全 文 ：HPLC法测定复方冬红合剂中葛根素含量
顾　方 ,李　钦 ,陈晓文 ,吴飞华 ,金芝贵
(上海交通大学医学院附属第九人民医院 ,上海 200011)
　　[ 摘要] 　目的　用高效液相色谱(HPLC)法测定复方冬红合剂中葛根素的含量。方法　采用 Diamonsil C18(250
mm×4.6 mm , 5μm),以甲醇-水(30∶70)为流动相 , 流速 1.2 mL/ min ,柱温为 25 ℃,检测波长 250 nm。 结果　葛根
素在 11.2～ 112 mg/ L的浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9)。平均加样回收率为 100.2%, RSD为 0.72%(n =
6)。结论　本法简便 ,结果准确可靠 , 可用于复方冬红合剂的质量控制。
[ 关键词] 　高效液相色谱法;复方冬红合剂;葛根素
[ 中图分类号] 　R927.2　　　[ 文献标识码] 　B　　　[文章编号] 　1008-8849(2010)07-0908-02
　　复方冬红合剂是我院研究的院内制剂 ,由葛根 、西红花等
中药组成 , 具有活血化瘀 、清热凉血的功效 , 适用于动脉硬化
闭塞症 ,各种血管腔内成型术后等由于淤血阻滞引起的各种
血管病症 ,临床疗效显著。处方中葛根含黄酮类成分 , 其中葛
根素为主要活性成分 ,具有增强脑及冠状血管血流量 , 改善脑
循环及外周循环的作用。为有效地控制药品质量 , 笔者采用
高效液相色谱(HPLC)法测定复方冬红合剂中葛根素的含量 ,
建立质量控制标准。
1　材　　料
1.1　仪器　Waters 2965HPLC 仪(在线真空脱气机 , 四元数
码梯度泵 , 128 自动进样器 , 智能柱温箱 , Waters 2487 紫外检
测器 , Empower色谱管理系统);FA1004 分析天平(上海天平
仪器厂);附温比重瓶(上海崇明建设玻璃仪器厂);pHS -3C
精密 pH 计(上海雷磁仪器厂)。
1.2　试药　野葛根(产地江西 , 批号:050510), 毛冬青(产地
贵州 ,批号:050611),西红花(进口 ,批号:050822)。以上 3 味
饮片均购自上海童涵春中药饮片厂。复方冬红合剂(本院自
制 ,批号:051211 , 051213 , 051217)。 葛根素对照品购自中国
药品生物制品检定所 ,批号:110752-200511。甲醇(色谱纯 ,
上海陆都化学试剂厂)。实验用水为 MiLLipore 过滤水。
2　方法和结果
2.1　合剂制备　将葛根等中药饮片用水浸泡 , 充分浸湿后 ,
加水过药面 2～ 4 cm ,煎煮 2 次 , 每次 1 h ,滤过 ,合并滤液 , 滤
液减压浓缩至约 300 mL , 冷却 , 加入 2 倍量的乙醇 , 静置过
夜 ,滤过回收乙醇至药液约 200 mL ,滤过 , 加入苯甲酸钠 3 g ,
搅匀 ,加水至 1 000 mL , 灌封 ,灭菌 , 即得。
2.2　色谱条件[ 1] 　色谱柱为 Diamonsil C18(250 mm ×4.6
mm , 5μm), 流动相:甲醇-水(30∶70), 流速 1.2 mL/min , 柱
温为 25 ℃, 检测波长为 250 nm ,进样量 10μL。
2.3　溶液制备
2.3.1　对照品溶液制备　精密称取在 60 ℃真空干燥 4 h 的
葛根素对照品适量 ,加甲醇稀释成 56 mg/ L 的溶液 ,作为对照
品溶液。
2.3.2　供试品溶液制备[ 2] 　将 3 个批号的复方冬红合剂滤
过(孔径 0.45μm), 分别精密吸取 50μL ,置 25 m L容量瓶内 ,
加水稀释至刻度 , 即得。
2.3.3　阴性对照品溶液制备　按 2.1 段中合剂制备条件制
备不含葛根的合剂样品 , 再按 2.3.2 段中供试品溶液制备条
件制备阴性对照品溶液 。
2.4　含量测定　分别精密吸取供试品 、葛根素对照品与阴性
对照品溶液各10μL ,以 2.2 段中色谱条件进样测定。所得图
谱见图 1 ～ 3。
图 1　对照品溶液 HPLC图谱
图 2　供试品溶液 HPLC图谱
图 3　阴性对照品溶液 HPLC图谱
·908· 现代中西医结合杂志 Modern Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine 2010 Mar , 19(7)
2.5　标准曲线的制备　以 2.3.1 对照品溶液制备条件制备
浓度为 0.112 g/ L 对照品储备溶液 , 精密吸取该储备液 1 , 2 ,
4 , 6 , 8 , 10 m L分别置 10 m L容量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 ,摇
匀 ,然后按 2.2 段中色谱条件进样 , 以葛根素峰面积(A)为纵
坐标 Y ,葛根素浓度(C)为横坐标 X , 绘制标准曲线 , 得回归
方程为 Y =13 900X -47 800 , r=0.999 9 , 葛根素在 11.2 ～
112 mg/ L 的浓度范围内与峰面积线性关系良好。
2.6　精密度和回收率实验　精密吸取对照品溶液 6 份 , 按
2.2 段中色谱条件分别进样测定葛根素含量 , 得 RSD 为
1.09%(n =6), 精密度良好。精密吸取批号为 051211 的复
方冬红合剂 ,按 2.3.2 段中方法制备供试品溶液 6 份 , 按 2.2
段中色谱条件分别进样测定葛根素含量 , 得 RSD 为 1.15%
(n=6), 重复性良好。精密吸取供试品溶液 0.5 mL 共 6 份 ,
