全 文 ：第 25卷第 12期
2008年 12月
精 细 化 工
FINECHEMICALS
Vol.25, No.12
Dec.2 0 0 8
中药现代化技术
HPLC法测定帽蕊木茎皮中儿茶素的质量分数＊
贺光东 1, 2 ,于海平 3 ,姬志强 1, 2 ,康文艺1, 2＊
(1.河南大学 天然药物研究所 ,河南 开封　475004;2.河南大学 药学院 ,河南 开封　475004;3.中国医药科技出版社 , 北京　
100088)
摘要:该文首次用高效液相建立了帽蕊木茎皮中儿茶素质量分数的测定方法。选用 PurospherstarRP-C18色谱
柱(4.6 mm×250mm, 5μm,德国 Merck公司);流动相为 V(乙腈)∶V(高纯水)∶V(磷酸)=10∶89.1∶0.9;检测波长
278 nm;流速 1mL/min;柱温 25 ℃。儿茶素在 0.024 ～ 0.6μg内峰面积与质量呈良好的线性关系(r=0.999 9),
平均回收率为 104.68%。研究结果表明 , 该方法灵敏 、准确 、重现性好。该文报道工作的新颖性已为河南大学图
书馆 2008年 7月 2日出具的第 2008001号《科技查新报告》所证实。
关键词:HPLC;帽蕊木;儿茶素;中药现代化技术
中图分类号:R931.71　　文献标识码:A　　文章编号:1003-5214(2008)12-1198-03
DeterminationofCatechinintheStemBarkof
MitragynaRotundifoliaKuntze.byHPLC
HEGuang-dong1, 2 , YUHai-ping3 , JIZhi-qiang1, 2 , KANGWen-yi1, 2＊
(1.InstituteofNaturalProducts, HenanUniversity, Kaifeng475004, Henan, China;2.PharmaceuticalColege, Henan
University, Kaifeng475004, Henan, China;3.ChinaMedicalScienceandTechnologyPublishingHouse, Beijing100088,
China)
Abstract:TodeterminethemassfractionsofcatechininthestembarkofMitragynarotundifolia
Kuntze., HPLCwascarriedoutonaPurospherstarRP-C18 column(4.6 mm×250 mm, 5 μm,
Merck)at25 ℃ usingacetonitrile-H2O-phosphoricacid(10∶89.1∶0.9)asmobilephase, detection
wavelengthat278 nmandflowrateof1.0 mL/min.Thecalibrationcurvesofcatechinwerelinear
withintherangeof0.024 ～ 0.6μg(r=0.999 9).Theaveragerecoverywas104.68%.Thismethodis
reliable, accurateandsuitablefordeterminationofcatechin.Thenoveltyofthisworkhasbeen
confirmedinTechnologyNoveltySearchReportNo.2008001 providedbyLibraryofHenanUniversity
onJuly2, 2008.
