax SB-C8色谱柱(150 mm×
4.6 mm , 5 μm);流动相:乙腈-水(55 ∶45);检测波长:
215 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:50 ℃;进样量:20 μL。理
论塔板数以他克莫司计为 2 042。 在上述色谱条件下 , 取对
照溶液 、阴性对照溶液和供试品溶液进行测定 ,所得色谱图
见图 1。
2.1.3　线性关系的考察　精密量取他克莫司贮备液 0.1 、
0.2、0.5、1.0、2.0 mL ,置 10 m L量瓶中 , 分别加流动相稀释
至刻度 , 摇匀 ,按上述色谱条件进行测定 , 以峰面积 A 对浓
度 c(μg/m L)进行线性回归 ,得标准曲线方程:A =10.36 c-
1.610 , r = 0.999 9。 结果表明 , 他克莫司在 9.92 ～
198.4 μg/m L浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.1.4　稳定性实验　将他克莫司供试品溶液于室温条件下
放置 , 分别在 0、4 、8、12 、24 、48 h 测定峰面积 , 所得 RSD 为
0.82%(n=6),表明样品溶液在 48 h 内稳定。
图 1　他克莫司体温敏感眼用凝胶的 HPLC谱图
A:对照品溶液;B:阴性对照溶液;C:供试品溶液
2.1.5　精密度实验　精密吸取 3 种浓度分别为148.8 、99.2
和 19.84μg/ m L的他克莫司对照品溶液 , 同日内各连续测
定5次;同一溶液每日进样 1 次 , 连续进样 5 d , 测定峰面积。
结果他克莫司的日内 、日间 RSD 分别为 0.31%和 0.75%
(n=5),表明方法的精密度良好。
2.1.6　重复性实验　取同一批样品(批号:070526), 精密量
取 6份 , 按供试品溶液制备方法处理 , 平行测定峰面积 , 计算
RSD为 0.49%(n=6), 表明方法的重复性良好。
2.1.7　回收率测定　分别精密量取对照品贮备液 0.8 、
1.0 、1.2 mL 置于 10 mL 量瓶中 , 并分别加入空白凝胶 2 g ,
以流动相溶解 ,涡旋振荡 10 min 后用流动相稀释至刻度 , 摇
匀 , 0.45 μm 微孔滤膜过滤后进样。每个浓度的样品配制
3 份 , 按上述色谱条件进样测定。 计算得平均回收率为
99.7%, RSD为 0.87%(n=3)。结果表明该方法准确度高 ,
可满足样品的分析要求。
2.1.8　样品含量测定　精密称取他克莫司眼用凝胶适量 ,
按 2.1.1 项下方法制备供试品溶液。取20 μL注入 H PLC
仪 , 记录色谱图。另取他克莫司对照品适量 , 同法测定。 以
外标法计算含量 , 测定 3 批样品的含量分别为 100.9%、
100.5%和 99.7%。
2.2　眼刺激性实验　采用动物同体左右侧自身对比法 , 兔
右眼滴入他克莫司体温敏感眼用凝胶 100 μL(浓度为
500 μg/m L),左眼滴入生理盐水 100 μL 作为对照。给药后
使兔眼被动闭合 10 s , 使药液与局部有充分接触。每日给药
3 次 ,连续给药 2周。每天给药前及最后一次给药后 1、2、4、
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