全 文 ：药学学报Ae zaPhr am aceu t ie a Sin ie a1 98 9 ;4 2( 3 ): 2 65、1 6 9
蕊木宁F 对小鼠实验性肝损伤的保护作用
张 杰 . 刘耕陶
( 中国医学科学院药物研究所药理二室 , 北京 1 00 0 5 0 )
提要 蕊木宁 ( k o p , i n ; n e) (F K 一 F ) 系自云南蕊木提出的一种叫噪类生 物碱 。 该成分对小鼠因
注射 C C I ; , 硫代乙酞胺 , T A A 及 扑热 息痛引起的肝损伤有明显的保护 作用 , 使血 清谷丙转氨酶
降低 , 肝脏病理损害减轻 。 该成分对 C CI . 引起的肝微粒体脂质过氧化反应和 ’ ` C cl . 与肝微粒体进
行的共价结合亦有抑制作用 。 此外 , K 一 F还能提高小鼠的肝微粒体细胞色素 P 一 450 活性 。 以上结果
提示蕊木宁F对小鼠实验性肝损害有保 护作用 。
关键词 蕊术宁 F ; 四氯化碳中毒 ; 脂质过氧化反应 ; 微粒体细胞色素 P一 4 5。。
蕊木是云南的一 种民间草药 , 常用于治疗水肿 , 扁桃体炎及风湿骨痛 `” 。 冯孝章等 `2 ’ 自
蕊木中分离多种化学成分 。 黄婉云等 ` “ , 毛’ 对其中的蕊木宁 A ( k o sP in in e A ) 的药理作用进行
的研究 , 发现该化合物对小鼠有抗化学性肝损伤及诱导肝微粒体细 胞 色 素 P 一 4 50 的作用 。 J
还有其它成分如蕊木宁 B , D , H , F , T , 其结构式与蕊木宁相似 (图 l ) , 均为明噪类生
物碱 。 本文报告蕊木宁 (F K 一 )F 等化合物对肝脏的生化药理作用 。
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T h e e h e m i e a l s t r u e t u r e s 户 f k o P s 豆n i n e F a n d i t s d e r j v a 戈iv e s .
材 料 和 方 法
实验动物选用昆明种雄性小白鼠 , 体重为 19~ 24 9 。
蕊木宁 B , D , F , H , T 由本所植化室冯孝章提供 。 K 一 F用 2%吐 温一 80 配成悬液 p o
`今C C I ; 和 N A D P H购 自英国 A m e r s h a m和美国 S i g m a 公司 。
本文于 1 98 8年 3 月2 0 日收到 。
青海省药品植验药物研究所
DOI : 10. 16438 /j . 0513 -4870. 1989. 03. 002
药学学报A e t a Phr a m ae eu*i e a Si ni e a 19 9 8 ;2 4( 3 ): 1 65 、 1 69
血清谷丙酶( SG PT ) 和谷草酶( sG O T ) 活力按金氏法 `“ ’测定 。 甘油三醋按改 良费氏法 “ ’
测定 。 用LO wr y 踌` , 测定肝脏蛋白质 。 肝微粒体制备 ` 8 ,及微粒体内细胞色素 P 一 45 0 `” , 细胞
色素 b 。 ( `“ ’和 N A D P H 细胞色素C 还原酶 “ ` ’ 分别按文献方法测定 。 丙二酞乙醛 ( M D A ) 的测
定用硫代巴比妥酸显色祛 “ 2 ’ , ’ 4 C C I ; 与肝微粒体脂质共价结合的测定见文献 ( 1 3 ) 。
实 验 结 果
一 K 一 F对 c cl 4 、 硫代乙酸胺 ( T A A )及扑热息痛引起的小鼠肝脏损害的保护作用实验中每组小鼠 9 只 , 给药组于第 1 天 p o K 一 F二次 , 间隔 s h 。 对照组给等容积 2%吐
温一 80 水溶液 。 于第二次给药 24 h 后 ,各组动物 iP 0 . 1% C 1C 4一菜仔油溶液 10 m l / k g , T A A
5 0 m g / k g 或扑热息痛 1 50 示 g / k g , 注射后禁食 i 6 h , 断头 、 取血 、 测定 S G p T , SG O T 。 取
肝组织测定甘油三醋 。 再取一小块肝组织用 10 %福尔马林固定 , 做病理形态学观察 。
结果表明 , K 一 F能明显降低由于注射C C 14 , T A A 及扑热息痛所引起的 S G P T及 S G O T 升
高 。 在 C C I毛动物实验中 , K 一 F 7 5 m g / k g 作用非常强 , 但低剂量组 3 7 . 5 二 g / k g 作用不明显 。
上述的两种剂量对肝脏甘油三醋含量均无明显影响 (表 1 ) 。
T a b 1
.