各精密加入 56 mg/ L供试品溶液 0.5 mL , 混匀 ,按 2.2 段中
色谱条件测定加样回收率 ,结果为(100.2±0.72)%(n=6)。
3　讨　　论
笔者发现 , 在流速为 1.0 mL/ min 时葛根素出峰时间较
长 , 因此经过多次试验 ,调高流速至 1.2 mL/ min , 既能获得较
好的峰型 , 又能加快出峰时间 , 此外在柱温设定在 25 ℃时可
获得最为理想的峰型。
[ 参 考 文 献 ]
[ 1] 　国家药典委员会.中华人民共和国药典[ M] .北京:化学工业出
版社 , 2005
[ 2] 　赵绪元 ,李焕德 , 向大雄 ,等.加味脑乐静合剂稳定性的跟踪分
析[ J] .中草药 , 2002 , 33(2):118-120
[ 收稿日期] 　2009-07-25
高效液相色谱法测定栀子柏皮软胶囊体外溶出度
张伟晶1 ,车　鑫2 ,费大龙3
(1.辽宁省桓仁县人民医院 ,辽宁 桓仁 117200;2.沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 110016;3.辽宁
天士力医药有限公司 ,辽宁 沈阳 110001)
　　[摘要] 　目的　研究栀子柏皮软胶囊体外溶出度特点并建立其测定方法。方法　以 0.1 mol/ L盐酸溶液900 m L
为溶出递质 ,转速为 100 r/min;采用高效液相色谱法测定栀子柏皮软胶囊的体外溶出度。结果　30 min 栀子柏皮软
胶囊的溶出度均大于标示量的 80%。结论　高效液相色谱法测定栀子柏皮软胶囊的溶出度稳定可行。
[ 关键词] 　栀子柏皮软胶囊;体外溶出度;高效液相色谱法
[ 中图分类号] 　R927.2　　　[ 文献标识码] 　B　　　[文章编号] 　1008-8849(2010)07-0909-02
　　栀子柏皮软胶囊是由栀子 、黄柏 、炙甘草 3 味中药经提取
精制而成的一种新型中药制剂。本方源自《伤寒论》中栀子柏
皮汤[ 1-2] , 具有清热解毒 、利湿退黄之功效 , 主要用于黄疸型
肝炎 、皮肤瘙痒 、湿疹等症的治疗。在传统古方的基础上 , 开
发的新药栀子柏皮软胶囊去除了汤剂味苦难服的缺点 , 可以
提高患者的顺应性。笔者对栀子柏皮软胶囊体外溶出度的实
验方法和测定条件进行了研究。
1　实验材料
1.1　仪器　Lc-10AT 型高效液相色谱仪(日本岛津), SPD-
10AV型紫外检测器 , ANASTAR色谱工作站 , AE100 电子天
平(METTLER), Rcz-8A 型智能药物溶出仪(天津大学精密
仪器厂)。
1.2　试药　乙腈为色谱纯 , 磷酸 、盐酸均为分析纯 , 水为二次
蒸馏水 ,栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所), 软胶囊
(自制)。
2　方法与结果
2.1　方法学考察
2.1.1　色谱条件[ 3] 　色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm×4.6
mm , 5μm , 迪马公司);流动相:乙腈-水(15:85);流速:1.0
m L/min , 检测波长:238 nm。进样量 10μL。理论板数按栀子
苷峰计算应不低于 3 000。
2.1.2　对照品溶液制备　精密称取栀子苷对照品 18.4 mg ,
置 100 m L量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 , 得对照品
储备液。精密量取对照品储备液 2.5 mL ,置 10 m L 量瓶中 ,
加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 ,得对照品溶液(46 mg/ L)。
2.1.3　供试品溶液制备　取本品 20 粒 , 称质量 ,挤出内容物
混匀 , 乙醚洗净囊壳 , 称定囊壳质量 , 计算平均粒质量。精密
称取内容物 0.6 g , 置具塞锥形瓶中 , 加甲醇 25 mL , 精密称
定 , 超声溶解 ,放冷 , 以甲醇补足减失的质量 ,滤过 , 精密量取
续滤液 10 mL , 置 25 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 即
得供试品溶液。
2.1.4　线性关系考察　精密量取对照品储备液适量 ,加甲醇
稀释成92 mg/ L 的溶液 , 分别量取此溶液 1.5 , 3.0 , 4.5 , 6.0 ,
7.5 mL置于 10 mL 量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀。分别
吸取 10μL注入液相色谱仪 , 记录色谱图 ,以峰面积(A)对栀
子苷浓度(X)做线性回归 , 结果表明 ,栀子苷在 13.8～ 69 mg/
L的浓度范围内线性关系良好。 回归方程为:A =3.39 ×
1 04X +8.79×102 , r=0.999 9。测定结果:X =13.8 , A =
468 720;X =27.6 , A=936 818;X =41.4 , A=1 404 455;X =
55.2 , A=1 873 258;X =69 , A=2 339 845。
2.1.5　空白辅料干扰试验　按处方量的比例 ,去除主药外的
辅料 , 按工艺方法配制 , 精密称取适量 ,置 50 mL 量瓶中 , 加
·909·现代中西医结合杂志 Modern Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine 2010 Mar , 19(7)