全 文 ：广东土牛膝合剂体外抗菌活性的研究
邓卫东 ,张文斌 ,莫玉芳
(佛山市第一人民医院 ,广东 佛山 528000)
摘要:目的 研究本院制剂广东土牛膝合剂对常见病原菌的体外抗菌活性 , 为制剂生产及临床用药提供实验依据。方法 采用抗菌实验
液体试管法 ,研究广东土牛膝合剂对 8种常见病原菌的体外抗菌活性 ,并测定最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)。 结果 试
验结果表明广东土牛膝合剂具有抗菌活性 , 对乙型溶血性链球菌 、肺炎球菌 、枯草芽孢杆菌 、金黄色葡萄球菌作用较强 ,对大肠杆菌有
效 ,而对肺炎克雷伯菌 、绿脓杆菌 、白色念珠菌抑菌作用弱 ,甚至无效。 结论 广东土牛膝合剂对阳性菌的抗菌活性较强 , 其作用机制
值得进一步研究。
关键词:广东土牛膝合剂;抗菌活性;最低抑菌浓度;最低杀菌浓度
中图分类号:R285.5　　　　　　文献标志码:A　　　　　　　文章编号:1673-4610(2010)07-0016-02
作者简介:邓卫东 , 主管药师 , Tel:13929904810, E-mail:dwdong@fsyyy.com
AntibacterialActivityResearchofChinese
EupatoriumRootMixtureinVitro
DENGWei-dong, ZHANGWen-bin, MOYu-fang
(TheFirstPeople′sHospitalofFoshan, Foshan, Guangdong528000, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheantibacterialactivityinvitroofChineseEupatoriumRootmixtureagainstcommon
pathogens, soastoprovideexperimentalreferenceforthepreparationproductionandtheclinicalmedication.Methods
TheantibacterialactivityinvitroofChineseEupatoriumRootmixtureagainst8 kindsofcommonpathogenswastestedby
liquidtesttubemethod.Theminimalinhibitoryconcentration(MIC)andminimumbactericidalconcentration(MBC)of
ChineseEupatoriumRootmixturewastested.ResultsChineseEupatoriumRootmixturehadobviousantibacterial
activityagainstthebacteriumofStaphylococcusaureus, Hemolyticstreptococcus, Pneumococcus, Bacilussubtilisandhad
notobviousantibacterialactivityforthebacteriumofEscherichiacoli, KlebsielaPneumoniae, P.aeruginosa, Candida
albicans.ConclusionChineseEupatoriumRootmixturehasobviousantibacterialactivityforthegram-positivebacteria.
ThemechanismofChineseEupatoriumRootmixturedeservesfurtherstudy.
Keywords:ChineseEupatoriumRootmixture;antibacterialactivity;MIC;MBC
　　广东土牛膝合剂(批准文号:粤 Z20070288)是本
院自行研制生产的中草药合剂 ,临床上广泛用于咽喉
炎 、急慢性扁桃体炎及因感冒引起的咽喉部不适 、痰多
咳嗽等 ,是本院所制的自制剂中用量最大且疗效得到
充分肯定的拳头产品 ,具有疗效好 、价格低廉 、毒副作
用少的特点。主要由广东土牛膝(ChineseEupatorium
Root)、岗梅(RadixIlicisAsprelae)按照 1∶1的比例加
水提取浓缩而制成的。本文在研究广东土牛膝合剂质
量控制标准的基础上 ,对广东土牛膝合剂治疗急性咽
喉炎的药效学进行了研究 ,现将其中体外抗菌活性实
验研究结果报告如下:
1　实验材料
1.1　试验用药液
广东土牛膝合剂浸膏(佛山市第一人民医院 ,半成
品 ,批号:20100325)。制备方法:取土牛膝 、岗梅用水
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PharmacyToday· 2010 7 Vol.20 No.7·
洗净 ,按 1∶1比例混合 ,加水过药面 ,煎煮 1.5 h,共 2
次 ,合并 2次滤液 , 煎液浓缩至 1∶1。
1.2　试验菌株
金黄色葡萄球菌(StaphylococcusaureusATCC25923)、
乙型溶血性链球菌(HemolyticstreptococcusATCC6305)、肺
炎球菌(PneumococcusATCC46629)、大肠杆菌(Escherichia
coliATCC25922)、枯草芽孢杆菌(BacilussubtilisATCC6633)、
肺炎克雷伯菌(KlebsielaPneumoniaeATCC13883)、绿脓
杆菌 (P.aeruginosaATCC27853)、白色念珠菌 (Candida