E f f e e t o f k o P s l n i n
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( 1 50 m g / k g )
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从 C 1C 4 动物模型肝脏的病理观察表明 , C CI ` 对照组肝细胞坏死等病 变 明显 , K 一 F 加
c cl
` 组肝细胞坏死等病变均减轻 。
二 . 五种蕊木成分对 C 1C 4诱导肝微粒体脂质过氧化反应及 ’ 峨C !C ; 与肝微粒体脂质共价结合
的影响
(一 ) 对 C 1C 4 引起脂质过氧化的影响
将溶于二甲基甲酸胺的蕊木宁 B , D , , F , H , T 溶液分别加入用苯巴比妥 钠 80 m g / ( K g
·
d ) x 3 诱导的大鼠肝微粒体蛋白 1 m g , o . s m l f磷酸 缓 冲 液 ( 。 . l m ol / L , p H 7 . 4) , 化合物
终浓度为 1 m m o l / L , 加 2 扭m o l / L N A p p H , 3 7 o c 水浴保温 1 5 m i n , 加 o · 3 m l 2 0%三氯醋
酸终止反应 , 用硫代巴比妥酸液显色法测定脂质过氧化产物 M D A的生成量 。 结果表明 , K 一 F
等成分均能降低C C I` 诱发的 M D A 生成量 (表 2 ) 。
(二 ) 对 ’ 4 C C 14 与肝微粒体脂质共价结合的影响
将苯巴比妥钠诱导的大鼠微粒体蛋 白 3 m g与 T M S缓冲液 o . 7 m l ( p H 7 . 4 ) ,加 Z m m ol / L
药学学报 A e ta P h a rm a e e u ti e a S in i e a 19 8 9 ; 24 ( 3 ) : 1 6 5 、 16 9
T a b 2
.
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, 混合 , 分别加蕊木素 B , D , F , 11 , T , 温孵液总体积为 1 m l , 待 试化合物终
浓度为 1 m m o l / L 。 3 7 o C 保温 20 m i n后 , 加 1 . 8 5 x l o 4 B q ( 0 . 5砰C i ) ` 4 C C 14 , 再保 温 6 0 m i n ,
用氯仿一甲醇提取脂质 , 洗脱 、 挥发干 , 加二氧六环闪烁液 , 用 B o ck m a n液体闪烁仪计数结
合于脂质的放射性活性 。 结果如表 2 所示 , 除蕊木宁 D 外 , 其它 4 种化合 物 均对 ’ 4C CI 、 与
微粒体脂质的共价结合有一定的抑制性影响 。
三 . 对肝微粒体细胞色素 P 一 4即的诱导作用
将 16 只小鼠分为 3 组 , 给药组 6 只 p o K 一 F 1 50 m g (/ k g · d) x 3 。 正常对照组 6 只给相
等体积 2%吐温一 80 赋形剂 。 阳性对照组 4 只 , 每 日 i p 苯巴比妥钠 80 m g / ( k g · d) x 3 。 最后
一次给药后 , 禁食 16 h , 断头 , 称肝重 ,用 1 . 15 % K CI 一 o . l m m ol / L 磷酸缓冲液 ( p H 7 . 4)
制备成 25 %肝匀浆 , 分离肝微粒体 。 测定微粒体蛋白含量 , 细胞色素 P 一 45 0 , 细胞色素 b s和
N A D P H
一细胞色素 C还原酶 。 结果表明 , K 一 F可使上述 4 项生化指标的 含 量 及 活 性明显增
加 。 提示 K 一 F对肝微粒体细胞色素 P 一 45 0有诱导作用 (见表 3 ) 。
T a b 3
.
