全 文 ：遗传 HR ED EIT AS(B e ij in g) 丹 ( 3): 3 3一 34 82 1 9
花烟草原生质体的再生植株` ’
李向辉 黄美娟 孙勇如 李文彬
(中国科学院遗传研究所 , 北京 )
花烟草 (N i co t’a , 。 。 al t。 L诚 O ot ) 由于其
有明显的形态特点以及含有 2 , ~ 18 个染色体
的细胞学特征易区别于普通烟草 ( 2。 ~ 4 8 ) 。这
种野生的烟草是组织培养及细胞杂交中的一个
有用材料 。 E劝u r ign , P .切 曾由此种烟草的单倍
体叶肉原生质体培养出再生植株 , 但其倍性变
化较多。 我们选用 N . al at a 的二倍体叶肉原生
质体进行分化培养 , 获得大量稳定的二倍体再
生植株 。
在试验中我们以 N . a lat 。 幼叶分 离 原 生
质体 。 在 0 . ,外 e e lx过 as e o n o z u k a -R l o , 0 . 2外
m a e e r o即m 。 -R l o 和 0 . 6材甘露醇混合酶液中 ,
25 ℃ 下经 3一 4小时 ,形成大量深绿色的原生质
体 (图版 I , 1 ) 。 净洗后 , 以 1 x 10 4/ m l 的原生
质体密度接种于稍加改动的小麦叶肉原生质体
的培养基 乌囚中(表 1 ) , 放在 27 ℃低光照 ( 5 0
四周后产生大量愈伤组织 (图版 I , 4 ) 。
当把它们转移到不同的分化培养 基 上 时 ,
即改良的 M S 培养基 t’1 加人不同浓度的生长激
素 ( 0 . 2m g /ir A A , l . om g / 1 6币 A P ; 或 o . Zm g / I
IA A
, 5务椰子汁 )以及含有 l m g I/ 6- BA P 的 B ,
洋菜培养基上 , 放置在 2 7℃ 、 1 0 0 0一 2 0 0 0 L u x
光照下进行分化 。 两周后 , 在含有 6一B A P 的
M s 培养基中长出大量绿色小苗 ( 52 株 ) , 除少
数愈伤组织外 , 几乎都能分化出小苗 (图版 I ,
, )
。 在含有 , 务椰子汁 (代替 6一 B A P )的 M s 培养
基中 , 经 2一 3 周后也分化出大量绿色小苗 。 由
不同试验次数的 1 80 块愈伤组织产生 出 76 株
绿色幼苗 , 约占接种愈伤组织的 40 外。 但是当
以含有 l m g l/ 6 e B A P 的 B S培养基进行培养时 ,
只有绿色愈伤组织 , 而没有分化出小苗 。
衰 1 原生质休培养苍
无机成分 m g / l 有机成分 m g /l 生长激素 m g / l
N H
一
N O ,
K N O
,
C a C I
: ·
ZH
:
0
M g s o 二 7 H : o
K H
: P O
-
F e
·
N a
一 E D T A a s
m i c r o e l e m e n t s a s
m
一
i n o s i t o l 10 0 N A A
14 8 0 lt h i a m i n e
一
H C I 引 6一 B A P
9 0 0 In i e o t i n i e a e id C O C O n U t
9 0 0 lg ly e i n e
. 引T IB A
8 0! P y r o d o x i
, l e 0
.
7 lg l u
M S lfO Ii
e a c i d 0
.
4ls u e r o s e
M S lb i
o t i n e 0
.
0 41P H
1
.
5
0
。
6
m i l k s %
0
.
5
0
。
4M
0
.
0 5几r
5
.
8
L u x 左右 ) 下培养 。 经 3一 5天后即可见到原生
质体膨大 、拉长 , 进人第一次再生细胞分裂 (图
版 I , 2 ) , 两周后可有 50 多以上的分裂频率 。 此
时加人等量新鲜的培养基 , 其中去除甘露醇 ,蔗
糖增到 0 . 06 M 的浓度 , 以利细胞分裂 。 过一 、 二
周后产生了大量的小细胞团 (图版 I , 3 ) 。 三 、
图 1 由 N · al at a 原生质体再生的完整植株
根的分化 , 是把小苗转移到 含 有 0 . 2m g 1/
反 X’ a ” g 为“ i 亡` a l . : R e g e n e r a t e d P l a n t f r o m P r o t o p l a ,七
of N ic o 宕i召” ` a l a 君口
1) N
.
o l a 忿。 植株材料部分 由 西德 M a x 一P l a n e k 一 In , t i t u t
f o r z证 h t u n g s f o r s c h u n g 的 0 . s e h i e d e r 博士提供 ,
并由 M a x 一 p l a n e k G e : e r e h a ft 提供部分资助 , 对此表
示感谢。
DOI : 10. 16288 /j . yczz. 1982. 03. 013
N A A的 M s固体培养基 1上 ,或不含任何生长
激素的 N a ga at T ak eb 的固体培养基上切 , 在这
些条件下 , 均能发生大量幼根 , 形成完整植株 。
把它们移植到花盆中能正常生长 (图 1 ) 。
上述工作是先后于科隆 (西德 )和北京的相
近条件下完成的 。 共获得 1 29 株正常 绿 色 植
株 。 取其幼根尖 , 用 0 . 01 务秋水仙碱液作前处
理 ,再在卡诺固定液中固定 ,水解后以改良的卡
宝染液染色 。 细胞学观察结果表明 , 由叶肉原
生质体再生的体细胞植株 具 有 2 , ~ 1: 8 条 染
色体 , 为正常的二倍体 (图版 I , 6 ) 。
试验也表明 , 环 培养基对茄科植物原生质
体培养是适合的 , 如对矮牵牛 、 烟草的原生质休
以及其融合体的培养都有较高的分裂频率 。 N .