Keywords:HPLC;MitragynarotundifoliaKuntze.;catechin;modernizationtechnologyoftraditional
Chinesemedicines
Foundationitems:SupportedbyfoundationresearchplanofHenanprovinceEducationCommision
(2008A360002)andfoundationforefrontplanofHenanprovinceScienceandTechnologyCommision
(0723004502)
　　帽蕊木(MitragynarotundifoliaKuntze.)为茜草 科(Rubiaceae)帽蕊木属(MitragynaL.)植物 。约有
＊ 收稿日期:2008-06-04;定用日期:2008-08-06
基金项目:河南省教育厅基础研究计划(2008A360002);河南省科技厅基础前沿计划(0723004502)
作者简介:贺光东(1984-),男 ,河南南阳人 ,河南大学药学院硕士研究生 ,师从康文艺副教授 ,主要从事中药活性成分研究工作 ,电话:
0378-3880680, E-mail:hgd1116@yahoo.cn。
联系人:康文艺 ,男 ,副教授 ,研究方向为中药活性成分及新药研究 ,电话:0378-3880680, E-mail:kangweny@hotmail.com。
DOI :10.13550/j.jxhg.2008.12.022
10种 ,非洲分布 4种 ,亚洲 6种 ,分布在印度 、孟加
拉 、缅甸 、泰国和老挝等国家[ 1 ～ 3] 。我国仅有 1
种 [ 4, 5] 。帽蕊木属植物化学成分主要是吲哚类生物
碱和三萜类化合物 ,药理研究显示它具有抗肿瘤 、防
治心血管疾病和抗菌活性 [ 7 ～ 9] 。作者持续对其进行
了化学与生物活性研究[ 10 ～ 12] ,首次发现帽蕊木茎皮
中存在高质量分数的儿茶素(catechin)。儿茶素具
有降血脂 [ 13] 、降血糖 [ 14] 、抗突变 [ 15] 和清除自由
基 [ 16]等活性。
本文以儿茶素为指标 ,建立了 HPLC测定儿茶
素质量分数的方法 ,可用于帽蕊木茎皮的药用研究
与开发 。文章报道工作的新颖性已为河南大学图书
馆 2008年 7月 2日出具的第 2008001号《科技查新
报告》所证实 。
1　仪器与试药
1.1　仪器
日本岛津 LC-2010A高效液相色谱仪 , CLASS
-VP色谱工作站 , UV-2010A检测器 ,自动进样
器 ,柱温箱 ,四元低压梯度泵。
试剂:甲醇为 CG,水为高纯水;其余试剂均为
AR。
1.2　试药
儿茶素标准品由本研究所自制 ,质量分数为
98%。帽蕊木茎皮于 2006年 10月采自云南西双版
纳地区 ,经中国科学院西双版纳植物园崔景云高级
工程师鉴定为茜草科帽蕊木属植物帽蕊木
MitragynarotundifoliaKuntze.,标本存于河南大学天
然药物研究所(No.0610221)。
2　实验部分
2.1　色谱条件
色谱柱:PurospherstarRP-C18色谱柱(4.6 mm
×250 mm, 5 μm,德国 Merck公司);流动相 V(乙
腈)∶V(高纯水)∶V(磷酸)=10∶89.1∶0.9;检测波长
278nm;流速 1 mL/min;柱温 25 ℃;进样量 20 μL;
在此条件下样品中儿茶素与其他成分分离度 R>
1.5,保留时间适中 ,理论板数 N>9 000。
2.2　对照品溶液的制备
取儿茶素对照品适量 ,精密称定 ,加纯甲醇制成
每 1 mL含 120 μg儿茶素的溶液 ,得对照品储备液 。
精密量取对照品储备液 1 mL于 5 mL容量瓶中 ,加
入甲醇定容至 5mL即得每 1mL含 24 μg儿茶素的
对照品溶液 。
2.3　供试品溶液的制备
将干燥的帽蕊木茎皮粉碎 ,过 60目筛 。精密称
取药材 30 mg,置 10 mL容量瓶中 ,精密加入 φ(甲
醇)=50%的水溶液 8 mL,静置 12 h,超声提取 20
min, 放冷 , 定容到 10 mL, 摇匀 , 微孔滤膜 (0.45
μm)过滤 ,即得供试品溶液。
2.4　线性关系考察
精密吸取不同量的对照品溶液 ,注入液相色谱