albicansATCC10231),标准菌株由美国标准菌株冷藏中
心提供。
1.3　试剂材料
增菌肉汤(购自北京天坛生物制品所),血平板 ,使
用符合《中国药典 》2005年版要求的细胞培养液及培
养基 。
2　试液的制备
2.1　菌液的制备
取经常规血平板培养基 37℃培养 18 ～ 24 h的金
黄色葡萄球菌 、乙型溶血性链球菌 、肺炎球菌 、大肠杆
菌 、枯草芽孢杆菌 、肺炎克雷伯菌 、绿脓杆菌;白色念珠
菌 25℃培养 24 ～ 48 h。分别吸取菌液用培养液稀释 ,
配成 0.5的麦氏比浊单位备用 。
2.2　供试液的制备
取广东土牛膝合剂浸膏加肉膏汤稀释至试验初始
浓度 0.8g/ml,煮沸 ,滤清 ,在 115℃灭菌 30 min备用。
2.3　增菌肉汤的配制
按试剂说明书配制后消毒备用 。
3　实验方法及结果
3.1　抗菌实验液体试管法 [ 1]
采用二倍稀释法 ,供试液用肉膏汤对倍稀释 ,从
8 ×10-1 g/ml起连续对倍稀释至 6.25 ×10-3 g/ml
共 8个药物浓度 ,每毫升含生药量分别为:8 ×10-1 、
4 ×10-1 、 2 ×10-1 、 1 ×10-1 、 5 ×10-2 、 2.5 ×10-2 、
1.25×10-2、6.25 ×10-3 g, 阳性对照为不含药液的
培养液 ,质控对照为不含试验菌的各浓度稀释液 。将
配好的各个浓度试管 115℃灭菌 30min;灭菌后放至室
温 ,将各个浓度管分别加入 0.1ml的各种试验菌液(培
养物), 37℃培养 24 h,白色念珠菌组 25℃培养 24 ～ 48 h
观察结果。
判定方法:经培养后 ,肉眼观察 ,如试验管呈现混
浊 ,表明有菌生长 ,药液无抑菌作用;如试验管呈现澄
明 ,摇匀后仍澄明者 ,则表明无菌生长 ,药液有抑菌作
用 。从无菌生长的各管中找出最低药物浓度的试验
管 ,该管的药物浓度即为该药的最低抑菌浓度(MIC)。
3.2　最低杀菌浓度(MBC)测定 [ 2 -4]
取上述 MIC及以上各浓度澄清透明液 0.1 ml转
种涂布于合适的血平板上 ,置 37℃恒温箱中培养 18 ～
24h,观察记录菌落数 ,菌落数少于 5个或未见细菌生
长的最低药液浓度为该药液的 MBC。
3.3　实验结果
3.3.1　MIC广东土牛膝合剂对 8种试验菌最低抑菌
浓度(结果见表 1)
3.3.2　MBC广东土牛膝合剂对 8种试验菌最低杀菌
浓度(结果见表 2)
表 1　MIC实验结果
金黄色
葡萄球菌
溶血性
链球菌
肺炎克
雷伯菌
大肠
杆菌
白色念
珠菌
枯草芽
孢杆菌
肺炎
球菌
绿脓
杆菌
最小抑菌浓度(g/ml) 2×10 -1 2.5×10-2 - 4×10-1 8×10-1 5×10-2 5×10-2 8×10-1
表 2　MBC实验结果
金黄色
葡萄球菌
溶血性
链球菌
肺炎克
雷伯菌
大肠
杆菌
白色念
珠菌
枯草芽
孢杆菌
肺炎
球菌
绿脓
杆菌
最小杀菌浓度(g/ml) 4×10 -1 5×10 -2 - 8×10-1 - 1×10-1 1×10-1 -
(下转第 20页)
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· 2010年 7月第 20卷第 7期 · 今日药学
取均匀的下层溶液作为样品溶液顶空进样 ,得到良好
的精密度 。
3.4　方法的准确性试验
采用外标法和标准加入法定量 ,二者的结果一致
均为 0.13%,且回收率试验平均为 101.5%,说明样品
的基质作用不明显 ,故采用操作更简单的外标法定量 。
3.5　样品检测中乙醇的残留量远低于标准的限度要
求 ,说明工艺中的残留溶剂控制良好 ,符合药物研究中
的有关规定。以上试验表明 ,本气相色谱法专属性强 ,
准确度高 ,方法简单快捷 ,可用于硝苯地平缓释片的残
留溶剂的监控 。
3.6　虽然小试样品只用到了乙醇一种有机溶剂 ,但可
将本方法推广到本品使用的其他水溶性的有机溶剂的
残留量的检测 ,也给做同类产品溶剂残留的同行一些
借鉴和参考 。
参考文献
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[ 2] 国家药典委员会.中国药典(二部)[ S] .北京:中国医
药科技出版社 , 2010:附录 VE, 附录 VII.
(收稿日期:2010-03-23)
(上接第 17页)
4　讨论
广东土牛膝合剂中广东土牛膝 [ 5]为菊科泽兰属植
物华泽兰 ,以根入药 ,其性味微苦 、凉;功能:清热解毒 ,
利咽化痰;主治:白喉 、扁桃体炎 、感冒发热 、肺炎 、支气
管炎等;岗梅为冬青科冬青属植物梅叶冬青 ,以根 、叶
入药 ,其性味苦 、甘 、凉;功能:清热解毒 ,生津止渴;主
治:感冒 、高热烦躁 、扁桃体炎 、咽喉炎 、气管炎 、百日
咳 、肠炎 、痢疾等。两药配伍 ,经提炼成合剂 ,主治咽喉
炎 、急慢性扁桃体炎及因上呼吸道感染引起的喉部不
适等 [ 6] 。既往研究证实土牛膝含有黄酮苷 、氨基酸 、有
机酸 、酚类 、生物碱及挥发油等多种成分 [ 7] , 具有抗菌 、
消炎和中和毒素等作用;岗梅具有明显抗菌作用[ 8] 。
实验结果表明 ,广东土牛膝合剂对阳性菌抗菌活性较
强 ,特别是对引起急慢性咽喉炎的溶血性链球菌及肺
炎球菌有明显的抑制作用 ,而对阴性菌作用较弱 ,甚至
无效 。因此 ,广东土牛膝合剂对阳性菌的作用机制及
治疗阳性菌引起的急慢性咽喉炎的药效学值得进一步
研究 。
参考文献
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(收稿日期:2010-04-16)
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