al at 。 的分化试验说明 M S基本培养基补加适量
的 IA A 和 6一 B A P 或者以椰子汁代替 6一 B A P ,
对分化幼苗都有较好的效果 。 然而 , 以 B S 培养
基为基础 , 补加 6一 B A P , 则没能分化出 幼苗 。
由上述 4 次独立的试验中共得 到 1 29 株 幼 苗 ,
分化频率约占总愈伤组织数 目的 60 一 70 务 以
上 。 这种高的分化频率及能再生稳定的二倍体
植株的材料 , 可用于转化和融合试验 。
参 考 文 献
IJ1J.I`,
几
9习3. r
Lr.L
f
[ 4 ]
[ 5 ]
孙勇如、 李文彬 、 李向辉 : 1 97 9 . 遗传学报 , 6 ( 4 ) :
碍2 7护一4 3 3 .
B o u r g in
,
P
.
: 1 9 7 8
.
2
.
fP l
a 刀` e 几 P丙 , 5 10乙. , ( 8 7 ) :
5 5一石 4 .
L i X l助hg 叭 Y an Q i u hs en g , R u an g M幼 j u叨 ,
Sun Y un g ur an d U 刃Ve n b in : 1 98 0
. 协 A d v a n c . .
in rP
o t o p la砒 砚 s e ar 血 , p p . 2 1尽一 2 6 4 . B u d a p e 日.t
M u r a hs i g e
,
T
. 助 d P . S互。 0 9 : 1 9 6 2 . ;lP 万对 0 1.尹艺a 扎玄
aru
饥 , ( 1 5 ) : 47 3一 4 9? ,
N 昭a t a , T . an d 1 . T a k e b e : 1 9 7 1 . 尹 Ia 九 t a , ( 9 9 ) :
1 2一 2 0 .
辛 .寺之 平` .布之 . 均` 司脚 , 今` 命】简 报 l今 , 卞月竹`洲目洲 ~ 洲~ , 月~ +
介绍皮纹印图的新方法
人类的皮纹具有遗传特征 , 终身不变 。 某
些遗传性疾病患者常具有特异的皮纹类型 。 因
此 , 皮肤纹理的分析已应用于某些遗传性疾病
的鉴别诊断和法律上人身的识别 。 目前国内多
采用黑色油墨或红色印泥来制取肤纹 , 但易污
染手足 , 涂抹不均会影响印制效果 。 国外曾有
药液显色法的报道 , 但未介绍用何种试剂 。 我
们在开展皮纹研究工作中 , 经多种方法试验 , 发
现了两种新的简易方法 , 效果较为理想 。
(一 ) 筋三砚一扭签欲旅色反应法
取荀三酮 ( C尹p , · H 20 ) 配成 1 . 5多的水
榕液 , 倒在大搪瓷盘 中 , 将 16 开印图纸 (绘图纸
即可 )浸人盘内 , 立即用镊子取出 , 凉干备用 。
注意不能直接与手接触。
任选一种氨基酸 (组氨酸 、谷氨酸或精氨酸
等均可 ) , 配成 1 . 5 %的水溶液 ,倒人盛有海绵块
的摘瓷盘中做为印盒 。 使用时 , 受检者将手在
浸有氨基酸溶液的海绵上轻轻按一下 , 使药液
在手部均匀分布 , 待手部不湿不干时 , 捺在已凉
干的荀三酮印图纸上 。 纸下应垫一平整且有弹
性的物品 。 约半个小时即可显现出暗红色的皮
纹图形 。
(二 ) 普 . 士蓝颇色反应法
取亚铁氰化钾 [丸 F e ( e N ) ` · 3 H Zo ] 配成
2
.
5并的水溶液 , 用其浸湿印图纸凉干备用 。
用 2多三氯化铁 ( F e C I, · 6 H Zo ) 溶液制成
印盒 ,印图方法同上 ,立刻便显现出蓝色的皮纹
图形 。
以上两种方法 ,操作简便 , 显色清晰 , 不易
退色 , 且无异味 ,不污手足 , 易被受检者接受 。
( 山东省济宁医专生物学 、化学教研室 )
李向辉等 :花烟草原生质体 的再生植株 图版 I
1
.新分离的 N .a lI (ta原生质体 。 2.在 D, 培养基上第一次再生细胞分裂 。 3 . 第
二次细胞分裂。 .4 培养原生质体的愈伤组织 。 5 . 在改良 M S 培养基上 由愈伤组织
分化的茎叶 。 .6 N . al at a 再生植株根尖的中期染色体 。