仪 ,测定峰面积 。以进样量(μg)为横坐标 ,峰面积
为纵坐标 , 绘制标准曲线 , 结果表明 , 儿茶素在
0.024 ～ 0.6 μg呈良好线性关系 ,回归方程为:
Y=9.40×105X+26.90, r=0.999 9
2.5　精密度实验
取同一对照品溶液 10 μL,连续进样 5次 ,测儿
茶素峰面积 ,其 RSD为 0.54%。
2.6　稳定性实验
精密吸取室温放置的同一批号的帽蕊木叶供试
品溶液 20 μL,分别于 0、2、4、6、8、10、12 h进样 ,测
定 ,所得儿茶素峰面积的 RSD为 0.56%。表明供试
品溶液在 12h内稳定 。
2.7　重复性实验
精密称取同一样品 6份(每份 0.030 g),按 2.3
节方法制备样品溶液。各进样 20 μL,测定峰面积 ,
峰面积 RSD为 1.03%,表明本方法重现性良好 。
2.8　加样回收率实验
称取已知儿茶素质量分数的帽蕊木茎皮粉末
30 mg置于 10 mL容量瓶中 ,平行 6份 ,分别精密加
入对照品储备液 0.4 mL(含儿茶素 0.048 8 mg),按
2.3节方法制备供试品液 ,按 2.1节色谱条件测定
儿茶素的质量分数 ,计算回收率。实验结果见表 1。
表 1　加样回收率实验结果(n=6)
Table1　Resultsoftherecoverytest(n=6)
取样量/g
样品中儿茶素量/mg
儿茶素加入量/mg
测得总量/mg 回收率/%
平均回收率/%
RSD/%
0.0306 0.0420 0.0488 0.0908 108.81
0.0300 0.0412 0.0488 0.0932 106.61
0.0312 0.0428 0.0488 0.0920 100.74 104.68 2.74
0.0288 0.0395 0.0488 0.0902 103.90
0.0296 0.0406 0.0488 0.0920 105.30
0.0288 0.0395 0.0488 0.0897 102.69
2.9　样品的测定
精密称取帽蕊木茎皮干燥粉末 30 mg,平行 3
份 ,制备供试品溶液 ,测定其中儿茶素的质量分数 ,
结果见图 1、2和表 2。
3　结果与讨论
3.1　色谱条件的选择
·1199·第 12期 贺光东 , 等:HPLC法测定帽蕊木茎皮中儿茶素的质量分数
3.1.1　检测波长的选择
用适当质量分数的儿茶素对照品溶液 ,以甲醇
作空白 ,在 200 ～ 400 nm扫描 , 278 nm有最大吸收 ,
因此 ,选择 278 nm作为检测波长。
表 2　帽蕊木茎皮中儿茶素的质量分数测定
Table2　Resultsofdeterminationofcatethininthestembarkof
MitragynarotundifoliaKuntze(n=3)
批号 儿茶素质量分数/% 平均质量分数/% RSD/%
1 1.40
2 1.36 1.37 1.44
3 1.37
3.1.2　流动相条件的选择
在选择儿茶素的分离条件时 ,曾选用甲醇 -
0.1%磷酸水溶液 (0.1%磷酸水溶液是指体积分
数 ,下同)和乙腈 -0.1%磷酸水溶液等不同系统 ,
结果表明 , V(乙腈 )∶V(高纯水 )∶V(磷酸 )=
10∶89.1∶0.9 ,流速为 1.0 mL/min时分离效果最佳 ,
儿茶素与其相邻峰的分离度大于 1.5,符合定量分
析要求 ,保留时间适中 。故选定 V(乙腈)∶V(高纯
水)∶V(磷酸)=10∶89.1∶0.9,流速 1.0 mL/min为分
离条件 。
3.2　提取条件的筛选
儿茶素溶于含水的醇。作者考察了体积分数分
别为 25%、50%、75%、100%的甲醇水溶液的提取
效果 ,发现体积分数为 50%的甲醇水溶液提取率最
高。在此基础上又考察了提取时间 20、 30和 40
min,结果显示提取 20 min已经提取完全 ,故最终确
定提取条件为用体积分数 50%的甲醇水溶液 ,提取
20 min。
4　结论
本文首次建立了帽蕊木茎皮中儿茶素的质量分
数测定方法。此方法稳定 、可靠 、操作简单 ,重现性
好 ,可以用作帽蕊木茎皮的质量控制 ,为帽蕊木茎皮
的开发利用提供了依据 。
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