I n d u e t i o n b y k o P s i n三n o F ( 150m g / ( k g · d ) x 3 p o ) o f h e P a t i e m i e r o s o m a l
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P e n t o b a r b i t a l s l e e P i n g t i m e
,
m i n 4 1土 6 1 6土 3 < 0 . 0 1
另将 20 只小鼠均分为两组 , 给药组 p o K 一 F 15 0m g (/ k g · d) x 3 。 对照 组 给 相等体积的
2 %吐温一 80 。 最后一次给药 24 h后 , 腹腔注射戊巴比妥钠 50 m g / k g , 以翻 正反射的消失和
恢复为指标 , 观察入睡动物数及平均睡眠时间 。 结果表明 , K 一 F给药 3 次 , 可明显缩短戊巴
比妥钠引起的小鼠睡眠时间 。 睡眠时间的缩短提示小鼠肝脏代谢戊巴比妥钠的速度加快 。 此
现象符合上述 K 一 F使肝微粒体细胞色素 P一 4 50 含量增加的结果 。
讨 论
C C I ; 和 T A A是特异性的损伤肝脏化学毒物 。 扑热息痛虽为解热药 , 但大剂 量能引起人
1 6 8 药学学报A e r a Ph a r m a e e u t i e aS i n i e a29 89 , 2 4 ( 3 ) : 1 65` 1 6 9
和动物肝坏死 。 这些毒物损伤肝组织的机制有的已经比较清楚 。 其中 以 C CI ; 为例 , 它经肝
微粒体细胞色素 P 一 45 0 代谢激活后 , 生成有毒的三氯甲基 自由基 , 非常活跃 , 诱发肝内质网
膜脂质过氧化反应 , 生成M D A , 与膜上脂质及蛋白质发生共价 (不可逆 ) 交联 , 膜结构和功
能均受到损伤 , 导致肝细胞坏死 , 细胞浆内转氨酶渗人血液 , 结果转氨酶活性升高 , 肝脏合
成蛋 白质亦发生障碍 , 甘油三醋不易被脂蛋白载出肝组织外至血循环 , 中性脂肪便积蓄于肝
组织 中 , 导致脂肪肝的形成因素之一 。 本研究结果表明 , K 一 F能降低 C CI 、 , T A A 及 扑 热息
痛损伤肝脏所引起的血清转氨酶水平升高 , 并可减轻肝的病理形态损害 。 体外实验证明 , K 一 F
对 C CI ` 弓!起的肝微粒体脂质过氧化及 ’ 4 C C I ; 与微粒体脂质的共价交 联 均 有 一定的拮抗作
用 。 蕊木的其它几种成分由于药量过少 , 未能进行整体动物实验 , 但体外实验结果表明 , 蕊
木宁B , D , H , T , 亦均能抑制 C 1C 4 引起的脂质过氧化产物 M D A 的生 成 。 对 ’ 4 C 1C 4 与肝
微粒体脂质的共价结合 , 除蕊木宁 D 外 , 其它几种成分亦均有一定抑制性影响 。 联系到我们
过去的研究结果 , 可以认为 , 蕊木所含的多种引噪类生物碱对化学性肝损伤均有不同程度保
护作用 , 其作用原理很可能是抑制毒性产物对膜结构的损伤 。
肝脏是机体重要的解毒器官 ,而梦予解毒作用的关键酶是位于微粒体的细胞色素 P 一 4 5 。 ,
许多内源性和外源性物质如类固醇 、 胺类 、 药物 、 食品添加剂及环境污染化学物等 , 在体内
的解毒均需细胞色素 P 一 4 50 的参加 。 本研究结果指出 , K 一 F亦有诱导小鼠肝微粒体细胞色素
P 一 4 50 的作用 。 因而肝脏的解毒能力提高 。 看来蕊木的多种成分具有保肝和提高肝脏解毒功
能的作用 , 至于这些成分是否对肝炎有治疗意义尚需进一步研究 。
参 考 文 献
1
. 中国科学院中国位物 志编辑委员会 . 中国植物志 . v o1 63 · 北京 , 科学出版社 1 9 7 7 ; 4 1 .
2
.
F e n g x Z
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A l e a l o i d e s i n d o l iq u e s m o n o e r e s d e K o p s i a o f f i C i n a l i s
.
p l a n t a 万 e d 1 9 53 ; 峨8 : 2 8 0 .
3
. 黄婉云 、 刘耕陶 . 蕊木宁对小鼠实验性肝损伤的保护作用 . 中国药理学报 1 9 8 9 ; 1:0 6 5 .
d
. 黄婉云 、 刘耕陶 . 蕊木宁抗四抓化碳肝损伤作用的机理 . 同上 待发表
5
. 上海市立医学化验所主编 . 实用临床检验 . 上海 : 科学技术出版社 . 19 65 : 刁01 .
上海市第六 人民医院检验组 . 血清甘油三醋简 易快速测定法 . 医学情况交流 1 97 5 ; ( 5 )
L o w r y O H
.
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.
J B i o l C h 心仍 19 6 ` 1 ; 2 3 9 : 23 7 0 .
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.
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.
P r o p e r t i e s o f N A D p H e y t o e h r o m e p
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1 1
.
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1 2
.
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药学学报 A e t a P h a r m a e e u r i e a S i n i e a 2 9 5。 ; 2 4 ( 3 ) : 1 6 5~ 1 6 9 1 6 9
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T h e a l k a l o i d a l s o i n h i b i t e d C C 14 i n d u e e d l iP i d P e r o x i d a t i o n (M D A
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K e y w o r d s K o P s i n i n e F ; C C 14 i n t o x i e a t i o n ; L IP i d P e r o x i d a t i o n ; C y t o e h r o m e
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李
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物监测及与毒理学的联系 ; 最后介绍了多种在生物样品中测定药物的方法 , 包括同
位素 、 放射免疫 、 H P L C , G C及 G C一 M C联用等 。 执笔人都是从事药物代谢 研 究
多年 , 有较丰富经验的学者 , 既有理论阐述 , 又有实践经验的总结 。
读者对象 : 医药院校师生 , 临床医生 、 临床药理 、 临床药学 、新药研究和开发 、
药检工作者及药政管理人员 。
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